论文目录 | |
| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-34页 |
| 第一章 植物SNARE蛋白的研究进展 | 第14-30页 |
| 1 植物SNARE蛋白的结构与分类 | 第14-16页 |
| 1.1 植物SNARE蛋白的结构 | 第14-16页 |
| 1.2 植物SNARE蛋白的分类 | 第16页 |
| 2 植物SNARE蛋白家族 | 第16-19页 |
| 2.1 植物Q-SNAREs蛋白家族 | 第16-18页 |
| 2.2 植物R-SNAREs蛋白家族 | 第18-19页 |
| 3 植物SNARE蛋白介导的膜融合机制 | 第19-22页 |
| 3.1 植物SNARE核心复合体的结构 | 第19-20页 |
| 3.2 植物SNARE蛋白介导的膜融合过程 | 第20-22页 |
| 4 植物SNARE蛋白作用的调节因子 | 第22-25页 |
| 4.1 SM蛋白 | 第22-23页 |
| 4.2 NSF和α-SNAP蛋白 | 第23-25页 |
| 5 植物SNARE蛋白的功能 | 第25-29页 |
| 5.1 与植物的抗病性有关 | 第25-26页 |
| 5.2 参与植物生长发育的调节 | 第26-27页 |
| 5.3 参与ABA信号传导 | 第27页 |
| 5.4 参与植物对非生物胁迫的响应 | 第27页 |
| 5.5 促进植物的胞质分裂 | 第27-28页 |
| 5.6 与脂质筏的重要联系 | 第28页 |
| 5.7 与植物向重力性相关 | 第28-29页 |
| 6 植物SNARE蛋白研究展望 | 第29-30页 |
| 第二章 水稻与稻瘟病菌互作的分子机制研究 | 第30-34页 |
| 1 水稻与稻瘟病菌互作的PTI机制 | 第30-31页 |
| 1.1 几丁质受体OsCEBiP介导的免疫反应 | 第31页 |
| 1.2 LYP4和LYP6介导的免疫反应 | 第31页 |
| 2 水稻与稻瘟病菌互作的ETI机制 | 第31-32页 |
| 2.1 抗病蛋白与无毒蛋白直接互作介导的ETI | 第32页 |
| 2.2 抗病蛋白与无毒蛋白间接互作介导的ETI | 第32页 |
| 3 水稻与稻瘟病菌互作的PTI与ETI之间的联系 | 第32-33页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 第二部分 研究报告 | 第34-80页 |
| 第三章 水稻OsSNAP32基因在抗稻瘟病中的作用 | 第34-66页 |
| 1 材料和方法 | 第35-44页 |
| 1.1 稻瘟病菌小种及其培养、接种方法 | 第35-36页 |
| 1.1.1 稻瘟病菌小种及培养 | 第35页 |
| 1.1.2 苗瘟的接种方法 | 第35页 |
| 1.1.3 穗瘟的接种方法 | 第35-36页 |
| 1.2 植物材料 | 第36页 |
| 1.3 植物材料的处理 | 第36页 |
| 1.4 总RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第36页 |
| 1.5 实时定量RT-PCR分析 | 第36-37页 |
| 1.6 菌株、质粒和试剂盒 | 第37页 |
| 1.7 品种间OsSNAP32基因的启动子区域和cDNA序列比较 | 第37-38页 |
| 1.7.1 PCR扩增目的片段 | 第37-38页 |
| 1.7.2 目的片段的胶回收、测序及序列比较 | 第38页 |
| 1.8 品种间OsSNAP32基因的拷贝数比较 | 第38-39页 |
| 1.9 亚细胞定位分析 | 第39-40页 |
| 1.9.1 亚细胞定位载体的构建 | 第39页 |
| 1.9.2 水稻原生质体的提取及转化 | 第39-40页 |
| 1.10 水稻转基因植株的获得 | 第40-42页 |
| 1.10.1 OsSNAP32过量表达转基因植株的获得 | 第40-41页 |
| 1.10.2 OsSNAP32干涉抑制表达转基因植株的获得 | 第41-42页 |
