论文目录 | |
| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-26页 |
| 1.1 芸薹属物种与拟南芥的比较基因组学研究 | 第16-18页 |
| 1.1.1 芸薹属物种与拟南芥的亲缘关系 | 第16-17页 |
| 1.1.2 芸薹属物种间的进化关系 | 第17-18页 |
| 1.2 MAPK的发现 | 第18-19页 |
| 1.3 植物中的MAPK | 第19-21页 |
| 1.3.1 拟南芥中的MAPK | 第20-21页 |
| 1.4 植物中MAPK的调控 | 第21-23页 |
| 1.4.1 MAPK与植物的防御反应 | 第22页 |
| 1.4.2 MAPK与氧化胁迫 | 第22-23页 |
| 1.5 MAPK与细胞周期和细胞分裂 | 第23-24页 |
| 1.6 MAPK与植物激素 | 第24-25页 |
| 1.6.1 MAPK与生长素 | 第24页 |
| 1.6.2 MAPK与细胞分裂素 | 第24页 |
| 1.6.3 MAPK与赤霉素 | 第24-25页 |
| 1.6.4 MAPK与脱落酸 | 第25页 |
| 1.7 MAPK与菌核病 | 第25-26页 |
| 引言 | 第26-28页 |
| 第2章 甘蓝型油菜及其亲本物种白菜、甘蓝MAPKC组基因家族的克隆 | 第28-48页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第28页 |
| 2.1.2 主要仪器和设备 | 第28页 |
| 2.1.3 试剂盒及试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.4 自配试剂 | 第29页 |
| 2.2 方法与步骤 | 第29-31页 |
| 2.2.1 核酸的提取 | 第29页 |
| 2.2.2 RACE cDNA第一链的合成 | 第29-30页 |
| 2.2.3 芸薹属MAPK C组基因家族的5'和3'末端的扩增 | 第30-31页 |
| 2.2.4 芸薹属MAPK C组基因家族各成员全长cDNA和gDNA序列的扩增 | 第31页 |
| 2.2.5 核酸和蛋白序列的结构和功能的生物信息学分析 | 第31页 |
| 2.2.6 蛋白的系统发育树 | 第31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-44页 |
| 2.3.1 芸薹属MAPK C组基因家族5'和3'RACE末端的克隆 | 第31页 |
| 2.3.2 芸薹属MAPK C组基因家族全长cDNA和gDNA的克隆 | 第31-32页 |
| 2.3.3 芸薹属MAPK C组基因家族的核苷酸序列特点 | 第32-39页 |
| 2.3.4 芸薹属MAPK C组基因家族推导蛋白的基本特征 | 第39-41页 |
| 2.3.5 芸薹属MAPK C组基因家族推导蛋白的结构特征 | 第41页 |
| 2.3.6 芸薹属MAPK C组基因家族核酸的同源性 | 第41-43页 |
| 2.3.7 芸薹属MAPK C组基因家族推导蛋白的同源性 | 第43页 |
| 2.3.8 系统进化分析 | 第43-44页 |
| 2.4 讨论 | 第44-46页 |
| 2.5 结论 | 第46-48页 |
| 第3章 甘蓝型油菜MAPK1在真菌和损伤诱导下的表达模式分析 | 第48-58页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第48页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第48页 |
| 3.1.2 菌株 | 第48页 |
| 3.1.3 主要仪器和设备 | 第48页 |
| 3.1.4 试剂盒及试剂 | 第48页 |
| 3.1.5 自配试剂 | 第48页 |
| 3.2 方法与步骤 | 第48-50页 |
| 3.2.1 核酸的提取 | 第48-49页 |
| 3.2.2 cDNA第一链的合成 | 第49页 |
| 3.2.3 甘蓝型油菜MAPK1启动子的扩增 | 第49页 |
| 3.2.4 甘蓝型油菜MAPK1组织特性和诱导特性的qRT-PCR分析 | 第49-50页 |
| 3.3 结果与分析 | 第50-55页 |
| 3.3.1 甘蓝型油菜MAPK1启动子扩增与分析 | 第50-52页 |
| 3.3.2 甘蓝型油菜MAPK1的组织表达特异性 | 第52页 |
| 3.3.3 MeJA、SA、ABA和H_2O_2诱导BnMAPK1表达上调 | 第52-53页 |
| 3.3.4 损伤诱导BnMAPK1表达上调 | 第53页 |
| 3.3.5 核盘菌诱导BnMAPK1表达上调 | 第53-55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-57页 |
| 3.5 结论 | 第57-58页 |
| 第4章 BnMAPK1转化甘蓝型油菜和功能鉴定 | 第58-80页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第58-61页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第58页 |
| 4.1.2 菌株和质粒 | 第58页 |
| 4.1.3 仪器和设备 | 第58页 |
| 4.1.4 试剂盒及试剂 | 第58页 |
| 4.1.5 常规试剂配制 | 第58-59页 |
| 4.1.6 抗生素贮存液配制 | 第59页 |
| 4.1.7 细菌培养基配制 | 第59-60页 |
| 4.1.8 植物培养基 | 第60-61页 |
