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水稻甘氨酸脱羧酶H亚基的功能研究

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水稻甘氨酸脱羧酶H亚基的功能研究
论文目录
 
摘要第1-9页
Abstract第9-17页
第一章 文献综述第17-43页
  1. 甘氨酸脱羧酶研究概况第17-22页
  1.1 甘氨酸脱羧酶复合体第17-18页
  1.2 甘氨酸脱羧酶催化的生化反应第18-19页
  1.3 甘氨酸脱羧酶复合体蛋白亚基的编码基因第19-20页
  1.4 甘氨酸脱羧酶的生物学功能第20-22页
  2. 光呼吸第22-31页
  2.1 光呼吸代谢途径第22-24页
  2.2 C4植物的光呼吸第24-25页
  2.3 乙醛酸代谢旁路第25-26页
  2.4 光呼吸的生物学功能第26-29页
  2.5 光呼吸缺陷表型第29-31页
    2.5.1 光呼吸缺陷表型第29-30页
    2.5.2 光呼吸缺陷突变体的筛选第30页
    2.5.3 光呼吸基因的表达第30-31页
  3. 植物衰老的研究概况第31-40页
  3.1 植物衰老第31-32页
    3.1.1 植物衰老的概述第31-32页
    3.1.2 植物的衰老,超敏反应和细胞程序性死亡第32页
  3.2 植物衰老的特征第32-35页
    3.2.1 植物衰老的生理学特征第32-33页
    3.2.2 植物衰老的细胞学特征第33-34页
    3.2.3 植物衰老的分子生物学特征第34-35页
  3.3 植物衰老的调节因素和调控机制第35-40页
  4. 本研究的目的和意义第40-43页
第二章 OsGDCH基因为一典型的光呼吸基因第43-90页
  1. 引言第43-44页
  2. 材料与方法第44-68页
  2.1 植物材料及其培养第44-45页
  2.2 水稻总RNA的提取第45-47页
  2.3 cDNA第一链的合成第47页
  2.4 甘氨酸脱羧酶H亚基的载体构建第47-53页
    2.4.1 OsGDCH基因超量表达载体的构建第47-50页
    2.4.2 OsGDCH基因抑制表达载体的构建第50-52页
    2.4.3 载体质粒转入农杆菌EHA105第52-53页
  2.5 农杆菌介导的水稻愈伤组织的遗传转化第53-54页
  2.6 转基因植株的PCR鉴定第54-55页
  2.7 转基因植株的Southern blot分析第55-58页
  2.8 转基因植株的Northern blot分析第58-60页
  2.9 荧光定量PCR分析第60-61页
    2.9.1 荧光定量PCR的引物设计第60-61页
    2.9.2 荧光定量PCR的运行和数据分析第61页
  2.10 原核表达第61-66页
    2.10.1 原核表达载体的构建第61-62页
    2.10.2 融合蛋白的获取第62-64页
    2.10.3 多克隆抗体的制备和效价测定第64-65页
    2.10.4 Western blot分析第65-66页
  2.11 氨基酸含量的测定第66-68页
    2.11.1 水稻叶片中氨基酸的提取第66页
    2.11.2 氨基酸含量的测定和数据分析第66-68页
  2.12 标准苗期集团法进行抗褐飞虱鉴定第68页
  3. 结果与分析第68-86页
  3.1 转基因载体的构建第68-71页
    3.1.1 OsGDCH基因超量表达载体的构建第68-69页
    3.1.2 OsGDCH基因抑制表达载体的构建第69-71页
  3.2 原核表达第71-73页
    3.2.1 OxGDCH原核表达载体的构建第71页
    3.2.2 OsGDCH-his融合蛋白的诱导,纯化和质谱鉴定第71-72页
    3.2.3 多克隆抗体的制备和效价测定第72-73页
  3.3 转基因水稻材料的获得第73页
  3.4 转基因水稻材料的分子鉴定第73-77页
    3.4.1 OsGDCH超量表达植株的分子鉴定第73-75页
    3.4.2 OxGDCH抑制表达植株的分子鉴定第75-77页
  3.5 转基因水稻材料的表型鉴定第77-83页
    3.5.1 OsGDCH超量表达植株的表型鉴定第77页
    3.5.2 OsGDCH抑制表达植株的表型鉴定第77-79页
    3.5.3 OsGDCH抑制表达植株中光呼吸代谢相关氨基酸的含量测定第79-83页
  3.6 甘氨酸脱羧酶复合体中其他蛋白亚基在OsGDCH抑制植株中的表达分析第83-84页
  3.7 OsGDCH-RNAi植株中OsGDCH同源基因的表达第84-85页
  3.8 水稻中OsGDCH及其同源基因的组织表达模式分析第85-86页
  4. 讨论第86-90页
第三章 OsGDCH抑制转基因植株在大气环境中表现为早衰的表型第90-111页
  1. 引言第90-91页
  2. 材料和方法第91-97页
  2.1 材料及其培养第91页
  2.2 叶绿素含量的测定第91页
  2.3 蓝绿温和胶电泳第91-93页
    2.3.1 内囊体蛋白的体取第91页
    2.3.2 蓝绿温和胶电泳第91-93页
  2.4 光合作用的测定第93页
  2.5 蔗糖含量的测定第93-94页
  2.6 蛋白质含量的测定第94页
  2.7 透射电子显微镜的观察第94页
  2.8 荧光定量PCR(qPCR)和半定量PCR(RT-PCR)第94-97页
    2.8.1 荧光定量PCR(qPCR)第94-95页
    2.8.2 半定量PCR(RT-PCR)第95-97页
  3. 结果与分析第97-109页
  3.1 叶绿素含量的测定第97-99页
  3.2 蛋白质含量的测定第99页
  3.3 光合作用的测定第99页
  3.4 叶绿素复合体的检测第99-101页
  3.5 蔗糖含量的测定第101-102页
  3.6 叶绿体结构的显微观察第102-105页
  3.7 自噬体相关基因的表达分析第105-107页
  3.8 衰老下调基因SDGs以及衰老相关基因SAGs的表达分析第107-109页
  4. 讨论第109-111页
第四章 活性氧诱导了OsGDCH抑制转基因植株的衰老表型第111-128页
  1. 引言第111-112页
  2. 材料和方法第112-116页
  2.1 材料及其培养第112页
  2.2 组织化学实验第112-113页
    2.2.1 活性氧检测第112-113页
    2.2.2 死细胞检测第113页
  2.3 酶活测定实验第113-115页
  2.4 丙二醛(MDA)含量的测定第115-116页
  2.5 RNA的提取,cDNA第一链的合成,RT-PCR和qPCR分析第116页
  3. 结果与分析第116-125页
  3.1 活性氧的检测以及抗氧化酶酶活的测定第116-119页
  3.2 丙二醛(MDA)含量的测定第119-120页
  3.3 过氧化氢处理后衰老下调基因SDGs和衰老相关基因SAGs的表达模式分析第120-122页
  3.4 过氧化氢处理后自噬基因的表达模式分析第122-123页
  3.5 过氧化氢处理后衰老相关转录因子的表达模式分析第123-125页
  4. 讨论第125-128页
第五章 总讨论第128-136页
参考文献第136-161页
附录Ⅰ 水稻组织培养培养基第161-163页
致谢第163页

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