论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1.1 狂犬病病毒生物学特性的研究 | 第13-15页 |
| 1.1.1 狂犬病病毒的感染 | 第14页 |
| 1.1.2 狂犬病病毒的复制和转录 | 第14-15页 |
| 1.2 狂犬病病毒M基因的研究 | 第15-17页 |
| 1.2.1 狂犬病病毒M蛋白调控病毒的组装、出芽和释放 | 第15-16页 |
| 1.2.2 狂犬病病毒M蛋白调控病毒的复制和转录 | 第16-17页 |
| 1.2.3 狂犬病病毒M蛋白与病毒致病相关性 | 第17页 |
| 1.3 狂犬病病毒L基因的研究 | 第17-18页 |
| 1.4 狂犬病病毒致病性的研究 | 第18-20页 |
| 1.5 狂犬病病毒和宿主的相互作用 | 第20-22页 |
| 1.5.1 狂犬病病毒诱导细胞凋亡 | 第20-21页 |
| 1.5.2 狂犬病病毒抵抗宿主细胞干扰素的作用 | 第21-22页 |
| 1.6 狂犬病病毒的抗原性 | 第22-23页 |
| 1.7 狂犬病病毒疫苗的开发 | 第23-24页 |
| 1.8 狂犬病病毒的流行与分群 | 第24页 |
| 1.9 反向遗传技术在狂犬病病毒研究中的应用 | 第24-25页 |
| 1.10 本研究的目的意义 | 第25-27页 |
| 第二章 狂犬病病毒M基因传染性cDNA克隆的构建及其功能探索 | 第27-48页 |
| 2.1 材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 细胞和病毒 | 第27页 |
| 2.1.2 质粒 | 第27页 |
| 2.1.3 主要的仪器和试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.4 引物设计与合成 | 第28页 |
| 2.2 方法 | 第28-32页 |
| 2.2.1 狂犬病嵌合病毒cDNA的构建(图2-1) | 第28-29页 |
| 2.2.2 重组狂犬病病毒的拯救 | 第29-30页 |
| 2.2.3 狂犬病病毒毒价的测定 | 第30页 |
| 2.2.4 动物实验 | 第30页 |
| 2.2.5 狂犬病病毒的生长动力学实验 | 第30页 |
| 2.2.6 实时定量PCR(realtime fluorescence quantitative PCR) | 第30-31页 |
| 2.2.7 Western blot | 第31页 |
| 2.2.8 空斑实验 | 第31-32页 |
| 2.3 结果 | 第32-45页 |
| 2.3.1 狂犬病毒株GX01M重组病毒感染性cDNA克隆的构建 | 第32页 |
| 2.3.2 重组狂犬病病毒的拯救 | 第32-34页 |
| 2.3.3 狂犬病病毒毒价的测定 | 第34页 |
| 2.3.4 拯救狂犬病病毒的毒力测定 | 第34-35页 |
| 2.3.5 拯救狂犬病病毒生长动力学 | 第35-37页 |
| 2.3.6 狂犬病病毒N、M基因和看家基因p-actin实时定量PCR标准曲线的绘制 | 第37-41页 |
| 2.3.7 拯救狂犬病病毒的复制和转录 | 第41-43页 |
| 2.3.8 拯救狂犬病病毒的蛋白表达 | 第43页 |
| 2.3.9 重组狂犬病病在细胞与细胞间的传播 | 第43-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-47页 |
| 小结 | 第47-48页 |
| 第三章 狂犬病病毒M基因调控复制和转录的机理探索 | 第48-64页 |
| 3.1 材料和方法 | 第48-49页 |
| 3.1.1 主要仪器和材料见2.1 | 第48页 |
| 3.1.2 引物设计与合成 | 第48-49页 |
| 3.2 方法 | 第49-53页 |
| 3.2.1 嵌合狂犬病病毒感染性cDNA克隆的构建 | 第49-51页 |
