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捻转血矛线虫半乳糖结合凝集素的山羊外周血淋巴细胞受体鉴定及功能研究

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捻转血矛线虫半乳糖结合凝集素的山羊外周血淋巴细胞受体鉴定及功能研究
论文目录
 
摘要第11-13页
ABSTRACT第13-15页
英文缩略语第15-17页
前言第17-18页
第一篇 文献综述第18-76页
第一章 捻转血矛线虫和捻转血矛线虫病第18-32页
1 捻转血矛线虫病概述第18-21页
  1.1 病原第18页
  1.2 生活史第18-19页
  1.3 流行病学第19页
  1.4 临床症状及病理变化第19页
  1.5 防治研究第19-21页
    1.5.1 化学药物第19-20页
    1.5.2 生物防治第20页
    1.5.3 疫苗研究第20-21页
2 捻转血矛线虫是研究消化道寄生线虫的模式种第21-22页
3 捻转血矛线虫分子生物学研究进展第22-26页
  3.1 免疫保护性抗原第22页
  3.2 发育调控基因第22-24页
  3.3 免疫调节分子第24页
  3.4 药物作用靶点和抗药性基因第24-26页
参考文献第26-32页
第二章 半乳糖结合凝集素第32-60页
1 Galectins的分类及分布第32-34页
2 Galectins的结构第34-37页
3 Galectins的功能第37-47页
  3.1 哺乳动物galectins的功能研究第37-44页
    3.1.1 哺乳动物原型galectins第38-39页
    3.1.2 哺乳动物串联重复型galectins第39-43页
    3.1.3 哺乳动物嵌合型galectins第43-44页
  3.2 寄生虫galectins的功能第44-47页
    3.2.1 蠕虫galectins第44-47页
    3.2.2 原虫galectins第47页
  3.3 其他物种galectins第47页
4 Galectin的受体及其参与的信号通路第47-49页
  4.1 Galectin的受体第47-48页
  4.2 Galectin参与的信号通路第48-49页
参考文献第49-60页
第三章 蛋白质间相互作用的研究方法第60-76页
1 在异种系统中检测蛋白质间相互作用第60-63页
  1.1 酵母双杂交第60-62页
  1.2 细菌双杂交第62页
  1.3 哺乳动物细胞双杂交第62-63页
  1.4 转染细胞免疫共沉淀第63页
2 在活细胞中检测蛋白质间的相互作用第63-64页
  2.1 荧光共振能量转移第63页
  2.2 荧光相关谱技术第63页
  2.3 共聚焦显微镜检测细胞内蛋白质的共定位第63-64页
  2.4 蛋白质片段互补法分析生物化学网络第64页
3 离体实验方法第64-67页
  3.1 等温滴定热分析技术第64-65页
  3.2 圆二色光谱第65页
  3.3 核磁共振第65页
  3.4 表面等离子共振第65-66页
  3.5 凝胶迁移阻滞实验第66页
  3.6 荧光偏振实验第66页
  3.7 印记叠加第66-67页
4 基于蛋白组学的技术第67-70页
  4.1 蛋白质间相互作用的计算机预测第67页
  4.2 双向凝胶电泳分析第67页
  4.3 质谱分析第67-68页
  4.4 网络资源第68-70页
参考文献第70-76页
第二篇 实验研究第76-180页
第四章 Hco-gal-m/f-山羊外周血淋巴细胞酵母双杂交系统的构建第76-104页
1 材料与方法第77-90页
  1.1 实验材料第77-79页
    1.1.1 试验动物第77页
    1.1.2 质粒与菌种第77页
    1.1.3 主要试剂第77页
    1.1.4 主要仪器第77-78页
    1.1.5 溶液配制第78-79页
  1.2 方法第79-90页
    1.2.1 山羊PBMC cDNA文库的构建第79-84页
    1.2.2 Hco-gal-m/f诱饵质粒的构建第84-88页
    1.2.3 酵母双杂交系统功能性检测第88-89页
    1.2.4 优化筛选条件第89-90页
2 结果第90-98页
  2.1 山羊PBMC的分离第90-91页
  2.2 细胞总RNA质量检测第91页
  2.3 PCR扩增双链cDNA程序中循环数的确定第91-92页
  2.4 山羊PBMC cDNA文库质量评价第92-93页
    2.4.1 电转化效率第92页
    2.4.2 文库滴度第92页
    2.4.3 插入片段大小第92-93页
  2.5 重组诱饵质粒pDHB1-Hco-gal-m/f的构建与鉴定第93-94页
  2.6 诱饵质粒pDHB1-Hco-gal-m/f在NMY51酵母中表达情况的检测第94-95页
  2.7 酵母双杂交系统功能性检测第95-96页
  2.8 筛选3-AT的最适浓度第96-98页
3 讨论第98-100页
参考文献第100-104页
第五章 山羊PBMC中Hco-gal-m/f结合蛋白的筛选第104-122页
1 材料与方法第104-108页
  1.1 实验材料第104-105页
    1.1.1 质粒及菌种第104页
    1.1.2 主要试剂第104页
    1.1.3 主要仪器第104-105页
  1.2 方法第105-108页
    1.2.1 用诱饵pDHB1-Hco-Gal-m/f在山羊PBMC cDNA文库中筛选结合蛋白第105-106页
    1.2.2 从酵母阳性克隆中提取质粒转化DH_(5α)细胞第106-107页
