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猪肌内脂肪细胞分化过程miRNA的鉴定及miR-34c的功能研究

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猪肌内脂肪细胞分化过程miRNA的鉴定及miR-34c的功能研究
论文目录
 
摘要第1-8页
abstract第8-13页
前言第13-14页
第一章 文献综述第14-25页
  1.1 影响猪肌内脂肪生成的因素第14-15页
    1.1.1 品种和性别第14页
    1.1.2 营养和环境第14-15页
  1.2 脂肪生成及其调控第15-18页
    1.2.1 促进脂肪细胞分化的转录因子第15-16页
    1.2.2 抑制脂肪细胞分化的转录因子第16-17页
    1.2.3 参与调控脂肪细胞分化的主要信号通路第17-18页
  1.3 miRNAs与脂肪生成第18-21页
    1.3.1 miRNA靶定转录因子调控脂肪生成第19-20页
    1.3.2 miRNAs参与成脂信号通路调控脂肪生成第20-21页
  1.4 miRNAs调控猪脂肪细胞增殖分化第21-22页
  1.5 miR-34c的研究现状第22-25页
    1.5.1 miR-34 家族成员及其进化特征和功能第22-23页
    1.5.2 miR-34c的生物学功能第23-25页
第二章 猪背最长肌和半腱肌分离的肌内脂肪细胞体外诱导成脂研究第25-38页
前言第25页
  2.1 材料与方法第25-29页
    2.1.1 实验动物第25-26页
    2.1.2 猪肌内脂肪细胞分离培养第26-27页
    2.1.3 细胞活力检测第27页
    2.1.4 BODIPY荧光染色第27页
    2.1.5 油红(oil red O, ORO)染色第27-28页
    2.1.6 TG含量测定第28页
    2.1.7 总RNA提取、cDNA合成和Real time PCR第28-29页
    2.1.8 Western Blot检测第29页
    2.1.9 数据分析第29页
  2.2 结果与分析第29-36页
    2.2.1 L-IMA和S-IMA成脂诱导模式及细胞活力分析第29-30页
    2.2.2 L-IMA和S-IMA成脂诱导分化过程中的形态学变化第30-31页
    2.2.3 L-IMA较S-IMA更易充脂第31-32页
    2.2.4 L-IMA和S-IMA分化过程中分化相关基因转录水平表达变化第32-33页
    2.2.5 L-IMA和S-IMA分化过程中分化相关基因翻译水平表达变化第33-35页
    2.2.6 调控脂肪生成信号通路的变化第35-36页
  2.3 讨论第36-37页
  2.4 小结第37-38页
第三章 猪肌内脂肪细胞分化中差异表达miRNA的鉴定第38-49页
  3.1 材料与方法第38-40页
    3.1.1 猪肌内脂肪细胞培养与收集第38页
    3.1.2 Small RNA文库制备、检测及上机测序第38-39页
    3.1.3 测序数据评估与分析第39-40页
    3.1.4 miRNAs鉴定第40页
    3.1.5 miRNAs差异表达分析第40页
    3.1.6 总RNA提取、cDNA合成和RT-q PCR验证第40页
    3.1.7 数据分析第40页
  3.2 结果与分析第40-46页
    3.2.1 猪肌内脂肪细胞的培养和分化鉴定第40-41页
    3.2.2 猪肌内脂肪细胞的RNA提取和质检第41-42页
    3.2.3 不同分化阶段猪肌内脂肪细胞分析数据质量及长度分布第42-44页
    3.2.4 不同分化时期猪肌内脂肪细胞miRNAs的筛选和鉴定第44页
    3.2.5 miRNAs测序结果定量验证第44-45页
    3.2.6 不同分化时期猪肌内脂肪细胞差异表达miRNAs分析第45-46页
    3.2.7 不同分化时期猪肌内脂肪细胞差异表达miRNAs鉴定第46页
  3.3 讨论第46-47页
  3.4 小结第47-49页
第四章 miR-34c在猪肌内脂肪细胞分化过程中的作用研究第49-61页
  4.1 材料与方法第49-52页
    4.1.1 肌内脂肪细胞分离培养第49页
    4.1.2 细胞转染第49-50页
    4.1.3 油红O染色第50页
    4.1.4 靶基因预测第50页
    4.1.5 双荧光素报告载体构建第50页
    4.1.6 双荧光素酶活性分析第50-51页
    4.1.7 总RNA提取、cDNA合成和Real time PCR第51页
    4.1.8 Western Blot分析第51页
    4.1.9 流式细胞仪测定细胞周期第51页
    4.1.10 CCK-8 检测第51-52页
    4.1.11 数据分析第52页
  4.2 结果与分析第52-59页
    4.2.1 miR-34c保守性分析第52页
    4.2.2 miR-34c表达谱分析第52-53页
    4.2.3 miR-34c参与的信号通路分析第53页
    4.2.4 过表达miR-34c抑制猪肌内脂肪细胞分化第53-55页
    4.2.5 E2F3和KLF4是miR-34c的靶基因第55-58页
    4.2.6 过表达miR-34c抑制猪肌内前体脂肪细胞增殖第58-59页
  4.3 讨论第59-60页
  4.4 小结第60-61页
结论与创新点第61-62页
结论第61页
创新点第61-62页
参考文献第62-73页
缩略词第73-74页
附录第74-78页
致谢第78-79页
作者简介第79页

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