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microRNA在果蝇Toll信号免疫响应中的调控作用研究

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microRNA在果蝇Toll信号免疫响应中的调控作用研究
论文目录
 
摘要第1-5页
Abstract第5-13页
主要缩略词第13-14页
第1章 绪论第14-32页
  1.1 miRNA的发现及产生过程第14-15页
    1.1.1 miRNA的发现第14页
    1.1.2 miRNA的产生过程第14-15页
  1.2 miRNA在调控免疫耐受方面的重要意义第15-22页
    1.2.1 miRNA在免疫系统调控中的方式第16-17页
    1.2.2 miRNA对免疫信号网络的调控作用第17-20页
      1.2.2.1 miRNA的信号控制模式第17-18页
      1.2.2.2 miRNA介导调控的免疫信号网络第18-19页
      1.2.2.3 miRNA控制免疫信号的强度和阈值第19-20页
      1.2.2.4 miRNA对免疫信号在时间和空间上的控制第20页
    1.2.3 miRNA对免疫应答和耐受的调控第20-22页
      1.2.3.1 miRNA对免疫稳态的调控第20-21页
      1.2.3.2 miRNA对免疫应答和耐受性的调控第21页
      1.2.3.3 miRNA对自身免疫的调控第21-22页
  1.3 miRNA参与果蝇免疫应答调控的研究进展第22-29页
    1.3.1 果蝇是一个很好的研究模型第22-25页
    1.3.2 miRNA靶基因的预测第25-27页
    1.3.3 免疫相关的miRNA在昆虫中的研究进展第27-29页
  1.4 本论文的研究目的及意义第29页
  1.5 本论文的创新点第29-31页
  1.6 本论文的技术路线第31-32页
第2章 感染M.lutes果蝇的small RNA-seq分析第32-44页
  2.1 引言第32页
  2.2 材料、试剂和仪器第32-33页
    2.2.1 实验材料第32页
    2.2.2 实验试剂第32页
    2.2.3 实验仪器第32-33页
  2.3 实验方法第33-38页
    2.3.1 果蝇培养第33-34页
    2.3.2 果蝇感染实验第34页
    2.3.3 果蝇总RNA提取第34页
    2.3.4 果蝇mRNA实时荧光定量PCR第34-36页
    2.3.5 样品的准备和Small RNA-seq第36页
    2.3.6 果蝇miRNA实时荧光定量PCR检测第36-38页
  2.4 实验结果第38-43页
    2.4.1 果蝇Toll信号通路基因不同时间点的表达分析第38-39页
    2.4.2 Small RNA-seq的结果分析第39-40页
    2.4.3 差异表达的miRNA分析第40-42页
    2.4.4 Small RNA-seq结果验证第42-43页
  2.5 讨论第43-44页
第3章 果蝇Toll信号通路相关miRNA的筛选与鉴定第44-57页
  3.1 引言第44-45页
  3.2 材料、试剂和仪器第45-46页
    3.2.1 实验材料第45页
    3.2.2 实验试剂第45页
    3.2.3 实验仪器第45-46页
  3.3 实验方法第46-51页
    3.3.1 果蝇培养第46页
    3.3.2 果蝇Gal80~(ts)-tub-Gal4系统的构建第46-47页
    3.3.3 果蝇总RNA提取第47-48页
    3.3.4 果蝇mRNA实时荧光定量PCR第48-49页
    3.3.5 果蝇miRNA实时荧光定量PCR检测第49-51页
  3.4 实验结果第51-55页
    3.4.1 Gal80~(ts)-tub-Gal4系统的工作原理第51-52页
    3.4.2 果蝇Toll信号通路相关miRNA的筛选结果第52-53页
    3.4.3 miR-958和miR-310家族分子在果蝇刺激后不同时间点的表达情况第53-54页
    3.4.4 Drosomycin-GFP系统证明miR-958和miR-310家族具有负调控作用第54-55页
  3.5 讨论第55-57页
第4章 miR-958和miR-310家族分子靶基因的预测第57-62页
  4.1 引言第57页
  4.2 材料和方法第57-58页
    4.2.1 数据收集第57页
    4.2.2 靶基因预测软件第57-58页
    4.2.3 Draw Venn Diagram和Cytoscape软件分析第58页
  4.3 实验结果第58-61页
    4.3.1 Toll信号通路相关的miR-958靶基因预测结果第58-59页
    4.3.2 Toll信号通路相关的miR-310家族靶基因预测结果第59-61页
  4.4 讨论第61-62页
第5章 miR-958和miR-310家族分子靶基因的体外验证第62-71页
  5.1 引言第62页
  5.2 材料、试剂和仪器第62-63页
    5.2.1 实验材料第62-63页
    5.2.2 实验试剂第63页
    5.2.3 实验仪器第63页
  5.3 实验方法第63-66页
    5.3.1 果蝇S2细胞的培养第63-64页
    5.3.2 质粒构建第64页
    5.3.3 定点突变质粒的构建第64页
    5.3.4 果蝇S2细胞的转染第64-65页
    5.3.5 Dual-Glo luciferase reporter检测第65-66页
  5.4 实验结果第66-70页
    5.4.1 双荧光素酶报告系统检测原理第66-67页
    5.4.2 miR-958和miR-310家族的靶位点信息第67-68页
    5.4.3 双荧光素酶报告检测结果第68-70页
  5.5 讨论第70-71页
第6章 miR-958和miR-310家族分子靶基因的体内验证第71-80页
  6.1 引言第71页
  6.2 材料、试剂和仪器第71-72页
    6.2.1 实验材料第71页
    6.2.2 实验试剂第71-72页
    6.2.3 实验仪器第72页
  6.3 实验方法第72-76页
    6.3.1 果蝇总RNA提取第72-73页
    6.3.2 果蝇mRNA实时荧光定量PCR第73-74页
    6.3.3 果蝇总蛋白的提取第74-75页
    6.3.4 Western Blotting第75-76页
  6.4 实验结果第76-79页
    6.4.1 miR-310家族靶基因体内检测结果第76-77页
    6.4.2 miR-958靶基因体内检测结果第77-79页
  6.5 讨论第79-80页
第7章 结论第80-82页
附录第82-84页
参考文献第84-95页
在读期间发表的学术论文及研究成果第95-96页
致谢第96-97页

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