论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 英文缩略词 | 第16-19页 |
| 第1章 SIRT1 在切应力调控联合培养的内皮细胞增殖中的作用 | 第19-43页 |
| 1.1 引言 | 第19-21页 |
| 1.2 实验材料和方法 | 第21-27页 |
| 1.2.1 ECs 和 VSMCs 培养 | 第21-22页 |
| 1.2.2 ECs 和 VSMCs 联合培养模型及平行平板流动腔系统 | 第22-25页 |
| 1.2.3 BrdU 检测细胞增殖 | 第25页 |
| 1.2.4 流式细胞术检测细胞周期 | 第25页 |
| 1.2.5 蛋白免疫印迹检测 | 第25-26页 |
| 1.2.6 SIRT1 激活剂和抑制剂的应用 | 第26页 |
| 1.2.7 SIRT1 特异性 RNA 干扰技术 | 第26-27页 |
| 1.2.8 免疫荧光检测 | 第27页 |
| 1.2.9 统计学方法 | 第27页 |
| 1.3 实验结果 | 第27-36页 |
| 1.3.1 ECs 和 VSMCs 鉴定结果 | 第27-29页 |
| 1.3.2 切应力抑制了 ECs 的增殖 | 第29-30页 |
| 1.3.3 切应力激活了 ECs 的 SIRT1 表达，并对缝隙连接蛋白产生影响 | 第30-31页 |
| 1.3.4 干扰 SIRT1 和 Cx40 抑制了 EC 的增殖 | 第31页 |
| 1.3.5 干扰 SIRT1 促进了 ECs 的 Cx40 表达，而干扰 Cx40 抑制SIRT1 的表达 | 第31-32页 |
| 1.3.6 激活和抑制 SIRT1 对 ECs 的 Cx40 分布的影响 | 第32-33页 |
| 1.3.7 SIRT1 抑制剂 salermide 促进了切应力条件下联合培养的ECs 的增殖 | 第33-34页 |
| 1.3.8 干扰 SIRT1 促进了切应力条件下联合培养的 ECs 的增殖，并激活了 Cx40 的表达 | 第34-35页 |
| 1.3.9 SIRT1 激活剂白藜芦醇抑制了静态条件下联合培养的 ECs 的增殖，并抑制了 Cx40 的表达 | 第35-36页 |
| 1.4 讨论 | 第36-41页 |
| 1.4.1 血管细胞联合培养模型以及细胞增殖检测 | 第36-38页 |
| 1.4.2 不同实验中缝隙连接蛋白的表达分布不同 | 第38-39页 |
| 1.4.3 SIRT1 和 Cx40 互相调控 | 第39-40页 |
| 1.4.4 不同浓度的 SIRT1 激活剂 resveratrol 对 ECs 的作用不同 | 第40-41页 |
| 1.5 小结 | 第41-43页 |
| 第2章 SIRT6 在周期性张应变调控血管平滑肌细胞分化中的作用 | 第43-70页 |
| 2.1 引言 | 第43-45页 |
| 2.2 实验材料和方法 | 第45-49页 |
| 2.2.1 细胞周期性张应变加载装置 | 第45页 |
| 2.2.2 酶联免疫吸附试验 | 第45-46页 |
| 2.2.3 RT-PCR（逆转录和荧光定量 PCR） | 第46-48页 |
| 2.2.4 蛋白免疫印迹 | 第48页 |
| 2.2.5 免疫荧光 | 第48页 |
| 2.2.6 流式细胞术检测 ICAM-1 表达 | 第48页 |
| 2.2.7 特异性 RNA 干扰技术 | 第48-49页 |
| 2.3 实验结果 | 第49-64页 |
| 2.3.1 周期性张应变促进 VSMCs 向收缩表型分化 | 第49页 |
| 2.3.2 周期性张应变促进 VSMCs 分泌 TGF-β131 | 第49-51页 |
| 2.3.3 周期性张应变促进 VSMCs 的 Smad2/5 蛋白磷酸化，且使Smad4 表达增加 | 第51-53页 |
| 2.3.4 周期性张应变促进 VSMCs 的 SIRT6 和 c-fos 蛋白高表达 | 第53-54页 |
| 2.3.5 周期性张应变激活 VSMCs 的 ICAM-1 表达 | 第54-55页 |
| 2.3.6 周期性张应变对 VSMCs 的 p-Smad2，p-Smad5 和 SIRT6 分布的影响 | 第55-57页 |
| 2.3.7 重组 TGF-β1 激活 VSMCs 的 SIRT6 表达 | 第57页 |
| 2.3.8 TGF-β1 封闭性抗体抑制了周期性张应变对 VSMCs 的p-Smad2/5 和 SIRT6 的激活 | 第57-58页 |
| 2.3.9 干扰 TGF-β1 抑制了周期性张应变引起的 VSMCs 分化 | 第58-59页 |
| 2.3.10 特异性干扰片段显著抑制了 VSMCs 的 SIRT6 表达 | 第59-60页 |
| 2.3.11 干扰 SIRT6 抑制了周期性张应变引起的 VSMCs 分化 | 第60-61页 |
| 2.3.12 干扰 SIRT6 对周期性张应变引起的 VSMCs 分泌 TGF-β1 无影响 | 第61-62页 |
| 2.3.13 干扰 SIRT6 抑制了 VSMCs 的 Smad4 表达，但对 p-Smad2/5无影响 | 第62页 |
| 2.3.14 干扰 SIRT6 抑制了周期性张应变引起的 VSMCs 的 c-fos 激活 | 第62-63页 |
| 2.3.15 干扰 SIRT6 抑制了周期性张应变引起的 VSMCs 的 ICAM-1激活 | 第63-64页 |
| 2.4 讨论 | 第64-69页 |
| 2.4.1 张应变参数的选择 | 第64-65页 |
| 2.4.2 VSMCs 收缩表型标志分子 | 第65-67页 |
| 2.4.3 TGF-β1 浓度问题及各 Smad 亚型的功能 | 第67-68页 |
| 2.4.4 SIRT6 及其下有信号分子的研究结果 | 第68-69页 |
| 2.4 小结 | 第69-70页 |
| 全文结论 | 第70-71页 |
| 文献综述：Sirtuin 蛋白家族的研究进展 | 第71-82页 |
| 参考文献 | 第82-91页 |
| 附录 1 实验仪器 | 第91-92页 |
| 附录 2 主要溶液成分及配制 | 第92-94页 |
| 附录 3 试剂 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 攻读博士学位期间已发表的学术论文 | 第97-99页 |
| 附件 | 第99页 |
