论文目录 | |
摘要 | 第1-7页 |
abstract | 第7-10页 |
第一章 文献综述 | 第10-34页 |
1.1 SNARE膜融合系统的组成 | 第10-18页 |
1.1.1 SNARE蛋白的结构与类型 | 第10-13页 |
1.1.2 NSF与α-SNAP蛋白的结构与功能 | 第13-18页 |
1.2 SNARE介导膜融合的分子机制 | 第18-20页 |
1.3 SNARE膜融合系统与病毒侵染 | 第20-23页 |
1.4 杆状病毒简介 | 第23-33页 |
1.4.1 杆状病毒表型及其侵染循环 | 第23-24页 |
1.4.2 杆状病毒基因组结构及其分类 | 第24-25页 |
1.4.3 出芽型病毒粒子BV的侵染循环 | 第25-28页 |
1.4.4 杆状病毒的基因表达 | 第28页 |
1.4.5 杆状病毒的应用 | 第28-33页 |
1.5 选题目的及意义 | 第33-34页 |
第二章 材料与方法 | 第34-52页 |
2.1 实验材料 | 第34-37页 |
2.1.1 昆虫细胞、菌株与质粒 | 第34页 |
2.1.2 试剂盒及相关试剂 | 第34-36页 |
2.1.3 细菌培养基及其它试剂的配置 | 第36-37页 |
2.2 实验方法 | 第37-52页 |
2.2.1 昆虫SNARE蛋白注释 | 第37-38页 |
2.2.2 细胞转染与感染 | 第38页 |
2.2.3 NSF基因转录分析 | 第38-39页 |
2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
2.2.5 细胞总RNA提取 | 第40页 |
2.2.6 草地贪夜蛾NSF基因克隆 | 第40-43页 |
2.2.7 NSF突变体及其表达质粒、重组ACMNPV bacmid构建 | 第43-45页 |
2.2.8 细胞活性测定 | 第45页 |
2.2.9 缺失-补偿实验 | 第45-46页 |
2.2.10 RNA干扰 | 第46-47页 |
2.2.11 AcMNPV基因表达与基因组DNA复制检测 | 第47页 |
2.2.12 AcMNPV入侵分析 | 第47-48页 |
2.2.13 AcMNPV出芽释放分析 | 第48页 |
2.2.14 激光共聚焦显微镜分析 | 第48页 |
2.2.15 cELISA、免疫荧光与嵌合体形成分析 | 第48-49页 |
2.2.16 透射电子显微镜观察 | 第49页 |
2.2.17 免疫共沉淀 | 第49-50页 |
2.2.18 双分子荧光互补 | 第50页 |
2.2.19 出芽病毒粒子纯化 | 第50页 |
2.2.20 Western blot分析 | 第50-51页 |
2.2.21 基因序列登录号 | 第51-52页 |
第三章 结果与分析 | 第52-89页 |
3.1 昆虫SNARE系统组成基因注释 | 第52-56页 |
3.2 SNARE基因在AcMNPV病毒侵染过程中的表达谱分析 | 第56-59页 |
3.3 草地贪夜蛾NSF基因克隆及其编码蛋白的三级结构分析 | 第59-64页 |
3.4 NSF及其突变体的表达 | 第64-66页 |
3.5 过表达NSF显性-负性突变体及RNAi下调NSF蛋白表达对AcMNPV感染性病毒粒子产生的影响 | 第66-69页 |
3.6 过表达NSF显性-负性突变体对AcMNPV侵染早期阶段的影响 | 第69-71页 |
3.7 过表达NSF显性-负性突变体影响AcMNPV BV入侵宿主细胞 | 第71-73页 |
3.8 AcMNPV感染性病毒粒子的出芽释放依赖于NSF | 第73-76页 |
3.9 AcMNPV囊膜蛋白GP64在细胞表面的定位依赖于宿主NSF | 第76-78页 |
3.10 AcMNPV子代病毒核衣壳从核膜释放依赖于NSF | 第78-82页 |
3.11 NSF与AcMNPV侵染关键蛋白的互作 | 第82-87页 |
3.12 NSF存在于AcMNPV出芽病毒粒子中 | 第87-89页 |
第四章 讨论 | 第89-95页 |
4.1 AcMNPV BV的入侵需要NSF | 第90-91页 |
4.2 AcMNPV子代核衣壳经核膜释放需要NSF | 第91-95页 |
参考文献 | 第95-109页 |
附录 | 第109-111页 |
致谢 | 第111-112页 |
作者简介 | 第112页 |