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农杆菌介导RNAi大豆花叶病毒HC-Pro基因大豆遗传转化的研究

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农杆菌介导RNAi大豆花叶病毒HC-Pro基因大豆遗传转化的研究
论文目录
 
摘要第1-10页
ABSTRACT第10-14页
缩略词表及其英汉对照第14-18页
第一章 文献综述第18-46页
1 大豆花叶病毒概述第19-28页
  1.1 大豆花叶病毒病的发现第19页
  1.2 大豆花叶病毒的症状与危害第19-21页
  1.3 大豆花叶病毒的寄主范围与株系划分第21-24页
  1.4 大豆花叶病毒的性质与基因组结构功能第24-27页
  1.5 大豆花叶病毒病的防治第27-28页
2 大豆遗传转化的研究进展第28-42页
  2.1 大豆转基因的方法第28-33页
  2.2 大豆遗传转化相关基因第33-35页
  2.3 农杆菌介导大豆转基因方法的优化第35-36页
  2.4 转基因方法在大豆改良中的应用第36-42页
3 RNA干扰的研究进展第42-45页
  3.1 RNA干扰现象的发现第42页
  3.2 RNA干扰的作用机制第42-44页
  3.3 RNA干扰在抗病毒转基因大豆研究中的应用第44-45页
4 本研究的目的和意义第45-46页
第二章 大豆花叶病毒HC-Pro基因干扰片段克隆及其RNAi载体的构建第46-62页
1 材料与方法第46-53页
  1.1 试验材料第46-47页
  1.2 实验方法第47-53页
2 结果与分析第53-60页
  2.1 RNAi目标区段HC-Proi的克隆第53-55页
  2.2 BP入门克隆和LR表达克隆的构建第55-57页
  2.3 RNAi载体的鉴定第57-59页
  2.4 大豆遗传转化工程菌的获得第59-60页
3 讨论第60-62页
第三章 农杆菌介导大豆子叶节遗传转化体系的优化第62-80页
1 材料与方法第63-68页
  1.1 试验材料第63-64页
  1.2 实验方法第64-68页
2 结果与分析第68-78页
  2.1 氯气灭菌对污染率及种子萌发率的影响第68-69页
  2.2 不同类型外植体的GUS瞬时表达率第69-71页
  2.3 农杆菌菌液浓度与侵染液浓度对GUS瞬时表达率的影响第71-74页
  2.4 最佳侵染时间的确定第74-75页
  2.5 最佳暗培养天数的确定第75-76页
  2.6 筛选高活力、易感和高再生大豆基因型第76-78页
3 讨论第78-80页
第四章 SMV HC-Pro基因的遗传转化第80-92页
1 材料与方法第80-85页
  1.1 试验材料第80-81页
  1.2 实验方法第81-85页
2 结果与分析第85-90页
  2.1 抗性组培幼苗的获得第85-88页
  2.2 阳性T_0代转基因大豆植株的筛选第88-90页
3 讨论第90-92页
第五章 转基因大豆T_1和T_2代对SMV的抗病鉴定第92-112页
1 材料与方法第92-98页
  1.1 试验材料第92-93页
  1.2 实验方法第93-98页
2 结果与分析第98-110页
  2.1 阳性T_1植株的筛选第98-99页
  2.2 T_1植株Southern blot杂交结果第99-100页
  2.3 T_1代分离比卡方(χ~2)分析第100-102页
  2.4 T_1代转基因大豆植株SMV抗病鉴定第102-104页
  2.5 T_1代转基因大豆植株qRT-PCR和DAS-ELISA分析第104-107页
  2.6 T_2代转基因大豆植株SMV抗病鉴定第107-108页
  2.7 T_2代转基因大豆植株DAS-ELISA分析第108-109页
  2.8 T_3种子表型观察第109-110页
3 讨论第110-112页
第六章 应用转基因本氏烟验证SMV抗病候选基因功能的初步探索第112-124页
1 材料与方法第112-117页
  1.1 试验材料第112-114页
  1.2 实验方法第114-117页
2 结果与分析第117-121页
  2.1 SMV症状调查第117-118页
  2.2 SMV分子检测第118-119页
  2.3 回接南农1138-2及SMV CP基因测序分析第119-121页
3 讨论第121-124页
全文结论及创新点第124-126页
参考文献第126-148页
附录第148-180页
附录1 汁液摩擦接种法繁殖、活化SMV第148页
附录2 总RNA提取试剂盒说明书(Tiangen)第148-149页
附录3 DNA凝胶回收试剂盒说明书(Axygen)第149页
附录4 热激法转化大肠杆菌感受态DH5α第149-150页
附录5 质粒DNA小量提取试剂盒说明书(Axygen)第150-151页
附录6 农杆菌菌株EHA105感受态制备第151页
附录7 冻融法转化农杆菌感受态细胞EHA105第151-152页
附录8 植物基因组DNA提取试剂盒说明书(Tiangen)第152页
附录9 Southern blot缓冲液配制和具体操作步骤第152-156页
附录10 CTAB缓冲液配制和具体操作步骤第156-157页
附录11 DAS-ELISA缓冲液配制和具体操作步骤第157-159页
附录12 相关培养基及母液配方第159-160页
附表1第160-164页
附表2第164-171页
附表3第171-178页
附表4第178-180页
撰写论文情况第180-182页
致谢第182页

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