    1.2.3 酵母质粒转化DH5α扩增及酶切鉴定第107页
    1.2.4 阳性捕获质粒的返回验证第107-108页
    1.2.5 返回验证呈阳性的捕获质粒内插入片段的鉴定及序列分析第108页
2 结果第108-115页
  2.1 酵母双杂交初筛结果第108-109页
  2.2 返回酵母验证结果第109-111页
  2.3 通过返回验证的捕获质粒插入片段鉴定及分析结果第111-115页
    2.3.1 序列鉴定结果第111页
    2.3.2 生物信息学分析结果第111-115页
3 讨论第115-119页
参考文献第119-122页
第六章 Hco-Gal-m/f结合蛋白TMEM63A的基因克隆、表达及抗体制备第122-142页
1 材料与方法第122-129页
  1.1 实验材料第122-125页
    1.1.1 试验动物第122-123页
    1.1.2 质粒及菌株第123页
    1.1.3 主要试剂第123页
    1.1.4 主要仪器第123页
    1.1.5 溶液配制第123-125页
  1.2 方法第125-129页
    1.2.1 RACE技术扩增TMEM63A的全长基因第125-127页
    1.2.2 TMEM63A的生物信息学分析第127页
    1.2.3 重组表达载体pET28a-63A-NO的构建第127-128页
    1.2.4 重组蛋白63A-NO的表达与纯化第128-129页
    1.2.5 多克隆抗体的制备第129页
2 结果第129-136页
  2.1 TMEM63A基因的5'和3'端扩增第129-134页
  2.2 重组表达质粒pET28a-63A-NO的构建及鉴定第134页
  2.3 重组蛋白63A-NO的表达与纯化第134-136页
  2.4 大鼠抗63-NO抗体的效价及特异性检测第136页
3 讨论第136-138页
参考文献第138-142页
第七章 Co-IP验证Hco-Gal-m/f与TMEM147、SERPI和TMEM63A的结合第142-152页
1 材料与方法第142-146页
  1.1 实验材料第142-143页
    1.1.1 试验动物第142页
    1.1.2 主要试剂第142-143页
    1.1.3 主要仪器第143页
  1.2 方法第143-146页
    1.2.1 细胞裂解物的准备第143页
    1.2.2 TMEM147与rHco-Gal-m结合的co-IP检测样品制备第143-144页
    1.2.3 SERP1与rHco-Gal-m结合的co-IP检测样品制备第144-145页
    1.2.4 TMEM63A与rHco-Gal-m结合的co-IP检测样品制备第145-146页
    1.2.5 Western blot检测co-IP样品第146页
2 结果第146-148页
3 讨论第148-150页
参考文献第150-152页
第八章 Hco-gal-m/f结合蛋白的定位及功能研究第152-180页
1 材料与方法第152-160页
  1.1 实验材料第153-154页
    1.1.1 试验动物第153页
    1.1.2 主要试剂第153页
    1.1.3 主要仪器第153页
    1.1.4 试剂配制第153-154页
  1.2 方法第154-160页
    1.2.1 TMEM147、SERP1和TMEM63A在山羊PBMC不同亚型细胞上的分布研究第154-155页
    1.2.2 Hco-gal-m/f结合分子在山羊PBMC内的定位研究第155-156页
    1.2.3 siRNA干扰山羊PBMC中TMEM147,SERP1和TMEM63A的条件优化第156-158页
    1.2.4 Co-IP检验TMEM147,SERP1和TMEM63A干扰后与rHco-gal-m的结合第158页
    1.2.5 TMEM147,SERP1和TMEM63A干扰后山羊PBMC内细胞因子mRNA转录及分泌变化的检验第158-159页
    1.2.6 数据处理第159-160页
2 结果第160-172页
  2.1 TMEM147,SERP1和TMEM63A在T细胞、B细胞和单核细胞上均有分布第160页
  2.2 TMEM147,SERP1和TMEM63A在山羊PBMC内的定位第160-163页
  2.3 荧光定量PCR引物的检验及干扰条件的优化结果第163-165页
    2.3.1 siRNA的转染效率第163页
    2.3.2 荧光定量PCR引物的检验第163-164页
    2.3.3 不同siRNA的干扰效果比较结果第164-165页
    2.3.4 不同干扰时间的选择第165页
  2.4 TMEM147,SERP1和TMEM63A的干扰影响其与rHco-gal-m的结合第165-166页
  2.5 TMEM147,SERP1和TMEM63A的干扰影响山羊PBMC在不同刺激下细胞因子mRNA的转录第166-170页
    2.5.1 TMEM147的干扰对细胞因子mRNA转录的影响第167-168页
    2.5.2 SERP1的干扰对细胞因子mRNA转录的影响第168-169页
    2.5.3 TMEM63A的干扰对细胞因子mRNA转录的影响第169-170页
  2.6 TMEM147,SERP1和TMEM63A的干扰影响山羊PBMC在不同刺激下细胞因子的分泌第170-172页
3 讨论第172-175页
参考文献第175-180页
全文总结第180-182页
致谢第182-184页
博士期间论文发表情况第184页

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