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新型微孔水凝胶的制备及其在软骨组织工程中的应用研究

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新型微孔水凝胶的制备及其在软骨组织工程中的应用研究
论文目录
 
摘要第1-7页
Abstract第7-10页
缩略词简表第10-12页
目录第12-17页
第一章 绪论第17-40页
  1.1 引言第17页
  1.2 关节软骨第17-22页
    1.2.1 关节软骨的结构与功能第17-19页
    1.2.2 软骨的生长与退化第19-20页
    1.2.3 软骨损伤类型与修复第20-21页
    1.2.4 软骨修复面临的问题第21-22页
  1.3 软骨组织工程第22-32页
    1.3.1 种子细胞第23-26页
      1.3.1.1 软骨细胞第23-24页
      1.3.1.2 干细胞第24-26页
    1.3.2 生物支架材料第26-29页
      1.3.2.1 固体多孔支架第26-27页
      1.3.2.2 纤维第27页
      1.3.2.3 水凝胶第27-28页
      1.3.2.4 微载体第28-29页
    1.3.3 生物活性因子第29-32页
      1.3.3.1 生长因子第29-31页
      1.3.3.2 外界刺激第31-32页
  1.4 成软骨分化的影响因素第32-35页
    1.4.1 材料的成分对成软骨的影响第32-33页
    1.4.2 材料的结构对成软骨的影响第33-34页
    1.4.3 材料的机械性能对成软骨的影响第34-35页
  1.5 软骨修复发展趋势第35-36页
  1.6 本论文的研究目的、意义及主要内容第36-40页
第二章 软骨细胞的提取及鉴定第40-57页
  2.1 引言第40-41页
  2.2 材料与方法第41-48页
    2.2.1 实验材料第41-42页
    2.2.2 实验设备第42页
    2.2.3 实验方法第42-48页
      2.2.3.1 猪关节软骨细胞的提取第42-43页
      2.2.3.2 软骨细胞的培养及传代第43页
      2.2.3.3 CCK-8 法绘制生长曲线第43页
      2.2.3.4 软骨细胞形态观察第43-44页
      2.2.3.5 RT-PCR 分析 mRNA 水平变化第44-46页
      2.2.3.6 免疫组化观察第46页
      2.2.3.7 组织染色第46-47页
      2.2.3.8 免疫印迹分析蛋白表达第47-48页
  2.3 结果与讨论第48-55页
    2.3.1 软骨细胞形态变化第48-50页
    2.3.2 软骨细胞的生长曲线第50页
    2.3.3 软骨细胞体外培养的基因表达第50-51页
    2.3.4 组织切片染色分析第51-53页
    2.3.5 Ⅱ 型胶原免疫组化分析第53-54页
    2.3.6 Ⅱ 型胶原与糖胺聚糖蛋白的表达分析第54-55页
  2.4 本章小结第55-57页
第三章 微孔海藻酸钠水凝胶的制备及其对软骨细胞生长的影响第57-78页
  3.1 引言第57-59页
  3.2 材料与方法第59-65页
    3.2.1 实验试剂第59-60页
    3.2.2 实验仪器第60页
    3.2.3 实验方法第60-65页
      3.2.3.1 明胶微球的制备第60-61页
      3.2.3.2 微孔水凝胶体系的建立第61-62页
      3.2.3.3 软骨细胞的培养第62页
      3.2.3.4 扫描电子显微镜第62页
      3.2.3.5 细胞增殖第62-63页
      3.2.3.6 mRNA 转录水平的定时定量分析第63页
      3.2.3.7 活死染色第63-64页
      3.2.3.8 蛋白表达水平分析第64页
      3.2.3.9 数据处理与分析第64-65页
  3.3 结果与讨论第65-77页
    3.3.1 不同尺寸的明胶微球形貌第65-66页
    3.3.2 微孔水凝胶形成时间及溶胀性能第66-67页
    3.3.3 微孔海藻酸钠水凝胶内部结构第67-69页
    3.3.4 软骨细胞的增殖第69-70页
    3.3.5 明胶微球溶出时间及软骨细胞活性第70-73页
    3.3.6 RT-PCR 检测软骨基因的表达第73-75页
    3.3.7 Western blotting 检测特异蛋白表达第75-77页
  3.4 本章小结第77-78页
第四章 微孔水凝胶对去分化软骨细胞再分化的影响第78-98页
  4.1 引言第78-79页
  4.2 材料与方法第79-86页
    4.2.1 实验试剂第79-80页
    4.2.2 实验仪器第80-81页
    4.2.3 实验方法第81页
      4.2.3.1 去分化软骨细胞的培养及传代第81页
      4.2.3.2 微孔水凝胶包埋去分化软骨细胞体系的建立第81页
    4.2.4 测试与表征第81-86页
      4.2.4.1 扫描电镜第81-82页
      4.2.4.2 活死染色第82页
      4.2.4.3 糖胺聚糖定量表达检测第82页
      4.2.4.4 RT-PCR 检测基因表达第82-83页
      4.2.4.5 Westernblot 检测蛋白表达第83-84页
      4.2.4.6 组织染色第84-85页
      4.2.4.7 免疫组化分析第85页
      4.2.4.8 数据处理与分析第85-86页
  4.3 结果与讨论第86-96页
    4.3.1 去分化软骨细胞培养体系的建立第86-87页
    4.3.2 去分化软骨细胞的再分化基因表达检测第87-89页
    4.3.3 GAG 定量分析第89-90页
    4.3.4 组织切片与染色分析第90-93页
    4.3.5 Ⅰ 型与 Ⅱ 型胶原免疫组化分析第93-95页
    4.3.6 Westernblot 分析第95-96页
  4.4 本章小结第96-98页
第五章 RGD 修饰的微孔水凝胶对 ATDC5 细胞成软骨分化的影响第98-118页
  5.1 引言第98-99页
  5.2 材料与方法第99-105页
    5.2.1 实验试剂第99-100页
    5.2.2 实验仪器第100-101页
    5.2.3 实验方法第101-105页
      5.2.3.1 RGD 修饰微孔海藻酸钠水凝胶第101-102页
      5.2.3.2 ATDC5 细胞的培养第102页
      5.2.3.3 扫描电镜第102页
      5.2.3.4 全氨基酸分析第102-103页
      5.2.3.5 核磁共振分析第103页
      5.2.3.6 细胞增殖第103页
      5.2.3.7 组织学观察第103页
      5.2.3.8 基因与蛋白分析第103-104页
      5.2.3.9 数据处理与分析第104-105页
  5.3 结果与讨论第105-117页
    5.3.1 RGD 改性海藻酸钠水凝胶的机理第105页
    5.3.2 ATDC5 细胞形貌第105-106页
    5.3.3 RGD 修饰的微孔海藻酸钠水凝胶形貌分析第106-107页
    5.3.4 核磁共振分析第107-108页
    5.3.5 全氨基酸分析第108-109页
    5.3.6 ATDC5 细胞增殖第109-110页
    5.3.7 成软骨分化基因表达分析第110-113页
    5.3.8 组织切片与染色分析第113-115页
    5.3.9 Westernblot 分析细胞外基质蛋白表达第115-117页
  5.4 本章小结第117-118页
全文总结与展望第118-121页
本论文的创新性第121-122页
参考文献第122-137页
攻读博士学位期间取得的研究成果第137-139页
致谢第139-140页
附件第140页

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