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手工克隆生产转植酸酶基因猪的研究
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手工克隆生产转植酸酶基因猪的研究
论文目录
 
摘要第1-7页
ABSTRACT第7-14页
文中缩略词中英文对照第14-17页
第一章 文献综述第17-32页
1 我国养猪业的概况第17-18页
2 养猪业引起的环境污染问题第18-19页
3 转基因动物研究进展第19-23页
　　3.1 显微注射转基因动物第19-20页
　　3.2 精子载体法转基因动物第20-21页
　　3.3 病毒载体法转基因动物第21-22页
　　3.4 体细胞核移植的研究进展第22-23页
4 手工克隆的研究进展第23-26页
5 环保转基因猪研究第26-31页
　　5.1 植酸和植酸酶第26-29页
　　5.2 唾液腺生物反应器第29-31页
6 本研究的目的和意义第31-32页
第二章 转植酸酶基因真核表达载体的构建及鉴定第32-60页
1 实验材料第32-35页
　　1.1 菌种和质粒第32页
　　1.2 药品和试剂盒第32-33页
　　1.3 主要仪器设备第33页
　　1.4 主要试剂的配制第33-35页
2 实验方法第35-49页
　　2.1 载体构建的技术路线第35-37页
　　2.2 实验方法第37-49页
3 结果与分析第49-58页
　　3.1 p-PSP-Intron-Cafp转基因载体的构建第49-55页
　　3.2 PSP-Cafp-IRES-EGFP转基因载体的构建第55-58页
4 讨论第58-59页
5 本章小结第59-60页
第三章 PSP启动子的功能验证及转基因阳性细胞筛选与鉴定第60-80页
1 实验材料第60-63页
　　1.1 实验样品第60页
　　1.2 实验试剂第60-61页
　　1.3 实验仪器第61页
　　1.4 主要耗材第61-62页
　　1.5 配制的溶液和培养基第62-63页
2 实验方法第63-71页
　　2.1 细胞复苏第63页
　　2.2 细胞传代第63-64页
　　2.3 细胞换液第64页
　　2.4 细胞冻存第64页
　　2.5 细胞电转及参数第64-66页
　　2.6 细胞挑克隆第66页
　　2.7 细胞DNA的提取第66-67页
　　2.8 细胞PCR鉴定第67-68页
　　2.9 LTX试剂转染细胞方法第68页
　　2.10 细胞RNA的提取第68-69页
　　2.11 细胞RT-PCR检测第69-71页
3 结果与分析第71-78页
　　3.1 PSP启动子在腮腺细胞上的表达验证第71-75页
　　3.2 转p-PSP-Intron-Cafp质粒成纤维细胞的筛选与鉴定第75-78页
4 讨论第78-79页
5 本章小结第79-80页
第四章 胚胎成熟培养体系的优化及手工克隆生产转基因猪第80-104页
1 实验材料第80-88页
　　1.1 实验样品第80页
　　1.2 实验试剂第80-81页
　　1.3 实验仪器第81页
　　1.4 主要耗材第81-82页
　　1.5 配制的溶液和培养基第82-88页
2 实验方法第88-92页
　　2.1 猪卵巢的采集第88页
　　2.2 卵母细胞的采集第88页
　　2.3 卵母细胞的体外成熟第88-89页
　　2.4 孤雌激活第89页
　　2.5 手工克隆第89-91页
　　2.6 囊胚细胞计数第91页
　　2.7 数据统计分析第91页
　　2.8 胚胎移植第91-92页
3 结果与分析第92-101页
　　3.1 猪胚胎成熟培养体系的优化第92-96页
　　3.2 转基因猪的制备第96-101页
4 讨论第101-103页
5 本章小结第103-104页
第五章 转基因猪的阳性鉴定第104-138页
1 实验材料第104-109页
　　1.1 实验样品第104页
　　1.2 实验试剂第104-105页
　　1.3 实验仪器第105-106页
　　1.4 配制的溶液和培养基第106-109页
2 实验方法第109-121页
　　2.1 组织DNA提取第109-110页
　　2.2 PCR鉴定第110-112页
　　2.3 荧光原位杂交检测第112-113页
　　2.4 唾液蛋白PAGE检测第113-117页
　　2.5 磷消化率的测定第117-119页
　　2.6 HE染色及免疫组化实验步骤第119-121页
3 结果与分析第121-136页
　　3.1 转基因猪PCR鉴定第121-124页
　　3.2 FISH的结果第124-129页
　　3.3 PAGE电泳结果第129-131页
　　3.4 磷的表观消化实验第131-133页
　　3.5 免疫组化实验结果第133-136页
4 讨论第136-137页
5 本章小结第137-138页
全文总结第138-140页
参考文献第140-151页
附录第151-169页
致谢第169-170页
攻读博士学位期间发表的论文第170-171页

本篇论文共171页，点击这进入下载页面。
 
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