论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| abstract | 第8-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-35页 |
| 1.1 马立克病毒的研究进展 | 第14-21页 |
| 1.1.1 MDV的分类 | 第15-16页 |
| 1.1.2 MDV基因组结构 | 第16页 |
| 1.1.3 MDV致瘤相关基因 | 第16-18页 |
| 1.1.4 MDV的感染阶段 | 第18-19页 |
| 1.1.5 影响MDV感染的因素 | 第19-20页 |
| 1.1.6 马立克病疫苗 | 第20-21页 |
| 1.2 MDV感染后宿主基因表达谱研究进展 | 第21-26页 |
| 1.2.1 利用芯片技术研究MDV感染后宿主基因表达谱 | 第22-23页 |
| 1.2.2 qRT-PCR技术研究MDV感染后宿主基因表达谱 | 第23-24页 |
| 1.2.3 RNA-seq技术及应用 | 第24-26页 |
| 1.3 病毒编码microRNA的研究进展 | 第26-34页 |
| 1.3.1 mcroiRNA的出现 | 第26-27页 |
| 1.3.2 病毒miRNA及其生物起源 | 第27-28页 |
| 1.3.3 疱疹病毒miRNA及其功能 | 第28-32页 |
| 1.3.4 MDV编码的miRNA | 第32-34页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第34-35页 |
| 第二章 MDV感染鸡脾脏组织转录组研究 | 第35-62页 |
| 2.1 前言 | 第35页 |
| 2.2 材料 | 第35-36页 |
| 2.2.1 构建测序文库及qRT-PCR验证的组织材料 | 第35页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第35页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第35-36页 |
| 2.3 方法 | 第36-42页 |
| 2.3.1 RNA提取及浓度测定 | 第36-37页 |
| 2.3.2 甲醛变性凝胶电泳检测RNA质量 | 第37页 |
| 2.3.3 测序文库的构建及测序 | 第37-38页 |
| 2.3.4 转录组测序数据质控和比对分析 | 第38-39页 |
| 2.3.5 qRT-PCR验证差异基因 | 第39-42页 |
| 2.4 结果与分析 | 第42-59页 |
| 2.4.1 RNA样品检测结果 | 第42-44页 |
| 2.4.2 Raw data的质量评估结果 | 第44-45页 |
| 2.4.3 Clean reads与参考基因组的比对结果 | 第45-46页 |
| 2.4.4 基因表达量分析结果 | 第46-47页 |
| 2.4.5 DEGs的筛选结果 | 第47-48页 |
| 2.4.6 qRT-PCR验证结果 | 第48-49页 |
| 2.4.7 DEGs的K-means分析结果 | 第49-50页 |
| 2.4.8 DEGs的GO、KEGG分析结果 | 第50-57页 |
| 2.4.9 蛋白互作网络 | 第57-59页 |
| 2.5 讨论 | 第59-60页 |
| 2.6 小结 | 第60-62页 |
| 第三章 miR-M4-5p靶向hnRNPAB促进CEF和DF-1 细胞的增殖 | 第62-87页 |
| 3.1 前言 | 第62页 |
| 3.2 材料 | 第62-65页 |
| 3.2.1 病毒和细胞材料 | 第62页 |
| 3.2.2 载体 | 第62页 |
| 3.2.3 合成的引物或核酸序列 | 第62-64页 |
| 3.2.4 主要试剂 | 第64页 |
| 3.2.5 主要仪器设备 | 第64-65页 |
| 3.3 方法 | 第65-73页 |
| 3.3.1 生物信息学方法预测 | 第65页 |
| 3.3.2 psi CHECK2- 和pcDNA6.2- 系列载体构建 | 第65-68页 |
| 3.3.3 双荧光素酶报告实验 | 第68-69页 |
| 3.3.4 miR-M4-5p过表达和GX0101感染细胞样品的制备 | 第69-70页 |
| 3.3.5 荧光定量PCR | 第70-71页 |
| 3.3.6 Western blot | 第71-72页 |
| 3.3.7 细胞增殖和凋亡检测 | 第72-73页 |
| 3.4 结果与分析 | 第73-81页 |
| 3.4.1 生物信息学预测miR-M4-5p靶标 | 第73-74页 |
| 3.4.2 候选靶基因的载体构建结果 | 第74-75页 |
| 3.4.3 双荧光素酶报告基因检测结果 | 第75-76页 |
| 3.4.4 miR-M4-5p下调hnRNPAB mRNA水平的表达 | 第76-78页 |
| 3.4.5 miR-M4-5p抑制hnRNPAB蛋白水平的表达 | 第78页 |
| 3.4.6 miR-M4-5p靶向hnRNPAB促进CEF和DF-1 细胞的增殖 | 第78-81页 |
| 3.5 讨论 | 第81-85页 |
| 3.5.1 miR-M4-5p在MDV感染中的作用 | 第81-82页 |
| 3.5.2 HnRNPs家族成员在肿瘤中的作用及hnRNPAB的作用 | 第82-85页 |
| 3.6 小结 | 第85-87页 |
| 第四章 鸡hnRNPAB蛋白单克隆抗体的制备 | 第87-100页 |
| 4.1 前言 | 第87页 |
| 4.2 材料 | 第87-88页 |
| 4.2.1 动物、细胞材料、载体和菌株 | 第87页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第87-88页 |
| 4.2.3 主要设备 | 第88页 |
| 4.3 方法 | 第88-92页 |
| 4.3.1 重组蛋白制备 | 第88-89页 |
| 4.3.2 小鼠免疫及检测 | 第89-91页 |
| 4.3.3 杂交瘤细胞制备及筛选 | 第91页 |
| 4.3.4 单克隆抗体制备 | 第91-92页 |
| 4.3.5 单克隆抗体的鉴定 | 第92页 |
| 4.4 结果与分析 | 第92-98页 |
| 4.4.1 HnRNPAB载体构建结果 | 第92-93页 |
| 4.4.2 HnRNPAB蛋白表达及纯化结果 | 第93-95页 |
| 4.4.3 HnRNPAB抗体的筛选及鉴定结果 | 第95-97页 |
| 4.4.4 HnRNPAB抗体的检测 | 第97-98页 |
| 4.5 讨论 | 第98页 |
| 4.6 小结 | 第98-100页 |
| 全文总结与创新点 | 第100-102页 |
| 全文总结 | 第100页 |
| 创新点 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-117页 |
| 附录 | 第117-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 作者简介 | 第123-124页 |
