论文目录 | |
| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-21页 |
| 1.1 家蚕产丝量复杂性状分子调控机制的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.1.1 家蚕丝产量性状的研究概况 | 第14-15页 |
| 1.1.2 遗传学手段研究复杂性状的发展概况 | 第15页 |
| 1.2 蛋白质组学技术以及转录组学技术的发展 | 第15-19页 |
| 1.2.1 蛋白质组学技术的发展 | 第15-17页 |
| 1.2.2 转录组学技术的发展 | 第17-19页 |
| 1.3 丝品质改造的研究概况 | 第19页 |
| 1.4 本研究问题的提出以及其研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 1.5 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 利用定量蛋白质组学和转录组学研究家蚕丝产量性状的分子调控机制 | 第21-65页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 材料和方法 | 第21-32页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第22页 |
| 2.2.3 蛋白质提取 | 第22-23页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE和胶内消化 | 第23-24页 |
| 2.2.5 非胶内消化 | 第24页 |
| 2.2.6 基于液相色谱-串联质谱的数据收集 | 第24页 |
| 2.2.7 蛋白鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.8 利用所获得的MS数据分析蛋白丰度差异和数据库搜索 | 第25页 |
| 2.2.9 cDNA的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.10 转录组测序和数据分析 | 第26-27页 |
| 2.2.11 后部丝腺总RNA抽提和荧光定量PCR(qRT-PCR)分析 | 第27-29页 |
| 2.2.12 插入位点分析 | 第29-32页 |
| 2.2.13 生物信息学分析 | 第32页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第32-64页 |
| 2.3.1 转基因家蚕和对照品系之间的差异 | 第32-34页 |
| 2.3.2 基于SDS-PAGE和Gel-free蛋白质组学的蛋白鉴定 | 第34-50页 |
| 2.3.3 转录本鉴定结果 | 第50-55页 |
| 2.3.4 后部丝腺蛋白质组和转录组的比较分析 | 第55-61页 |
| 2.3.5 与丝蛋白合成与分泌相关的蛋白质和转录本的差异比较 | 第61-64页 |
| 2.4 结论 | 第64-65页 |
| 第三章 利用基于iTRAQ技术的蛋白质组学和基于RNA测序的转录组学来研究家蚕丝产量性状的分子调控机制 | 第65-103页 |
| 3.1 引言 | 第65页 |
| 3.2 材料和方法 | 第65-74页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第65页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第65-66页 |
| 3.2.3 家蚕饲养和材料提取 | 第66页 |
| 3.2.4 蛋白质提取和消化 | 第66-67页 |
| 3.2.5 iTRAQ分析 | 第67-68页 |
| 3.2.6 蛋白质鉴定和定量 | 第68页 |
| 3.2.7 Western Blot分析 | 第68-69页 |
| 3.2.8 转录组分析 | 第69页 |
| 3.2.9 qRT-PCR分析 | 第69-74页 |
| 3.3 结果 | 第74-94页 |
| 3.3.1 ZB和Lan10品系之间蛋白质丰度的改变 | 第74-80页 |
| 3.3.2 差异性表达的蛋白质的GO分析 | 第80-82页 |
| 3.3.3 差异性表达蛋白的生物学网络(BIN)分析 | 第82-84页 |
| 3.3.4 ZB和Lan10品系间差异性表达的转录本 | 第84页 |
| 3.3.5 差异性表达转录本的GO分析 | 第84-85页 |
| 3.3.6 差异性表达蛋白质和转录本的pathway分析 | 第85-87页 |
| 3.3.7 mRNA表达和蛋白质丰度之间的关系 | 第87-90页 |
| 3.3.8 蛋白质表达丰度的验证 | 第90-92页 |
| 3.3.9 差异性表达的蛋白质和转录本与家蚕丝产量之间的关系 | 第92-94页 |
| 3.4 讨论 | 第94-102页 |
| 3.4.1 能量代谢对于丝产量至关重要 | 第94页 |
| 3.4.2 下调的核糖体蛋白丰度影响翻译过程 | 第94-95页 |
| 3.4.3 与蛋白质的转运和加工相关的蛋白表达量降低 | 第95-96页 |
| 3.4.4 后部丝腺生长和发育的降低影响了丝蛋白的产量 | 第96页 |
| 3.4.5 核糖体和蛋白转运通道之间的反应表明了系统范围内的功能下调 | 第96-97页 |
| 3.4.6 与丝产量相关的重要的功能分类 | 第97页 |
| 3.4.7 下调的核糖体pathway和上调的代谢影响了丝产量 | 第97-101页 |
| 3.4.8 新鉴定出的转录本提升了对丝产量分子机制的理解 | 第101-102页 |
| 3.4.9 与丝蛋白合成的差异表达的蛋白质和转录本的丰度髙度一致 | 第102页 |
| 3.5 结论 | 第102-103页 |
| 第四章 利用家蚕后部丝腺生物反应器表达钙离子结合蛋白 | 第103-120页 |
| 4.1 前言 | 第103-104页 |
| 4.2 材料和方法 | 第104-107页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第104页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第104页 |
| 4.2.3 钙离子结合蛋白表达载体的构建 | 第104-105页 |
| 4.2.4 胚胎注射以及阳性个体筛选 | 第105-106页 |
| 4.2.5 插入位点的反向PCR分析 | 第106页 |
| 4.2.6 Western Blot分析 | 第106-107页 |
| 4.2.7 转基因家蚕丝蛋白的钙结合活性实验 | 第107页 |
| 4.2.8 转基因家蚕蚕丝的力学性能和热性能的测试 | 第107页 |
| 4.3 结果 | 第107-118页 |
| 4.3.1 转基因家蚕的获得 | 第107-109页 |
| 4.3.2 转基因家蚕插入位点分析 | 第109-110页 |
| 4.3.3 Western Blot鉴定结果 | 第110-112页 |
| 4.3.4 MS/MS鉴定结果 | 第112-115页 |
| 4.3.5 转基因丝蛋白的钙离子结合活性分析 | 第115-116页 |
| 4.3.6 转基因丝蛋白的力学性能和热学性能 | 第116-118页 |
| 4.4 讨论 | 第118-119页 |
| 4.5 小结 | 第119-120页 |
| 第五章 全文总结及创新点 | 第120-123页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第123页 |
| 获得的荣誉 | 第123-124页 |
| 申请的专利 | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 参考文献 | 第126-144页 |
| 附表 | 第144-172页 |