| 4.2 方法与步骤 | 第61-67页 |
| 4.2.1 超量表达载体构建 | 第61-62页 |
| 4.2.2 超量表达载体质粒转化农杆菌 | 第62-63页 |
| 4.2.3 农杆菌介导的表达载体转化甘蓝型油菜 | 第63-64页 |
| 4.2.4 转基因植株的鉴定及栽培 | 第64页 |
| 4.2.5 转基因植株MAPK1表达量鉴定 | 第64-65页 |
| 4.2.6 转基因植株形态指标测定 | 第65页 |
| 4.2.7 转基因植株叶片表面观察 | 第65页 |
| 4.2.8 转基因植株抗核盘菌能力鉴定 | 第65页 |
| 4.2.9 转基因植株抗逆指标测定 | 第65页 |
| 4.2.10 转基因植株内源激素测定 | 第65-67页 |
| 4.3 结果与分析 | 第67-78页 |
| 4.3.1 BnMAPK1超量表达载体构建及转化农杆菌 | 第67-68页 |
| 4.3.2 BnMAPK1超量表达载体转化甘蓝型油菜黑籽系 | 第68页 |
| 4.3.3 转基因植株中MAPK1的表达情况 | 第68-69页 |
| 4.3.4 T_1代植株的检测 | 第69-70页 |
| 4.3.5 T_2代纯合株系的获得 | 第70-71页 |
| 4.3.6 T_2代植株苗期的农艺性状调查 | 第71页 |
| 4.3.7 T_2代植株蕾苔期的农艺性状调查 | 第71-72页 |
| 4.3.8 T_2代植株成熟期的农艺性状调查 | 第72-74页 |
| 4.3.9 T_2代植株叶片表面结构观察 | 第74-75页 |
| 4.3.10 T_2代植株抗病性鉴定 | 第75-76页 |
| 4.3.11 T_2代植株生理指标测定 | 第76-77页 |
| 4.3.12 T_2代植株内源激素测定 | 第77-78页 |
| 4.4 讨论 | 第78页 |
| 4.5 结论 | 第78-80页 |
| 第5章 基于高通量测序推测MAPK1介导的信号途径和分子机理 | 第80-98页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第80页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第80页 |
| 5.1.2 主要仪器和设备 | 第80页 |
| 5.1.3 试剂盒及试剂 | 第80页 |
| 5.2 方法与步骤 | 第80-82页 |
| 5.2.1 RNA准备 | 第80页 |
| 5.2.2 高通量测序 | 第80-81页 |
| 5.2.3 测序数据去杂 | 第81页 |
| 5.2.4 与参考基因组比对 | 第81页 |
| 5.2.5 表达差异分析 | 第81页 |
| 5.2.6 GO功能显著性富集分析 | 第81-82页 |
| 5.2.7 KEGG pathway显著性富集分析 | 第82页 |
| 5.2.8 MAPK级联途径基因表达量统计 | 第82页 |
| 5.3 结果与分析 | 第82-97页 |
| 5.3.1 原始数据量统计 | 第82页 |
| 5.3.2 原始测序数据质控 | 第82-84页 |
| 5.3.3 测序数据去杂后统计分析 | 第84-85页 |
| 5.3.4 与参考基因组比对 | 第85页 |
| 5.3.5 表达差异分析 | 第85-86页 |
| 5.3.6 GO功能显著性富集分析 | 第86-88页 |
| 5.3.7 KEGG pathway显著性富集分析 | 第88-91页 |
| 5.3.8 差异基因的功能注释 | 第91-94页 |
| 5.3.9 MAPK级联途径基因表达情况 | 第94-97页 |
| 5.4 讨论 | 第97页 |
| 5.5 结论 | 第97-98页 |
| 第6章 利用酵母双杂交推测MAPK1介导的信号途径和分子机理 | 第98-108页 |
| 6.1 材料与试剂 | 第98页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第98页 |
| 6.1.3 主要仪器和设备 | 第98页 |
| 6.1.4 试剂盒及试剂 | 第98页 |
| 6.2 方法与步骤 | 第98-100页 |
| 6.2.1 核酸的提取 | 第98页 |
| 6.2.2 文库cDNA的准备 | 第98页 |
| 6.2.3 酵母双杂交文库的构建 | 第98-99页 |
| 6.2.4 诱饵菌株的构建、自激活和毒性检测 | 第99页 |
| 6.2.5 相互作用蛋白的筛选 | 第99-100页 |
| 6.3 结果与分析 | 第100-106页 |
| 6.3.1 文库cDNA的制备 | 第100-101页 |
| 6.3.2 诱饵菌株自激活和毒性检测 | 第101-102页 |
| 6.3.3 相互作用蛋白的筛选 | 第102-106页 |
| 6.4 讨论 | 第106页 |
| 6.5 结论 | 第106-108页 |
| 第7章 主要结论和创新点 | 第108-110页 |
| 7.1 系统克隆了芸薹属MAPK C组基因家族的主要成员 | 第108页 |
| 7.2 明确了芸薹属MAPK C组基因家族成员之间的进化关系 | 第108页 |
| 7.3 甘蓝型油菜MAPK1可能参与多种信号途径 | 第108页 |
| 7.4 甘蓝型油菜MAPK1参与植株的生长发育 | 第108-109页 |
| 7.5 甘蓝型油菜MAPK1在植株响应病原菌中起作用 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-120页 |
| 主要缩略词 | 第120-122页 |
| 附录 | 第122-142页 |
| 致谢 | 第142-144页 |
| 发表论文及参加课题一览表 | 第144页 |
