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H5N1禽流感病毒小鼠致病性的分子基础

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H5N1禽流感病毒小鼠致病性的分子基础
论文目录
 
论文创新点第1-8页
摘要第8-10页
Abstract第10-12页
第一章 A型流感病毒研究进展第12-40页
  1.1 概述第12-14页
  1.2 A型流感病毒的形态结构第14-15页
  1.3 A型流感病毒基因组结构及编码蛋白质第15-30页
    1.3.1 结构蛋白第15-26页
      1.3.1.1 RNP复合物蛋白第15-19页
      1.3.1.2 膜蛋白第19-26页
      1.3.1.3 基质蛋白第26页
    1.3.2 非结构蛋白第26-30页
  1.4 A型流感病毒的生活史第30-33页
    1.4.1 病毒颗粒进入第30-31页
    1.4.2 vRNPs入核第31页
    1.4.3 基因组的转录和翻译第31-32页
    1.4.4 病毒颗粒的组装和释放第32-33页
  1.5 A型流感病毒哺乳动物致病机制第33-37页
  1.6 A型流感病毒反向遗传操作技术第37-39页
  1.7 本论文的研究目的和意义第39-40页
第二章 实验材料与实验方法第40-52页
  2.1 实验材料第40-42页
    2.1.1 细胞、菌株、病毒株、载体和实验动物第40页
    2.1.2 抗体、试剂和试剂盒第40页
    2.1.3 主要仪器第40-41页
    2.1.4 相关试剂的配制第41-42页
  2.2 方法第42-52页
    2.2.1 病毒鸡胚扩增第42页
    2.2.2 病毒MDCK细胞扩增第42页
    2.2.3 血凝效价测定第42-43页
    2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备第43-44页
    2.2.5 DNA的转化第44页
    2.2.6 病毒RNA的提取第44页
    2.2.7 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增基因组片第44-45页
    2.2.8 DNA片段凝胶电泳及回收第45-46页
    2.2.9 反向遗传重组质粒构建第46页
    2.2.10 荧光素酶报告质粒构建第46-47页
    2.2.11 点突变第47-48页
    2.2.12 细胞转染及病毒拯救第48页
    2.2.13 空斑实验第48-49页
    2.2.14 MLD_(50)第49页
    2.2.15 生长曲线测定第49页
    2.2.16 鸡静脉注射毒力指数(IVPI)测定第49-50页
    2.2.17 小鼠感染和肺组织匀浆制备第50页
    2.2.18 小鼠肺组织病理切片及HE染色第50-51页
    2.2.19 RNP活性检测第51页
    2.2.20 病毒小鼠传代第51-52页
第三章 两株H5N1禽流感病毒分离株的特性和致病性第52-66页
  3.1 HB04和HN05毒株对鸡和小鼠的致病性第52-55页
  3.2 病毒在DF-1、MDCK和A549的增殖曲线及空斑特性第55-56页
  3.3 HB04和HN05反向遗传重组质粒构建及鉴定第56-58页
  3.4 HB04和HN05禽流感病毒基因组序列分析第58页
  3.5 重组病毒拯救及生长特性第58-59页
  3.6 病毒基因在重组病毒小鼠致病性中的作用第59-60页
  3.7 单基因替换对RNP活性的影响第60-62页
  3.8 聚合酶基因对重组病毒在小鼠肺组织复制的影响第62页
  3.9 聚合酶基因对小鼠毒力和致病性影响第62-63页
  3.10 讨论第63-66页
第四章 H5N1禽流感病毒小鼠适应的分子基础第66-80页
  4.1 H5N1禽流感病毒HB04株小鼠传代对致病性的影响第67-69页
  4.2 HB04和HB04M在细胞中复制特性第69-70页
  4.3 HB04M与HB04基因组序列测定及分析第70-71页
  4.4 聚合酶基因是决定HB04M小鼠高致病性的关键因素第71-72页
  4.5 聚合酶基因及其突变位点对RNP活性的影响第72-74页
  4.6 PB2 E627K、PB1 I205V和PA V474A突变对重组病毒在小鼠组织器官分布的影响第74-75页
  4.7 PB2 E627K、PB1 I205V和PA V474A突变是病毒引起小鼠肺组织病理损伤的关键位点第75-77页
  4.8 讨论第77-80页
研究总结与展望第80-82页
参考文献第82-96页
附表1 点突变引物第96-97页
附录2 HB04、HN05全基因组序列第97-111页
硕博连读期间发表与待发表的文章第111-112页
致谢第112页

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