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猪繁殖与呼吸综合征病毒调控宿主应答的机制研究

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猪繁殖与呼吸综合征病毒调控宿主应答的机制研究
论文目录
 
摘要第1-7页
ABSTRACT第7-12页
第一章 引言第12-35页
  1.1 PRRSV的基因组结构与复制机制第13-16页
1.2第16-20页
    1.2.1 PRRSV非结构蛋白及其功能第16-18页
    1.2.2 PRRSV结构蛋白及其功能第18-20页
  1.3 PRRSV感染与宿主天然免疫第20-24页
  1.4 PI3K/AKT/GSK-3信号通路第24-30页
    1.4.1 PI3K结构及其生物学功能第25-27页
    1.4.2 Akt通路及其生物学功能第27-29页
    1.4.3 PI3K/Akt通路与PRRSV感染第29-30页
  1.5 天然免疫限制性因子SAMHD1与病毒感染第30-34页
    1.5.1 SAMHD1的结构与生物学特性第31-32页
    1.5.2 SAMHD1功能与病毒感染第32-34页
  1.6 本研究目的和意义第34-35页
第二章 PRRSV逃逸外界选择压力的研究第35-57页
  2.1 病毒和细胞第36-45页
    2.1.1 细胞和病毒第36页
    2.1.2 抗体和试剂第36-37页
    2.1.3 病毒感染和抑制剂处理第37-38页
    2.1.4 抑制剂细胞毒性实验第38页
    2.1.5 总RNA的提取与cDNA的合成第38-39页
    2.1.6 细胞裂解和Western blot分析第39-40页
    2.1.7 HuN4-F112株GSK-3抑制剂突变株的筛选第40-41页
    2.1.8 重组突变病毒的构建与拯救第41-42页
    2.1.9 重组突变病毒的拯救第42-43页
    2.1.10 重组拯救病毒的酶切鉴定第43-44页
    2.1.11 重组病毒间接免疫荧光(IFA)鉴定第44页
    2.1.12 重组拯救病毒生物学特性分析第44-45页
  2.2 结果第45-53页
    2.2.1 GSK-3 inhibitor X对细胞活性的影响第45页
    2.2.2 GSK-3的活性与PRRSV的增殖密切相关第45-47页
    2.2.3 HuN4-F112株GSK-3抑制剂突变株的筛选第47-49页
    2.2.4 重组病毒Genomic Marker检测第49-50页
    2.2.5 间接免疫荧光鉴定结果第50页
    2.2.6 重组拯救病毒生长特性分析第50-51页
    2.2.7 重组拯救病毒增强Akt的磷酸化水平第51-53页
  2.3 讨论第53-57页
第三章 SAMHD1表达调控机制研究第57-82页
  3.1 材料与方法第59-64页
    3.1.1 细胞和病毒第59页
    3.1.2 质粒、抗体和试剂第59-60页
    3.1.3 Real-time PCR定量分析SAMHD1基因mRNA和细胞IFN-α的表达第60-61页
    3.1.4 细胞处理与转染第61-62页
    3.1.5 荧光素酶活性检测第62页
    3.1.6 RNA干扰与回补实验第62-63页
    3.1.7 间接免疫荧光实验第63页
    3.1.8 染色质免疫共沉淀实验(ChIP)第63-64页
    3.1.9 凝胶迁移电泳(EMSA)第64页
    3.1.10 统计学分析第64页
  3.2 结果第64-78页
    3.2.1 MARC-145细胞和PAM细胞中干扰素上调SAMHD1的表达第64-66页
    3.2.2 HP-PRRSV感染诱导PAM细胞中SAMHD1蛋白和mRNA水平上调第66-67页
    3.2.3 TLR3和RIG-I通路参与上调SAMHD1的表达第67-68页
    3.2.4 过表达TRIF和MAVS诱导SAMHD1的表达第68-70页
    3.2.5 TBK1的活化参与SAMHD1的诱导表达第70-72页
    3.2.6 IRF3在SAMHD1转录翻译过程中发挥直接的调控作用第72-73页
    3.2.7 SAMHD1上调表达不依赖于JAK-STAT通路第73-75页
    3.2.8 IRF3的磷酸化和核转移活性对诱导SAMHD1的上调表达至关重要第75-77页
    3.2.9 活化的IRF3直接结合SAMHD1的启动子诱导SAMHD1的上调表达第77-78页
  3.3 讨论第78-82页
第四章 全文结论第82-83页
参考文献第83-90页

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