| 3.2.2 重组狂犬病病毒突变体的拯救 | 第51页 |
| 3.2.3 重组狂犬病病毒毒价的测定 | 第51-52页 |
| 3.2.4 重组狂犬病病毒生长动力学实验 | 第52页 |
| 3.2.5 实时定量PCR实验 | 第52页 |
| 3.2.6 Western blot | 第52页 |
| 3.2.7 空斑实验 | 第52-53页 |
| 3.3 结果 | 第53-60页 |
| 3.3.1 重组病毒拯救的结果 | 第53-54页 |
| 3.3.2 重组病毒拯救序列的鉴定 | 第54-56页 |
| 3.3.3 重组病毒毒价的测定 | 第56页 |
| 3.3.4 重组病毒复制和转录结果分析 | 第56-57页 |
| 3.3.5 重组狂犬病病毒蛋白印迹试验 | 第57-58页 |
| 3.3.6 重组病毒在细胞间的传播能力结果 | 第58-60页 |
| 3.4 讨论 | 第60-63页 |
| 小结 | 第63-64页 |
| 第四章 广西狂犬病病毒L基因聚合酶活性部位的多态性分析 | 第64-85页 |
| 4.1 材料 | 第64-66页 |
| 4.1.1 狂犬病病毒株 | 第64-66页 |
| 4.1.2 仪器和试剂 | 第66页 |
| 4.1.3 引物设计与合成 | 第66页 |
| 4.2 方法 | 第66-67页 |
| 4.2.1 病毒RNA的抽提 | 第66-67页 |
| 4.2.2 反转录-聚合酶链式反应 | 第67页 |
| 4.2.3 PCR产物的克隆 | 第67页 |
| 4.2.4 阳性克隆的鉴定 | 第67页 |
| 4.3 结果 | 第67-82页 |
| 4.3.1 广西14株狂犬病病毒野毒株PCR鉴定 | 第67-68页 |
| 4.3.2 广西14株狂犬病病毒L基因聚合酶活性部位的PCR扩增 | 第68-69页 |
| 4.3.3 广西14株狂犬病病毒L基因聚合酶活性部位重组质粒PCR和酶切鉴定 | 第69-70页 |
| 4.3.4 广西狂犬病病毒L基因聚合酶活性部位核苷酸和推导的氨基酸序列比较 | 第70-80页 |
| 4.3.5 L基因聚合酶活性部位核苷酸多态性分析 | 第80-81页 |
| 4.3.6 广西狂犬病病毒株L基因聚合酶活性部位的氨基酸突变分析 | 第81-82页 |
| 4.4 讨论 | 第82-84页 |
| 小结 | 第84-85页 |
| 第五章 结论 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-96页 |
| 附章:广西蝙蝠狂犬病病毒的调查分析 | 第96-121页 |
| 1 材料 | 第98-99页 |
| 1.1 蝙蝠材料来源 | 第98页 |
| 1.2 细胞、实验动物 | 第98页 |
| 1.3 仪器试剂 | 第98-99页 |
| 1.4 引物设计 | 第99页 |
| 2 方法 | 第99-100页 |
| 2.1 病毒RNA的抽提反转录 | 第99页 |
| 2.2 Nested-PCR | 第99-100页 |
| 2.3 PCR产物的克隆、鉴定和测序 | 第100页 |
| 2.4 小鼠脑内注射 | 第100页 |
| 2.5 细胞和鸡胚分离 | 第100页 |
| 2.6 基因分析 | 第100页 |
| 3 结果 | 第100-118页 |
| 3.1 Nested PCR检测蝙蝠狂犬病病毒结果 | 第100-101页 |
| 3.2 蝙蝠材料乳鼠脑内接种后Nested PCR检测狂犬病病毒结果 | 第101页 |
| 3.3 Nested PCR对蝙蝠狂犬病病毒N基因序列分析 | 第101-116页 |
| 3.4 进化树的构建和分析 | 第116页 |
| 3.5 狂犬病病毒在鸡胚和BHK细胞中增值检测结果 | 第116-118页 |
| 4 讨论 | 第118-119页 |
| 小结 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
