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重组人干扰素-γ在毕赤酵母中的表达及对乳腺癌抑制作用的研究

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重组人干扰素-γ在毕赤酵母中的表达及对乳腺癌抑制作用的研究
论文目录
 
中文摘要第1-8页
Abstract第8-14页
英文缩略词第14-15页
第1章 绪论第15-41页
  1.1 IFN 的分类第15-16页
    1.1.1 Ⅰ型 IFN第15-16页
    1.1.2 Ⅱ型 IFN第16页
    1.1.3 Ⅲ型 IFN第16页
  1.2 IFN 的生物活性第16-19页
    1.2.1 抗病毒作用第17-18页
    1.2.2 抗增生作用第18页
    1.2.3 促进细胞凋亡第18页
    1.2.4 免疫调节作用第18-19页
  1.3 IFN 的抗肿瘤机制第19-22页
    1.3.1 抑制肿瘤细胞增殖第19页
    1.3.2 阻断肿瘤细胞周期第19-20页
    1.3.3 促进肿瘤细胞凋亡第20-21页
    1.3.4 抑制肿瘤血管生成第21页
    1.3.5 抑制肿瘤端粒酶活性第21页
    1.3.6 免疫调节作用第21-22页
  1.4 干扰素在肿瘤治疗中的应用及其研究进展第22-30页
    1.4.1 Ⅰ型干扰素在治疗肿瘤中的临床应用第22-24页
    1.4.2 Ⅰ型干扰素联合其他方案第24-26页
    1.4.3 INF-γ的表达机制第26-27页
    1.4.4 INF-γ在肿瘤治疗中的临床应用第27-28页
    1.4.5 INF-γ联合用药对肿瘤的作用第28-29页
    1.4.6 Ⅲ型干扰素抗肿瘤的研究第29-30页
  1.5 乳腺癌第30-37页
    1.5.1 手术治疗第30-32页
    1.5.2 内分泌治疗第32-34页
    1.5.3 靶向治疗第34-36页
    1.5.4 INF-γ在乳腺癌治疗中的应用第36-37页
  1.6 基因工程常用的表达系统第37-41页
    1.6.1 大肠杆菌第37页
    1.6.2 酿酒酵母第37-38页
    1.6.3 毕赤酵母第38-41页
第2章 毕赤酵母表达的 rhIFN-γ的表达、纯化及鉴定第41-63页
  2.1 材料第42-46页
    2.1.1 主要仪器设备第42-43页
    2.1.2 主要试剂和配制第43-46页
  2.2 方法第46-54页
    2.2.1 hIFN-γ-pPICZ 表达工程菌的构建及高表达菌株的筛选第46-51页
    2.2.2 毕赤酵母分泌表达 rhIFN-γ条件的优化第51-52页
    2.2.3 利用 5 L 摇瓶发酵表达 rhIFN-γ第52页
    2.2.4 rhIFN-γ的纯化第52-54页
  2.3 结果第54-60页
    2.3.1 pPICZ -hIFN-γ表达工程菌的构建及高表达菌株的筛选第54-60页
  2.4 讨论第60-63页
第3章 rhIFN-γ的对人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞的体外抑制作用研究第63-85页
  3.1 材料第64-66页
    3.1.1 实验试剂第64-65页
    3.1.2 实验仪器第65-66页
  3.2 方法第66-73页
    3.2.1 细胞培养第66页
    3.2.2 MTT 实验第66-67页
    3.2.3 凋亡指数检测第67页
    3.2.4 细胞凋亡率检测第67-68页
    3.2.5 细胞周期检测第68页
    3.2.6 全蛋白提取第68-69页
    3.2.7 采用 BCA 法测定各处理组的蛋白浓度第69页
    3.2.8 免疫印迹第69-71页
    3.2.9 蛋白质的电转移第71页
    3.2.10 条带显影与分析第71-72页
    3.2.11 ROS 荧光检测第72页
    3.2.12 统计学处理第72-73页
  3.3 结果第73-79页
    3.3.1 不同浓度 rhIFN-γ处理对乳腺癌细胞增殖的影响第73-74页
    3.3.2 不同浓度 rhIFN-γ处理对细胞凋亡指数的影响第74-75页
    3.3.3 不同浓度 rhIFN-γ处理对细胞凋亡率的影响第75-76页
    3.3.4 不同浓度 rhIFN-γ处理对细胞周期的影响第76-77页
    3.3.5 不同浓度 rhIFN-γ处理对细胞活性氧自由基水平的影响第77页
    3.3.6 不同浓度 rhIFN-γ处理对凋亡相关基因表达的影响第77-78页
    3.3.7 不同浓度 IFN-γ处理对 PI3K/Akt 信号通路的影响第78-79页
  3.4 讨论第79-85页
第4章 rhIFN-γ的对人乳腺癌移植瘤模型的体内抑制作用研究第85-105页
  4.1 材料第85-87页
    4.1.1 实验动物第85页
    4.1.2 实验试剂第85-86页
    4.1.3 实验仪器第86-87页
  4.2 方法第87-95页
    4.2.1 乳腺癌皮下移植瘤模型的建立第87-88页
    4.2.2 动物分组及给药方法第88页
    4.2.3 观察指标第88页
    4.2.4 抑瘤效果评价第88页
    4.2.5 ELISA 法第88-89页
    4.2.6 免疫组化第89-91页
    4.2.7 肿瘤组织中全蛋白提取第91-92页
    4.2.8 免疫印迹第92-93页
    4.2.9 蛋白质的电转移第93-94页
    4.2.10 条带显影与分析第94页
    4.2.11 统计学处理第94-95页
  4.3 结果第95-100页
    4.3.1 不同浓度 rhIFN-γ处理对肿瘤体积的影响第95-97页
    4.3.2 不同浓度 rhIFN-γ处理对肿瘤 MMP-2 表达的影响第97页
    4.3.3 不同浓度 rhIFN-γ处理对肿瘤 MMP-9 表达的影响第97-98页
    4.3.4 不同浓度 rhIFN-γ处理对 VEGF 水平的影响第98-99页
    4.3.5 不同浓度 rhIFN-γ处理对肿瘤 PI3K/Akt 信号通路的影响第99-100页
  4.4 讨论第100-105页
第5章 研究总结第105-107页
参考文献第107-119页
致谢第119页

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