论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-25页 |
| 1 板栗疫病菌 | 第12页 |
| 2 低毒病毒 | 第12-13页 |
| 3 低毒病毒调控板栗疫病菌致病力和相关性状的机理 | 第13-14页 |
| 4 蛋白组学研究基础 | 第14-15页 |
| 5 类枯草杆菌蛋白酶 | 第15-19页 |
| 5.1 类枯草杆菌蛋白酶在生物中的分布概况 | 第15-16页 |
| 5.2 类枯草杆菌蛋白酶与真菌表型、致病性相关 | 第16-18页 |
| 5.3 类枯草杆菌蛋白酶参与自噬过程 | 第18-19页 |
| 6 S-腺苷高半胱氨酸水解酶 | 第19-23页 |
| 6.1 S-腺苷高半胱氨酸水解酶在生物中的分布 | 第19-20页 |
| 6.2 S-腺苷高半胱氨酸水解酶参与细胞甲基代谢途径 | 第20-22页 |
| 6.3 S-腺苷高半胱氨酸水解酶与动植物病毒复制相关 | 第22页 |
| 6.4 S-腺苷高半胱氨酸水解酶与疾病相关 | 第22-23页 |
| 7 本研究的主要内容、目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-41页 |
| 8 菌种及培养方法 | 第25-26页 |
| 8.1 细菌 | 第25页 |
| 8.1.1 细菌菌种 | 第25页 |
| 8.1.2 大肠杆菌培养基及培养条件 | 第25页 |
| 8.2 真菌 | 第25-26页 |
| 8.2.1 真菌菌种 | 第25页 |
| 8.2.2 板栗疫病菌培养基 | 第25-26页 |
| 8.2.3 板栗疫病菌培养条件 | 第26页 |
| 8.2.4 板栗疫病菌致病性实验 | 第26页 |
| 8.2.5 板栗疫病菌分生孢子定量 | 第26页 |
| 9 引物 | 第26-28页 |
| 10 核酸工程实验技术 | 第28-36页 |
| 10.1 大量提取真菌总DNA | 第28页 |
| 10.2 基因突变体的构建 | 第28-30页 |
| 10.2.1 基因缺失片段的构建策略 | 第28-29页 |
| 10.2.3 DNA片段的纯化 | 第29页 |
| 10.2.4 融合PCR | 第29页 |
| 10.2.5 PCR扩增融合PCR的产物 | 第29页 |
| 10.2.6 PCR产物沉淀浓缩 | 第29-30页 |
| 10.3 DNA克隆 | 第30-31页 |
| 10.3.1 氯化铷法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第30页 |
| 10.3.2 DNA连接反应 | 第30页 |
| 10.3.3 质粒DNA的热击转化 | 第30页 |
| 10.3.4 质粒DNA的小规模提取 | 第30-31页 |
| 10.4 互补重组质粒的构建 | 第31页 |
| 10.4.1 PCR扩增互补基因片段 | 第31页 |
| 10.4.2 构建重组载体 | 第31页 |
| 10.5 真菌原生质体的制备、再生和转化 | 第31-33页 |
| 10.5.1 真菌原生质体的制备 | 第32-33页 |
| 10.5.2 真菌原生质体的再生 | 第33页 |
| 10.5.3 真菌原生质体的转化 | 第33页 |
| 10.6 DNA杂交(Southern) | 第33-35页 |
| 10.7 丝状真菌RNA的提取和纯化 | 第35页 |
| 10.8 荧光定量PCR | 第35-36页 |
| 11 蛋白质工程实验技术 | 第36-40页 |
| 11.1 板栗疫病菌可溶性总蛋白的提取 | 第36-37页 |
| 11.2 蛋白质定量 | 第37页 |
| 11.3 双向凝胶电泳 | 第37-39页 |
| 11.3.1 第一向pH梯度等电聚焦 | 第37页 |
