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弓形虫IMP1蛋白缺失及细胞自噬对弓形虫胞内增殖的作用

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弓形虫IMP1蛋白缺失及细胞自噬对弓形虫胞内增殖的作用
论文目录
 
摘要第1-12页
Abstract第12-15页
前言第15-16页
第一章 文献综述第16-34页
  1. 弓形虫的生物学特性第16-21页
  1.1 病原体第16-18页
  1.2 生活史第18-19页
  1.3 弓形虫病发病机制第19-21页
  2. 基因敲除技术研究进展第21-25页
  2.1 同源重组基因敲除第21-23页
  2.2 随机突变基因敲除第23-25页
  2.3 其他基因敲除技术第25页
  3. 细胞自噬与弓形虫互作研究第25-34页
  3.1 自噬的分类及生物学功能第26-28页
  3.2 自噬的分子机制及信号通路第28-30页
  3.3 自噬的检测第30-32页
  3.4 弓形虫自噬研究进展第32-34页
第二章 弓形虫imp1基因敲除载体及回补载体的构建第34-48页
1 材料与方法第35-40页
  1.1 材料第35页
  1.2 方法第35-40页
2 结果第40-46页
  2.1 PCR扩增第40-41页
  2.2 亚克隆载体的构建与鉴定第41-42页
  2.3 重组质粒pBSK-imp1 5'UTR-ble的构建及鉴定第42-43页
  2.4 敲除质粒pBSK-imp1 5'UTR-ble-imp1 3'UTR的鉴定第43-44页
  2.5 重组质粒pTCY-imp1 5'UTR-imp1 3'UTR的鉴定第44-45页
  2.6 重组质粒pTCY-imp1 5'UTR-Psag1-imp1 CDS-imp1 3'UTR的鉴定第45-46页
3 讨论第46-48页
第三章 弓形虫imp1基因缺失株及回补株的筛选、鉴定及生物学功能研究第48-64页
1 材料与方法第49-53页
  1.1 材料第49-50页
  1.2 方法第50-53页
2 结果第53-62页
  2.1 敲除质粒pBSK-imp1 5'UTR-ble-imp1 3'UTR的线性化第53-54页
  2.2 PCR鉴定敲除虫株第54-55页
  2.3 △imp1 RH虫株回补虫株的筛选及鉴定第55-56页
  2.4 △imp1虫株的间接免疫荧光鉴定第56页
  2.5 免疫印迹检测IMP1蛋白表达第56-57页
  2.6 △imp1虫株粘附、入侵毒力降低第57-58页
  2.7 △imp1虫株胞内增殖水平降低第58-59页
  2.8 △imp1虫株毒力水平降低第59-60页
  2.9 △imp1虫株体内增殖水平降低第60-62页
  3. 讨论第62-64页
第四章 弓形虫感染引起细胞自噬第64-79页
1 材料与方法第64-70页
  1.1 材料第64-65页
  1.2 方法第65-70页
2 结果第70-76页
  2.1 弓形虫感染Vero细胞后自噬相关蛋白的变化第70-71页
  2.2 透射电镜观察弓形虫感染Vero细胞后自噬泡的超微结构第71-73页
  2.3 免疫荧光观察弓形虫感染Vero细胞后引起LC3的聚集第73-75页
  2.4 自噬抑制剂及促进剂处理引起自噬相关蛋白的变化第75-76页
  2.5 自噬抑制剂及促进剂处理引起弓形虫胞内增殖的变化第76页
3 讨论第76-79页
第五章 弓形虫感染引起细胞自噬的信号通路第79-94页
1 材料与方法第80-84页
  1.1 材料第80-81页
  1.2 方法第81-84页
2 结果第84-91页
  2.1 弓形虫感染诱导细胞自噬的信号通路第84-87页
  2.2 抑制剂对Raf1-MEK-ERK通路的影响第87页
  2.3 抑制剂对弓形虫通过Raf1-MEK-ERK通路诱导细胞自噬的影响第87-90页
  2.4 抑制剂对弓形虫胞内增殖的影响第90页
  2.5 抑制剂对弓形虫增殖相关蛋白mRNA水平的影响第90-91页
3 讨论第91-94页
第六章 弓形虫IMP1蛋白与细胞自噬第94-105页
1 材料与方法第94-99页
  1.1 材料第94-96页
  1.2 方法第96-99页
2 结果第99-103页
  2.1 真核表达载体的PCR鉴定第99-100页
  2.2 真核表达载体的酶切鉴定第100页
  2.3 质粒转染的免疫印迹检测第100-101页
  2.4 IMP1蛋白诱导自噬的信号通路第101-102页
  2.5 IMP1蛋白与Raf1-MEK-ERK信号通路的互作第102-103页
3 讨论第103-105页
全文结论第105-106页
论文创新性第106-107页
研究展望第107-108页
附录1 常用溶液的配制第108-110页
附录2 实验过程中涉及的引物序列第110-112页
致谢第112-113页
攻读博士学位期间的主要成果第113-114页
参考文献第114-120页

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