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牛支原体GAPDH、PDHB和FtsZ蛋白免疫原性分析

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牛支原体GAPDH、PDHB和FtsZ蛋白免疫原性分析
论文目录
 
摘要第1-6页
Abstract第6-14页
缩略词表第14-15页
第一章 文献综述第15-30页
  1.1 牛支原体病研究进展第15-24页
    1.1.1 牛支原体病原学第15-16页
    1.1.2 牛支原体流行病学第16-17页
    1.1.3 牛支原体病的临床症状与病理变化第17-18页
    1.1.4 牛支原体病的诊断第18-20页
    1.1.5 牛支原体病的防治第20-21页
    1.1.6 牛支原体引起的免疫反应第21-22页
    1.1.7 牛支原体膜蛋白的研究进展第22-24页
  1.2 蛋白质组学概况第24-28页
    1.2.1 蛋白质组学的主要研究技术第25-27页
    1.2.2 蛋白质组学在动物医学中的应用第27-28页
  1.3 本研究目的和意义第28-30页
    1.3.1 本研究的目的第28-29页
    1.3.2 本研究的意义第29-30页
第二章 利用免疫蛋白质组学筛选牛支原体免疫原性蛋白第30-46页
  2.1 引言第30页
  2.2 材料和方法第30-37页
    2.2.1 牛支原体及其培养第30-31页
    2.2.2 血清第31页
    2.2.3 主要材料与试剂第31页
    2.2.4 主要仪器与设备第31-32页
    2.2.5 主要溶液及其配制第32-33页
    2.2.6 牛支原体全细胞蛋白的提取第33页
    2.2.7 蛋白浓度测定第33-34页
    2.2.8 双向电泳第34-36页
    2.2.9 免疫印迹第36-37页
    2.2.10 MALDI-TOF/TOF质谱鉴定及生物信息学分析第37页
  2.3 结果第37-43页
    2.3.1 牛支原体全细胞蛋白的提取及浓度测定第37-38页
    2.3.2 牛支原体蛋白双向电泳图谱第38-40页
    2.3.3 牛支原体蛋白免疫印迹图谱第40-41页
    2.3.4 MALDI-TOF/TOF质谱鉴定及生物信息学分析第41-43页
  2.4 讨论第43-45页
  2.5 小结第45-46页
第三章 牛支原体GAPDH、PDHB和FtsZ蛋白表达与免疫原性验证第46-70页
  3.1 引言第46页
  3.2 材料和方法第46-61页
    3.2.1 支原体第46页
    3.2.2 载体和菌株第46页
    3.2.3 主要材料、试剂及试剂盒第46-48页
    3.2.4 主要仪器与设备第48页
    3.2.5 主要溶液及其配制第48-50页
    3.2.6 牛支原体基因组DNA的提取第50-51页
    3.2.7 GAPDH、PDHB和FtsZ基因的扩增与定点突变第51-57页
    3.2.8 重组表达质粒pET-28a(+)-GAPDH、pET-28a(+)-PDHB和pET-28a(+)-FtsZ的构建与鉴定第57-59页
    3.2.9 重组蛋白的诱导表达与纯化第59-60页
    3.2.10 重组蛋白的免疫原性验证第60-61页
  3.3 结果第61-68页
    3.3.1 GAPDH、PDHB和FtsZ基因的扩增第61页
    3.3.2 GAPDH、PDHB和FtsZ基因的定点突变第61-62页
    3.3.3 重组表达质粒pET-28a(+)-GAPDH、pET-28a(+)-PDHB和pET-28a(+)-FtsZ的构建及双酶切鉴定第62-64页
    3.3.4 重组蛋白的诱导表达第64-66页
    3.3.5 重组蛋白GAPDH、PDHB和FtsZ的纯化与鉴定第66-67页
    3.3.6 牛支原体GAPDH、PDHB和FtsZ蛋白抗原表位分析第67-68页
  3.4 讨论第68页
  3.5 小结第68-70页
第四章 基于牛支原体重组蛋白的ELISA诊断方法的建立第70-85页
  4.1 引言第70页
  4.2 材料和方法第70-74页
    4.2.1 支原体菌种和实验动物第70页
    4.2.2 重组蛋白和阳性血清第70-71页
    4.2.3 主要材料与试剂第71页
    4.2.4 主要仪器和设备第71页
    4.2.5 多抗的制备第71-72页
    4.2.6 蛋白保守性和特异性分析第72页
    4.2.7 基于重组蛋白的间接ELISA (iELISA)检测方法的建立第72-73页
    4.2.8 iELISA反应条件的优化第73-74页
    4.2.9 iELISA检测特异性第74页
    4.2.10 iELISA与商品化试剂盒检测一致性的比较第74页
    4.2.11 iELISA与商品化试剂盒检测灵敏度的比较第74页
    4.2.12 数据统计分析第74页
  4.3 结果第74-83页
    4.3.1 蛋白序列同源性分析结果第75-77页
    4.3.2 牛支原体不同菌株之间蛋白的免疫原性第77页
    4.3.3 不同支原体及病原之间蛋白的免疫原性第77-78页
    4.3.4 rPDHB-iELISA反应条件的优化第78-81页
    4.3.5 rPDHB-iELISA检测特异性第81-82页
    4.3.6 iELISA与商品化试剂盒检测一致性比较结果第82页
    4.3.7 iELISA与商品化试剂盒检测灵敏度比较结果第82-83页
  4.4 讨论第83-84页
  4.5 小结第84-85页
第五章 牛支原体GAPDH、PDHB和FtsZ蛋白免疫原性研究第85-101页
  5.1 引言第85页
  5.2 材料和方法第85-90页
    5.2.1 实验动物和牛支原体第85页
    5.2.2 主要材料与试剂第85-87页
    5.2.3 主要仪器与设备第87页
    5.2.4 制备牛支原体全细胞提取物第87页
    5.2.5 实验动物分组及免疫第87页
    5.2.6 血清抗体水平检测第87-88页
    5.2.7 血清抗体亚类检测第88页
    5.2.8 血清细胞因子的检测第88-89页
    5.2.9 小鼠脾脏淋巴细胞的分离第89页
    5.2.10 脾脏淋巴细胞亚群检测第89-90页
    5.2.11 ELISPOT检测分泌IFN-γ的淋巴细胞第90页
  5.3 结果第90-98页
    5.3.1 血清抗体水平检测第90-91页
    5.3.2 血清抗体亚类检测第91-92页
    5.3.3 血清细胞因子的检测第92-95页
    5.3.4 脾脏淋巴细胞亚群检测第95-97页
    5.3.5 ELISPOT检测分泌IFN-γ的淋巴细胞第97-98页
  5.4 讨论第98-100页
  5.5 小结第100-101页
第六章 结论与创新点第101-103页
  6.1 结论第101页
  6.2 创新点第101-103页
参考文献第103-111页
致谢第111-113页
作者简历第113页

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