| 1.11 水稻转基因植株的鉴定 | 第42-43页 |
| 1.11.1 OsSNAP32过量表达转基因植株的鉴定 | 第42-43页 |
| 1.11.2 OsSNAP32干涉抑制表达转基因植株的鉴定 | 第43页 |
| 1.12 转基因水稻的稻瘟病抗性鉴定 | 第43-44页 |
| 1.12.1 转基因水稻苗瘟抗性的鉴定 | 第43-44页 |
| 1.12.2 转基因水稻穗瘟抗性的鉴定 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-61页 |
| 2.1 OsSNAP32在黑壳子粳和苏御糯两个品种中的序列比较 | 第44-45页 |
| 2.2 OsSNAP32在黑壳子粳和苏御糯两个品种中均为单拷贝 | 第45-46页 |
| 2.3 OsSNAP32在不同水稻组织中组成型表达 | 第46-47页 |
| 2.4 OsSNAP32在稻瘟病菌接种后的诱导表达 | 第47-48页 |
| 2.5 OsSNAP32定位于细胞膜和细胞质中 | 第48-49页 |
| 2.6 OsSNAP32转基因水稻植株的获得及鉴定 | 第49-53页 |
| 2.6.1 OsSNAP32过量表达转基因植株的获得及鉴定 | 第49-51页 |
| 2.6.2 OsSNAP32干涉抑制表达转基因植株的获得及鉴定 | 第51-53页 |
| 2.7 OsSNAP32与水稻稻瘟病抗性有关 | 第53-61页 |
| 2.7.1 OsSNAP32与水稻苗瘟抗性有关 | 第53-59页 |
| 2.7.2 OsSNAP32与水稻穗瘟抗性有关 | 第59-61页 |
| 3 讨论 | 第61-66页 |
| 第四章 OsSNAP32互作蛋白的筛选鉴定 | 第66-80页 |
| 1 材料和方法 | 第66-72页 |
| 1.1 菌株、质粒和试剂盒 | 第66-67页 |
| 1.2 pGBKT7-OsSNAP32“诱饵”表达载体的构建 | 第67页 |
| 1.3 pGBKT7-OsSNAP32“诱饵”质粒小量转化酵母 | 第67-68页 |
| 1.3.1 酵母感受态细胞的制备 | 第67-68页 |
| 1.3.2 pGBKT7-OsSNAP32“诱饵”质粒转化酵母AH109 | 第68页 |
| 1.4 “诱饵”蛋白的转录激活活性检测及α-半乳糖苷酶活性检测 | 第68-69页 |
| 1.5 pGBKT7-OsSNAP32“诱饵”蛋白对酵母菌株AH109的毒性检测 | 第69页 |
| 1.6 水稻幼穗cDNA文库的构建 | 第69页 |
| 1.7 酵母双杂交筛选OsSNAP32的互作蛋白 | 第69-72页 |
| 1.7.1 水稻幼穗cDNA文库质粒转化已携带“诱饵”质粒的AH109 | 第69-70页 |
| 1.7.2 转化子的筛选与AD/文库质粒的纯化 | 第70页 |
| 1.7.3 阳性候选克隆的酵母质粒DNA提取及PCR验证 | 第70-71页 |
| 1.7.4 AD/文库质粒的获得 | 第71页 |
| 1.7.5 “一对一”回转酵母验证阳性候选克隆 | 第71页 |
| 1.7.6 α-半乳糖苷酶活性检测 | 第71-72页 |
| 1.7.7 阳性候选克隆的测序分析 | 第72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-78页 |
| 2.1 pGBKT7-OsSNAP32“诱饵”表达载体的构建 | 第72-73页 |
| 2.2 pGBKT7-OsSNAP32“诱饵”蛋白的转录激活活性分析 | 第73页 |
| 2.3 酵母双杂交初步筛选到的阳性克隆 | 第73-75页 |
| 2.4 “一对一”回转酵母阳性验证和α-半乳糖苷酶活性检测 | 第75-78页 |
| 3 讨论 | 第78-80页 |
| 全文结论 | 第80-82页 |
| 创新点 | 第82-84页 |
| 附录 | 第84-100页 |
| 参考文献 | 第100-114页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第114-116页 |
| 致谢 | 第116页 |