| 11.3.2 平衡 | 第37页 |
| 11.3.3 第二向SDS-PAGE电泳 | 第37页 |
| 11.3.4 硝酸银染色 | 第37-38页 |
| 11.3.5 凝胶电泳图像处理 | 第38页 |
| 11.3.6 蛋白质酶解 | 第38-39页 |
| 11.3.7 质谱鉴定 | 第39页 |
| 11.4 sahh基因编码蛋白质的表达和纯化 | 第39页 |
| 11.4.1 表达质粒的构建 | 第39页 |
| 11.4.2 蛋白表达、纯化和定量 | 第39页 |
| 11.5 蛋白酶活性测定 | 第39-40页 |
| 12 固相萃取-反相液相色谱(SPE-HPLC)测胞内SAM、SAH和ADO浓度 | 第40-41页 |
| 12.1 样品的准备和固相萃取 | 第40页 |
| 12.2 反相高效液相色谱法(HPLC)分析胞内SAM、SAH和ADO浓度 | 第40-41页 |
| 第三章 结果 | 第41-65页 |
| 13 板栗疫病菌突变体UV57 | 第41-50页 |
| 13.1 突变体UV57的生物学特性 | 第41-43页 |
| 13.2 突变体UV57与野生型菌株EP155的差异蛋白组学 | 第43-47页 |
| 13.3 突变体UV57差异表达蛋白的转录水平 | 第47-49页 |
| 13.4 突变体UV57差异表达蛋白的功能分类 | 第49-50页 |
| 14 Prb1基因功能研究 | 第50-57页 |
| 14.1 Prb1基因转录水平和蛋白水平的差异分析 | 第50页 |
| 14.2 Prb1基因全长DNA序列和推导的蛋白质分析 | 第50-53页 |
| 14.3 Prb1基因缺失突变体的验证及生物学特征 | 第53-55页 |
| 14.4 Prb1基因的缺失影响板栗疫病菌低毒病毒的累积量 | 第55-57页 |
| 15 Sahh基因功能研究 | 第57-65页 |
| 15.1 Sahh基因的转录受低毒病毒调控 | 第57页 |
| 15.2 Sahh基因全长DNA序列和推导的蛋白分析 | 第57页 |
| 15.3 SAHH蛋白的表达、纯化和鉴定 | 第57-59页 |
| 15.4 Sahh基因与板栗疫病菌表型相关 | 第59-61页 |
| 15.5 Sahh基因的缺失导致板栗疫病菌致病力明显下降 | 第61页 |
| 15.6 Sahh基因的缺失影响细胞内ADO、SAH和SAM的浓度 | 第61-63页 |
| 15.7 Sahh基因突变影响甲基代谢途径和G蛋白信号传导途径关键基因的表达 | 第63-65页 |
| 第四章 讨论 | 第65-70页 |
| 16 突变体UV57蛋白组学研究 | 第65-66页 |
| 16.1 蛋白组学与转录组学研究分析 | 第65页 |
| 16.2 甲基代谢途径相关基因的差异表达分析 | 第65-66页 |
| 17 prb1基因功能研究 | 第66-67页 |
| 17.1 Prb1与低毒病毒复制相关分析 | 第66页 |
| 17.2 Prb1的缺失改变真菌表型和毒力分析 | 第66-67页 |
| 18 Sahh基因功能研究 | 第67-69页 |
| 18.1 SAHH是生物体内甲基代谢途径的关键元件 | 第67页 |
| 18.2 生物休内DNA甲基化影响基因转录水平 | 第67页 |
| 18.3 SAHH参与细胞内转录后基因沉默 | 第67-68页 |
| 18.4 Sahh通过调节G蛋白信号传导途调节真菌的表型和毒力分析 | 第68-69页 |
| 18.5 SAHH与病毒复制相关分析 | 第69页 |
| 19 本研究的不足和今后改进的方向 | 第69-70页 |
| 第五章 结论 | 第70-71页 |
| 20 本文的主要结论 | 第70页 |
| 21 创新点 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第83页 |
