论文目录 | |
| 中文摘要 | 第12-19页 |
| 英文摘要 | 第19-26页 |
| 第一部分 文献综述 | 第26-56页 |
| · 转基因植物的发展现状 | 第27-32页 |
| · 世界转基因植物发展概况 | 第27-29页 |
| · 我国转基因植物发展现况 | 第29-32页 |
| · 转基因植物的生物安全性问题 | 第32-56页 |
| · 转基因植物生态环境的安全性问题 | 第34-42页 |
| · 转基因植物杂草化问题 | 第34-35页 |
| · 转基因逃逸及其对近缘物种潜在的影响 | 第35-37页 |
| · 转基因植物中外源基因对非靶标生物的危害 | 第37-39页 |
| · 转基因植物对生物多样性的影响 | 第39-40页 |
| · 转基因植物中抗病毒外源基因潜在的生态风险 | 第40-42页 |
| · 转基因食品的安全性问题 | 第42-44页 |
| · 转基因食品可能对人类造成的直接危害 | 第42-43页 |
| · 转基因食品的过敏问题 | 第43页 |
| · 转基因植物中抗生素标记基因产生的影响 | 第43-44页 |
| · 目前解决转基因植物安全性问题的手段 | 第44-56页 |
| · 防止转基因植物中外源基因逃逸的手段 | 第44-47页 |
| · 花粉不育技术 | 第44-45页 |
| · 种子不育或无籽的生物技术 | 第45-46页 |
| · 叶绿体转基因技术 | 第46-47页 |
| · 转基因植物中外源基因的删除技术 | 第47-56页 |
| · 共转化技术 | 第48-49页 |
| · 转座子技术 | 第49-50页 |
| · 位点特异性重组酶技术 | 第50-56页 |
| 第二部分 引言 | 第56-60页 |
| · 本论文的立论依据 | 第56-58页 |
| · 实验设计和技术路线 | 第58-60页 |
| 第三部分 高效基因删除系统“Gene-Deletor”的建立 | 第60-148页 |
| 第一章 位点特异性重组酶系统中识别位点对删除效率的影响 | 第60-104页 |
| 摘要 | 第12-16页 |
| 关键词 | 第16-61页 |
| 前言 | 第61-62页 |
| · 材料 | 第62-65页 |
| · 植物材料 | 第62页 |
| · 菌株和质粒 | 第62页 |
| · 主要化学试剂 | 第62页 |
| · 主要仪器设备 | 第62-63页 |
| · 主要缓冲液配方 | 第63-64页 |
| · 主要培养基配方 | 第64-65页 |
| · 方法 | 第65-75页 |
| · 载体构建 | 第65-70页 |
| · 引物设计及序列合成 | 第65-68页 |
| · PCR扩增反应的条件 | 第68-69页 |
| · 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第69-70页 |
| · 琼脂糖凝胶上DNA片段的回收 | 第70页 |
| · 大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备和DNA连接产物的转化 | 第70页 |
| · 根癌农杆菌LAB4404感受态细胞的制备、转化和质粒DNA的提取 | 第70-72页 |
| · 根癌农杆菌感受态的制备及转化 | 第70-71页 |
| · 根癌农杆菌质粒DNA的提取 | 第71-72页 |
| · 烟草的遗传转化 | 第72页 |
| · 烟草基因组DNA的提取 | 第72-73页 |
| · 转基因植物GUS组织染色 | 第73页 |
| · 转基因植物的Km抗性筛选 | 第73页 |
| · 转基因植物与野生型的杂交 | 第73页 |
| · Southern杂交 | 第73-75页 |
| · 探针制备 | 第73-74页 |
| · Sephadex G-50层析柱的制备 | 第74页 |
| · 基因组DNA的制备、酶切和电泳 | 第74页 |
| · 转膜 | 第74页 |
| · 杂交和洗膜 | 第74-75页 |
| · 放射自显影 | 第75页 |
