论文目录 | |
论文创新点 | 第11-12页 |
摘要 | 第12-14页 |
Abstract | 第14-17页 |
研究意义 | 第17-18页 |
技术路线 | 第18-19页 |
第一部分 文献综述 | 第19-41页 |
第一章 RABV的研究现状 | 第19-28页 |
1. RABV的简介 | 第19-20页 |
1.1 RABV的粒子结构 | 第19-20页 |
1.2 RABV的血清型和基因型 | 第20页 |
1.3 RABV的基因组结构 | 第20页 |
2. RABV的生命周期 | 第20-22页 |
3. RABV N蛋白的生物学功能 | 第22-23页 |
3.1 RABV N蛋白作为抗击RABV的免疫保护性抗原 | 第22页 |
3.2 RABV N蛋白作为单克隆抗体诊断狂犬病的工具 | 第22页 |
3.3 RABV N蛋白对病毒增殖的影响 | 第22页 |
3.4 RABV N蛋白介导病毒逃避先天性免疫反应 | 第22-23页 |
3.5 RABV N蛋白参与形成P-N-RNA复制复合物 | 第23页 |
3.6 RABV N蛋白作为外来抗原的载体 | 第23页 |
4. RABV P蛋白的生物学功能 | 第23-26页 |
4.1 RABV P蛋白功能性结构域 | 第23-24页 |
4.2 RABV P蛋白的磷酸化 | 第24页 |
4.3 RABV P蛋白的截短突变体 | 第24页 |
4.4 RABV P蛋白的自身聚合作用 | 第24-25页 |
4.5 RABV P蛋白参与病毒RNA的合成 | 第25页 |
4.6 RABV P蛋白作为新生N蛋白的伴侣蛋白 | 第25页 |
4.7 RABV P蛋白与细胞骨架的互作 | 第25-26页 |
4.8 RABV P蛋白具有拮抗宿主细胞干扰素的能力 | 第26页 |
4.9 RABV P蛋白与线粒体复合物互作 | 第26页 |
5. 展望 | 第26-28页 |
第二章 自噬的研究进展 | 第28-41页 |
1. 细胞自噬 | 第28-29页 |
1.1 自噬的降解系统 | 第28页 |
1.2 自噬的信号通路系统 | 第28-29页 |
2. 病毒诱导自噬的分子机制 | 第29-30页 |
2.1 病毒—受体互作 | 第29-30页 |
2.2 内质网压力 | 第30页 |
3. 抗病毒自噬 | 第30-32页 |
3.1 自噬抑制病毒复制或消除病毒 | 第30-31页 |
3.2 自噬有利于感染细胞生存 | 第31页 |
3.3 自噬有助于先天性和获得性免疫 | 第31-32页 |
4. 促病毒自噬 | 第32-34页 |
4.1 有利于病毒复制 | 第32-33页 |
4.2 病毒装配和出芽 | 第33页 |
4.3 RNA翻译 | 第33-34页 |
4.4 其他间接作用 | 第34页 |
5. 病毒感染对自噬途径的调节 | 第34-37页 |
5.1 感染细胞诱导自噬泡的形成 | 第35-36页 |
5.2 病毒对自噬的破坏 | 第36-37页 |
6. 信号通路调控自噬 | 第37-38页 |
7. 自噬的研究方法 | 第38-40页 |
7.1 自噬诱导剂 | 第38页 |
7.2 自噬抑制剂 | 第38页 |
7.3 其他方式 | 第38-39页 |
7.4 自噬检测方法 | 第39-40页 |
8. 结论 | 第40-41页 |
第二部分 研究内容 | 第41-109页 |
第一章 RABV对宿主细胞自噬的诱导作用 | 第41-68页 |
1. 材料与方法 | 第42-45页 |
1.1 细胞与病毒 | 第42页 |
1.2 试剂和抗体 | 第42-43页 |
1.3 细胞样品的裂解 | 第43页 |
1.4 样品浓度的测定 | 第43页 |
1.5 免疫荧光 | 第43页 |
1.6 免疫印迹 | 第43-44页 |
1.7 病毒滴度测定 | 第44页 |
1.8 实时荧光定量PCR及绝对定量PCR | 第44-45页 |
2. 实验结果 | 第45-66页 |
2.1 RABV感染对GFP-LC3和LC3在N2a细胞中分布的影响 | 第45-51页 |
2.2 RABV感染对细胞内源性LC3及SQSTM1的影响 | 第51-53页 |
