论文目录 | |
摘要 | 第1-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
缩略词表 | 第11-12页 |
1 前言 | 第12-30页 |
1.1 课题的提出 | 第12-13页 |
1.2 AsA在植物中的生理功能 | 第13-14页 |
1.2.1 AsA保护光合作用正常进行 | 第13页 |
1.2.2 AsA作为一些酶的辅酶 | 第13页 |
1.2.3 AsA影响细胞的有丝分裂和细胞膨大 | 第13-14页 |
1.3 AsA在植物中的生物合成途径 | 第14-17页 |
1.3.1 D-甘露糖/L-半乳糖途径(D-Man/L-Gal) | 第14-15页 |
1.3.2 肌醇途径 | 第15-16页 |
1.3.3 半乳糖醛酸途径 | 第16页 |
1.3.4 古洛糖途径 | 第16-17页 |
1.4 植物AsA的氧化 | 第17-18页 |
1.5 AsA的循环再生 | 第18页 |
1.6 GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GMP) | 第18-19页 |
1.7 GME基因研究进展 | 第19-20页 |
1.8 调控植物AsA生物合成研究进展 | 第20-21页 |
1.9 转录因子的结构 | 第21-22页 |
1.9.1 核定位信号区 | 第21-22页 |
1.9.2 寡聚化位点区 | 第22页 |
1.9.3 DNA结合域 | 第22页 |
1.9.4 转录调控区 | 第22页 |
1.10 植物HD-Zip转录因子研究进展 | 第22-26页 |
1.10.1 植物HD-Zip转录因子的结构及分类 | 第23-25页 |
1.10.2 植物HD-Zip转录因子的功能 | 第25-26页 |
1.10.2.1 HD-Zip Ⅰ转录因子的功能 | 第25页 |
1.10.2.2 HD-Zip Ⅱ的功能 | 第25-26页 |
1.10.2.3 HD-Zip Ⅲ的功能 | 第26页 |
1.10.2.4 HD-Zip Ⅳ | 第26页 |
1.11 Aux/IAA家族研究进展 | 第26-27页 |
1.12 NF-Y转录因子 | 第27-29页 |
1.13 研究的目的及意义 | 第29-30页 |
2 材料与方法 | 第30-40页 |
2.1 植物材料 | 第30页 |
2.2 菌株、载体和试剂 | 第30页 |
2.3 DNA提取 | 第30-31页 |
2.4 RNA抽提及反转录 | 第31页 |
2.5 热激法转化大肠杆菌 | 第31页 |
2.6 大肠杆菌质粒抽提 | 第31-32页 |
2.7 小量法转化酵母 | 第32页 |
2.8 最佳3-AT浓度筛选 | 第32页 |
2.9 酵母感受态制备 | 第32-33页 |
2.10 大量法转化酵母(筛选单杂文库) | 第33页 |
2.11 转录激活实验 | 第33-34页 |
2.12 蛋白原核诱导表达及纯化 | 第34-35页 |
2.12.1 小量原核表达与鉴定 | 第34页 |
2.12.2 蛋白大量诱导表达 | 第34页 |
2.12.3 包涵体蛋白纯化 | 第34-35页 |
2.12.4 蛋白质复性 | 第35页 |
2.13 EMSA | 第35-37页 |
2.14 烟草瞬时表达及LUC/RLU Ratio测定 | 第37页 |
2.15 AsA含量测定 | 第37-38页 |
2.16 转基因材料氧化处理 | 第38-40页 |
3 结果与分析 | 第40-85页 |
3.1 番茄SlGMP3启动子序列分析 | 第40页 |
3.2 最佳3-AT筛选 | 第40-41页 |
3.3 酵母单杂交筛选结合蛋白基因 | 第41-43页 |
3.4 SlGMP3启动子的结合蛋白S1HZ24基因的克隆及功能分析 | 第43-62页 |
3.4.1 SlHZ24基因的克隆与序列分析 | 第43-46页 |