| · 结果与分析 | 第75-100页 |
| · 载体构建 | 第75-82页 |
| · 人工合成片段的克隆及序列分析 | 第75-76页 |
| · 花粉特异性启动子Lat52和Bgp的克隆及序列分析 | 第76-78页 |
| · GUS和NPTⅡ融合基因的构建 | 第78页 |
| · 载体pFBFGN、pFLCGN、pLFBFGN和pLFLCGN的获得 | 第78-82页 |
| · 烟草遗传转化的结果 | 第82页 |
| · 转基因烟草的鉴定 | 第82-87页 |
| · GUS组织染色的初步鉴定 | 第82-83页 |
| · 转基因烟草的PCR检测 | 第83-84页 |
| · Southern杂交检测 | 第84-85页 |
| · 转基因植株中外源基因拷贝数的确定 | 第85-87页 |
| · 转基因植株不同时期花粉的GUS组织染色结果 | 第87-88页 |
| · 转基因植株不同时期花粉的显微观察 | 第88-90页 |
| · 转基因植株与野生型杂交后代GUS组织染色结果的观察 | 第90-93页 |
| · 含不同识别位点特异性重组酶系统删除效率的统计及比较 | 第93-95页 |
| · 转基因pLFBFGN植物花粉中外源基因的Southern杂交检测 | 第95-96页 |
| · 转基因植物花粉基因组中残余外源片段的PCR检测 | 第96-98页 |
| · 转基因植物杂交后代中T-DNA残余片段的序列分析 | 第98-100页 |
| · 讨论 | 第100-104页 |
| 第二章 位点特异性重组酶系统中启动子对删除效率的影响 | 第104-136页 |
| 摘要 | 第12-16页 |
| 关键词 | 第16-105页 |
| 前言 | 第105-106页 |
| · 材料 | 第106-107页 |
| · 植物材料 | 第106-107页 |
| · 菌株 | 第106页 |
| · 主要化学试剂 | 第106页 |
| · 主要仪器设备 | 第106页 |
| · 主要缓沖液配方 | 第106-107页 |
| · 主要培养基配方 | 第107页 |
| · 方法 | 第107-110页 |
| · 载体构建 | 第107-108页 |
| · 引物的设计及合成 | 第107-108页 |
| · PCR的扩增条件 | 第108页 |
| · 烟草的遗传转化 | 第108页 |
| · 烟草总RNA的提取 | 第108-109页 |
| · RT-PCR扩增 | 第109页 |
| · 转基因植物的二次转化 | 第109页 |
| · 转基因烟草的热激处理 | 第109-110页 |
| · 转基因植物GUS组织染色 | 第110页 |
| · 转基因植物中GUS蛋白含量的测定 | 第110页 |
| · 结果与分析 | 第110-132页 |
| · 不同启动子序列的获得 | 第110-114页 |
| · Hsp·启动子的克隆及序列分析 | 第110-112页 |
| · pAB5启动子的克隆及序列分析 | 第112-114页 |
| · CaMV 35S启动子的获得 | 第114页 |
| · 载体构建 | 第114-118页 |
| · 载体p35S-Flp的构建 | 第114-116页 |
| · 载体pLFBFGN的获得 | 第116页 |
| · 载体pLFHFGN和pLFABFGN的构建 | 第116页 |
| · 所有表达载体的示意图 | 第116-118页 |
| · 转基因烟草的获得 | 第118页 |
| · 转基因烟草的检测 | 第118-120页 |
| · 转基因植物的GUS组织染色检测 | 第118页 |
| · 转基因植物的PCR检测 | 第118-120页 |
| · 不同转基因烟草形态观察及比较 | 第120-121页 |
| · 转基因pLFBFGN植物中不同组织的GUS染色结果 | 第121-122页 |
| · RT-PCR检测转基因pLFBFGN植物中FLP基因的表达水平 | 第122-124页 |
| · p35S-FLP转化转基因pLFGN植物后的GUS染色定量分析 | 第124-125页 |