2.3 RABV感染对形成自噬溶酶体的影响 | 第53-56页 |
2.4 RABV体内感染对自噬的影响 | 第56-58页 |
2.5 RABV感染对N2a细胞自噬流的影响 | 第58-59页 |
2.6 增强自噬对病毒复制的影响 | 第59-62页 |
2.7 自噬的抑制对病毒复制的影响 | 第62-65页 |
2.8 细胞的活性实验 | 第65-66页 |
3. 讨论 | 第66-68页 |
第二章 RABV N/P蛋白对自噬的影响 | 第68-82页 |
1. 材料与方法 | 第69-71页 |
1.1 细胞与病毒 | 第69页 |
1.2 试剂和抗体 | 第69页 |
1.3 细胞样品的裂解 | 第69页 |
1.4 样品浓度的测定 | 第69-70页 |
1.5 免疫共沉淀 | 第70页 |
1.6 免疫荧光 | 第70页 |
1.7 免疫印迹 | 第70-71页 |
1.8 构建Flag-P其P蛋白截短突变体 | 第71页 |
1.9 构建GFP-P的P蛋白单点突变及多点突变体 | 第71页 |
2. 实验结果 | 第71-80页 |
2.1 RABV N/P蛋白对自噬泡聚集的影响 | 第71-72页 |
2.2 过表达RABV N/P/M/G/L蛋白对自噬泡聚集的影响 | 第72-74页 |
2.3 过表达RABV N/P/M/G/L蛋白对内源性自噬泡LC3水平的影响 | 第74-75页 |
2.4 RABV N/P蛋白对内源性LC3聚集的影响 | 第75-76页 |
2.5 RABV N/P蛋白对自噬泡和溶酶体LAMP1融合的影响 | 第76-77页 |
2.6 RABV P蛋白磷酸化对内源性LC3及SQSTM1的影响 | 第77-78页 |
2.7 RABV P蛋白截短体对内源性LC3-Ⅱ及SQSTM1的影响 | 第78-80页 |
3. 讨论 | 第80-82页 |
第三章 RABV诱导细胞自噬的信号通路机制 | 第82-109页 |
1. 材料与方法 | 第83-86页 |
1.1 细胞与病毒 | 第83页 |
1.2 试剂和抗体 | 第83-84页 |
1.3 细胞样品的裂解 | 第84页 |
1.4 样品浓度的测定 | 第84页 |
1.5 免疫共沉淀 | 第84-85页 |
1.6 免疫荧光 | 第85页 |
1.7 免疫印迹 | 第85页 |
1.8 病毒滴度测定 | 第85-86页 |
1.9 实时荧光定量PCR | 第86页 |
2.0 构建Myc-CASP2/BECN1真核表达载体及质粒转染 | 第86页 |
2. 实验结果 | 第86-105页 |
2.1 AKT-MTOR信号通路的激活参与RABV诱导的自噬 | 第86-88页 |
2.2 RABV激活AMPK-MAPK信号通路诱导自噬 | 第88-92页 |
2.3 CASP2在RABV诱导自噬中的重要作用 | 第92-95页 |
2.4 AMPK和MAPK的敲低干扰对自噬泡和溶酶体融合的影响 | 第95-97页 |
2.5 AKT/MTOR/AMPK/MAPK/CASP2对SQSTM1的影响 | 第97-98页 |
2.6 RABV N/P蛋白对触发信号通路蛋白的影响 | 第98-100页 |
2.7 RABV P蛋白和BECN1互作 | 第100-102页 |
2.8 BECN1结合RABV P蛋白诱导CASP2介导的不完全自噬反应 | 第102-104页 |
2.9 RABV诱导自噬的模式图 | 第104-105页 |
3. 讨论 | 第105-109页 |
3.1 AKT-MTOR正调控RABV诱导的自噬 | 第105-106页 |
3.2 AMPK-MAPK信号通路 | 第106-107页 |
3.3 CASP2的负调控自噬介导信号通路 | 第107页 |
3.4 病毒蛋白对自噬信号通路的调控 | 第107-109页 |
全文总结 | 第109-111页 |
展望 | 第111-112页 |
参考文献 | 第112-133页 |
第三部分 附录 | 第133-143页 |
附录A 本文涉及的引物和真核表达载体 | 第133-135页 |
附录B 英文缩略词表 | 第135-138页 |
附录C 常用缓冲液及其配方 | 第138-143页 |
致谢 | 第143-145页 |
作者简介 | 第145页 |