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Martentoxin抗惊厥及其锚定BK通道靶标的分子机制研究

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Martentoxin抗惊厥及其锚定BK通道靶标的分子机制研究
论文目录
 
摘要第1-8页
ABSTRACT第8-11页
目录第11-16页
缩略词表第16-17页
第一章 绪论第17-35页
  1.1 BK 通道的结构与功能第17-27页
    1.1.1 BK 通道简述第17页
    1.1.2 BK 通道α亚基的结构第17-18页
    1.1.3 BK 通道β亚基的结构第18页
    1.1.4 BK 通道γ亚基的结构第18-20页
    1.1.5 BK 通道亚型的多样性第20-22页
    1.1.6 BK 通道β亚基的 N-糖基化第22页
    1.1.7 BK 通道的电压和钙依赖性激活机制第22-23页
    1.1.8 BK 通道的生理与病理学特征第23-27页
  1.2 BK 通道的药理学研究第27-32页
    1.2.1 BK 通道激动剂第27-28页
    1.2.2 BK 通道阻断剂第28-30页
    1.2.3 特异性 BK 通道配体:martentoxin第30-32页
  1.3 本文主要研究内容第32-35页
第二章 Martentoxin 对大鼠 PTZ 模型的抗惊厥效应第35-45页
  2.1 引言第35页
  2.2 材料与方法第35-37页
    2.2.1 实验动物和药品第35页
    2.2.2 动物手术第35-36页
    2.2.3 大鼠惊厥行为观察第36-37页
    2.2.4 脑电的采集和分析第37页
  2.3 实验结果第37-43页
    2.3.1 Martentoxin 对于 PTZ 诱发惊厥行为的影响第37-38页
    2.3.2 Martentoxin 对于 PTZ 诱发癫痫样脑电的影响第38-39页
    2.3.3 Martentoxin 对于 PTZ 复发惊厥行为的影响第39-41页
    2.3.4 Martentoxin 对于 PTZ 复发癫痫样脑电的影响第41-43页
  2.4 讨论第43-44页
    2.4.1 Martentoxin 抑制 PTZ 诱发的惊厥行为及癫痫样放电的机制第43-44页
    2.4.2 Martentoxin 阻断神经型 BK 通道的药理学意义第44页
  2.5 结论第44-45页
第三章 Martentoxin 独钟神经型 BK 通道的分子基础第45-63页
  3.1 引言第45页
  3.2 材料与方法第45-53页
    3.2.1 BK 通道质粒的制备第45-46页
    3.2.2 细胞培养第46-47页
    3.2.3 瞬时转染第47-48页
    3.2.4 同源建模第48页
    3.2.5 蛋白对接第48页
    3.2.6 BK 通道突变体和嵌合体的构建第48-51页
    3.2.7 电生理记录第51-52页
    3.2.8 溶液与药品第52-53页
    3.2.9 数据分析和统计第53页
  3.3 实验结果第53-60页
    3.3.1 Martentoxin 对神经型 BK 通道的抑制第53页
    3.3.2 Martentoxin 与 BK 通道模型的分子对接第53-55页
    3.3.3 Martentoxin 锚定 BK 通道(α+β4)靶标上的关键性对接残基第55-56页
    3.3.4 Martentoxin 对 BK 通道亚型(α)的低敏感性第56-58页
    3.3.5 Martentoxin 对嵌合体通道 BK(α+β1Lβ4)及 BK(α+β4Lβ1)的调制第58-60页
  3.4 讨论第60-61页
    3.4.1 神经型 BK 通道(α+β4)与 martentoxin 的相互作用模式第60-61页
  3.5 结论第61-63页
第四章 Martentoxin 对胶质瘤型 BK 和 BK(α+β1)通道的增强效应第63-83页
  4.1 引言第63页
  4.2 材料与方法第63-67页
    4.2.1 细胞培养及转染第63-64页
    4.2.2 电生理记录第64页
    4.2.3 钙离子荧光成像第64-65页