| · 转基因pLFABFGN植物中不同组织的GUS染色结果 | 第125-126页 |
| · 转基因pLFABFGN植物自交和杂交后代GUS染色结果观察 | 第126-128页 |
| · 转基因pLFABFGN植物删除效率的统计 | 第128-129页 |
| · 转基因pLFHFGN植物热激处理后的GUS染色结果 | 第129-130页 |
| · 转基因pLFHFGN植物热激处理后的删除效率分析 | 第130-132页 |
| · 讨论 | 第132-136页 |
| 第三章 位 点特异性重组酶系统中重组酶对删除效率的影响 | 第136-148页 |
| 摘要 | 第12-16页 |
| 关键词 | 第16-137页 |
| 前言 | 第137-138页 |
| · 材料 | 第138页 |
| · 植物及菌株 | 第138页 |
| · 主要化学试剂、培养基和缓冲液配方 | 第138页 |
| · 方法 | 第138页 |
| · 载体构建 | 第138页 |
| · 烟草的遗传转化 | 第138页 |
| · 转基因植物GUS组织染色 | 第138页 |
| · 转基因植物的PCR检测 | 第138页 |
| · 转基因植物的杂交 | 第138页 |
| · 结果与分析 | 第138-145页 |
| · 载体的构建 | 第138-140页 |
| · pLFBFGN和pLFBFGN载体的构建 | 第138-139页 |
| · 载体pLFCFGN的获得 | 第139-140页 |
| · 表达载体的示意图 | 第140页 |
| · 转基因烟草的检测 | 第140-141页 |
| · 转基因植株不同组织的GUS染色结果 | 第141页 |
| · 转基因植株中外源基因拷贝数的确定 | 第141-143页 |
| · 转基因pLFCFGN植物的删除效率统计结果 | 第143-145页 |
| · 重组酶对系统删除效率的影响 | 第145页 |
| · 讨论 | 第145-148页 |
| 第三部分 内容总结:高效基因删除系统'Gene-Deletor”的获得 | 第148-150页 |
| 第四部分 杂交途径的基因删除系统 | 第150-164页 |
| 摘要 | 第12-16页 |
| 关键词 | 第16-151页 |
| 前言 | 第151-152页 |
| · 材料 | 第152页 |
| · 植物材料和菌株 | 第152页 |
| · 主要化学试剂、培养基和缓冲液配方 | 第152页 |
| · 方法 | 第152-154页 |
| · PCR扩增及序列分析 | 第152页 |
| · 载体构建 | 第152页 |
| · 烟草的遗传转化 | 第152-153页 |
| · 转基因植物的GUS组织染色 | 第153页 |
| · 转基因植物的PCR检测 | 第153页 |
| · 转基因植株中外源基因拷贝数的确定 | 第153页 |
| · 转基因植物纯合体的获得 | 第153-154页 |
| · 转基因植物的杂交 | 第154页 |
| · 结果与分析 | 第154-161页 |
| · 启动子Agl5的克隆及序列分析 | 第154-156页 |
| · 载体的构建 | 第156-157页 |
| · 载体pLFGN的构建 | 第156页 |
| · 载体pAgl-Cre的获得 | 第156-157页 |
| · 转基因烟草的PCR检测 | 第157-158页 |
| · 转基因烟草单拷贝植株的获得 | 第158-160页 |
| · 转基因单拷贝植株纯合体的获得 | 第160页 |
| · 转基因植物单拷贝纯合体杂交后代中删除效率的统计 | 第160-161页 |
| · 讨论 | 第161-164页 |
| 第五部分 主要结论及创新点 | 第164-168页 |
| 参考文献 | 第168-186页 |
| 附录1 英文缩写 | 第186-188页 |
| 附录2 常用缓冲液配方 | 第188-189页 |
| 附录3 学习期间参加的科研项目 | 第189-190页 |
| 附录4 发表和撰写的论文 | 第190-192页 |
| 致谢 | 第192-194页 |