3.4.2 SlHZ24可与SlGMP3启动子结合 | 第46-51页 |
3.4.3 SlHZ24和SlGMP3在番茄各组织中的共表达分析 | 第51-52页 |
3.4.4 SlHZ24转基因番茄株系中AsA的含量分析 | 第52-53页 |
3.4.5 SlHZ24可调控AsA代谢相关基因的表达 | 第53-54页 |
3.4.6 SlHZ24结合AsA代谢途径中其它基因的启动子 | 第54-56页 |
3.4.7 SlHZ24在果实成熟中的作用 | 第56-58页 |
3.4.8 SlHZ24转基因株系对光周期的响应 | 第58-59页 |
3.4.9 超量表达SlHZ24提高番茄对氧化逆境的抗性 | 第59-62页 |
3.5 SlGMP3启动子的结合蛋白SlIAA9基因克隆及功能分析 | 第62-70页 |
3.5.1 SlIAA9基因的结构分析 | 第62-63页 |
3.5.2 SlIAA9与SlGMP3启动子的互作关系 | 第63-64页 |
3.5.3 SlARF8与SlGMP3启动子互作 | 第64-65页 |
3.5.4 SlARF8与SlIAA9互作 | 第65-66页 |
3.5.5 SlIAA9超量和干涉株系中SlIAA9表达水平分析 | 第66-67页 |
3.5.6 SlIAA9干涉转基因株系和entire中AsA含量分析 | 第67页 |
3.5.7 SlIAA9干涉株系和entire中SlGMP3表达分析 | 第67-68页 |
3.5.8 SlIAA9干涉株系及entire中AsA代谢相关基因的表达分析 | 第68-69页 |
3.5.9 外源喷施生长素IAA改变AsA的含量 | 第69-70页 |
3.6 SlGME1启动子结合蛋白SlNFY基因的克隆及功能鉴定 | 第70-85页 |
3.6.1 SlGME1的启动子分析及酵母单杂交结果 | 第70-71页 |
3.6.2 番茄NF-Y基因家族SlNFYA基因的克隆与序列分析 | 第71-73页 |
3.6.3 SlNFYA结合SlGME1启动子 | 第73-75页 |
3.6.4 SlGME1和SlNFYA在番茄各组织中的表达模式 | 第75页 |
3.6.5 SlNFYA遗传转化材料获得及检测 | 第75-76页 |
3.6.6 SlNFYA转基因材料中AsA含量分析 | 第76-77页 |
3.6.7 SlNFYA转基因材料中SlGME1的表达分析 | 第77-78页 |
3.6.8 SlNFYA转基因植株叶片中AsA代谢相关基因的表达水平 | 第78-79页 |
3.6.9 SlNFYA的互作基因 | 第79-80页 |
3.6.10 SlNFYA转基因植株表型变化 | 第80-85页 |
4 讨论 | 第85-93页 |
4.1 SlHZ24基因功能 | 第85-87页 |
4.1.1 SlHZ24识别和结合顺式元件的类型 | 第85页 |
4.1.2 SlHZ24调控SlGMP3表达改变AsA的含量 | 第85-86页 |
4.1.3 SlHZ4对光周期的响应 | 第86-87页 |
4.1.4 SlHZ24与非生物逆境的应答 | 第87页 |
4.2 SlIAA9功能探讨 | 第87-89页 |
4.2.1 SlIAA9通过SlARF8间接调控SlGMP3表达 | 第87-88页 |
4.2.2 SlIAA9是联系IAA与AsA代谢的纽带 | 第88-89页 |
4.3 SlNFYA功能探讨 | 第89-90页 |
4.3.1 SlNFYA结合SlGME1启动子 | 第89页 |
4.3.2 AsA调控植株的生长发育 | 第89-90页 |
4.4 全文总结 | 第90-93页 |
参考文献 | 第93-109页 |
附录 | 第109-113页 |
附录一:培养基配方 | 第109-110页 |
附录二:SlGMP3启动子序列 | 第110-112页 |
附录三:SlGME1启动子 | 第112-113页 |
附表1 | 第113-114页 |
作者简介 | 第114-115页 |
致谢 | 第115页 |