    4.2.4 溶液与药品第65页
    4.2.5 U251-MG 细胞增殖检测第65-66页
    4.2.6 数据分析第66-67页
  4.3 实验结果第67-77页
    4.3.1 gBK 通道在 U251-MG 胶质瘤细胞的表达丰度第67-68页
    4.3.2 NPPB 敏感的氯离子通道对 martentoxin 不敏感第68-69页
    4.3.3 Martentoxin 剂量依赖性地增强 gBK 通道的活性第69-71页
    4.3.4 Martentoxin 对 gBK 通道的钙依赖及电压依赖性调制第71页
    4.3.5 Martentoxin 对 BK(α+β1)通道的剂量及电压依赖性调制第71-75页
    4.3.6 Martentoxin 对 BK 通道(α+β1)的钙依赖性调制第75页
    4.3.7 Iberiotoxin 抑制 martentoxin 对 BK 通道(α+β1)活性的增强效应第75-77页
  4.4 讨论第77-81页
    4.4.1 Martentoxin 对 BK 通道亚型的选择性第77-78页
    4.4.2 Martentoxin 对 BK 通道亚型的钙依赖性调制第78-79页
    4.4.3 Martentoxin 增加 gBK 和 BK(α+β1)通道活性的机制第79-80页
    4.4.4 Martentoxin 是 BK 通道相关疾病研究的有效工具第80-81页
  4.5 结论第81-83页
第五章 Martentoxin 对β1 亚基去糖基化 BK 通道的药理调制作用第83-99页
  5.1 引言第83页
  5.2 材料与方法第83-87页
    5.2.1 β1 N80A/N142A 和β1 N80Q/N142Q 的构建第83-86页
    5.2.2 细胞培养及转染第86页
    5.2.3 Western Blot 分析第86-87页
    5.2.4 电生理记录第87页
    5.2.5 溶液及药品第87页
    5.2.6 数据分析第87页
  5.3 实验结果第87-94页
    5.3.1 糖基化的β1 亚基与 hSloα共表达于 HEK293T 细胞第87-89页
    5.3.2 β1 亚基的去糖基化改变了 BK(α+β1)通道的药理学性质第89-92页
    5.3.3 β1 亚基的去糖基化对 BK(α+β1)通道门控性质的影响第92-94页
  5.4 讨论第94-97页
    5.4.1 β亚基的去糖基化对 BK 通道亚型药理性质的调控作用第94-96页
    5.4.2 β1 亚基的去糖基化对 BK 通道亚型动力学性质的调控作用第96-97页
  5.5 结论第97-99页
第六章 martentoxin 的重组表达与功能鉴定第99-111页
  6.1 引言第99页
  6.2 材料与方法第99-103页
    6.2.1 实验材料第99页
    6.2.2 pGEX-4T-3-Martentoxin 质粒的构建第99-100页
    6.2.3 rMarTX 的体外表达与纯化第100-101页
    6.2.4 细胞培养及转染第101页
    6.2.5 电生理记录第101-102页
    6.2.6 溶液第102-103页
    6.2.7 多序列比对和 3D 建模第103页
    6.2.8 数据分析第103页
  6.3 实验结果第103-107页
    6.3.1 Martentoxin 的体外表达与纯化第103-106页
    6.3.2 rMarTX 对 BK 通道(α+β4)的抑制效应第106页
    6.3.3 rMarTX 对 Kv 通道的调制作用第106-107页
  6.4 讨论第107-109页
    6.4.1 Martentoxin 的重组表达第107-109页
    6.4.2 MarTX 的 N-末端保守性残基(Phe1)第109页
  6.5 结论第109-111页
第七章 总结与展望第111-113页
  7.1 结论第111页
  7.2 展望第111-113页
参考文献第113-131页
作者在攻读博士学位期间发表的论文第131-133页
作者在攻读博士学位期间所参与的项目第133-135页
致谢第135页

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