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三倍体罗汉果转录组表达谱分析及甜苷V生物合成中4个关键酶基因的功能研究

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三倍体罗汉果转录组表达谱分析及甜苷V生物合成中4个关键酶基因的功能研究
论文目录
 
综述第1-44页
综述一 皂苷的研究进展第8-30页
参考文献第26-30页
综述二 植物中角鲨烯环化酶研究进展第30-39页
参考文献第35-39页
综述三 RNA干扰技术的研究与应用第39-44页
参考文献第42-44页
第一部分 三倍体无籽罗汉果与二倍体罗汉果的转录组及表达谱差异分析第44-65页
中文摘要第44-45页
Abstract第45-46页
缩略词第46-47页
引言第47-48页
一、材料第48页
二、方法第48页
三、结果与讨论第48-61页
  3.1 两种倍性的罗汉果果实与种子表型第48-49页
  3.2 种子发育的光镜检测第49-50页
  3.3 转录组测序、组装与注释第50-51页
  3.4 表达谱测序第51-56页
  3.5 激素含量测定及相关基因的研究第56-59页
  3.6 三萜合成途径相关基因的分析第59-60页
  3.7 转录因子第60-61页
本章小结第61-62页
参考文献第62-65页
第二部分 罗汉果甜苷V生物合成中的4个关键酶基因的功能研究第65-172页
中文摘要第65-67页
Abstract第67-69页
缩略词表第69-70页
引言第70-73页
第一章 SgCS基因的克隆及功能研究第73-111页
第一节 SgCS基因的全长克隆第73-76页
    1.1.1 材料第73页
    1.1.2 方法第73-74页
    1.1.3 结果第74-76页
      1.1.3.1 RNA的提取及检测第74-75页
      1.1.3.2 SgCS基因全长RACE克隆及SgCS-ORF的克隆第75-76页
第二节 SgCS基因的生物信息学分析第76-82页
    1.2.1 材料与方法第76页
    1.2.2 结果第76-82页
第三节 SgCS基因的时空表达分析第82-86页
    1.3.1 材料第82页
    1.3.2 方法第82-83页
      1.3.2.1 实时荧光定量方法检测SgCS基因在不同时期罗汉果果实中的表达第82-83页
      1.3.2.2 实时荧光定量方法检测SgCS基因在罗汉果不同部位中的表达第83页
    1.3.3 结果第83-86页
      1.3.3.1 SgCS基因在不同时期罗汉果果实中的表达情况第83-84页
      1.3.3.2 SgCS基因在罗汉果不同部位中的表达情况情况第84-86页
第四节 SgCS基因的原核表达研究第86-92页
    1.4.1 材料第86页
    1.4.2 方法第86-89页
      1.4.2.1 罗汉果幼果果实总RNA的提取与第一链cDNA的合成第86页
      1.4.2.2 SgCS全长基因的克隆第86-88页
      1.4.2.3 SgCS基因原核表达载体的构建第88页
      1.4.2.4 SgCS的原核表达第88-89页
    1.4.3 结果第89-92页
      1.4.3.1 SgCS基因的原核表达载体构建第89-90页
      1.4.3.2 SgCS重组蛋白的SDS-PAGE分析、融合蛋白的可溶性分析、Western Blot检测第90-92页
第五节 利用酵母表达研究SgCs基因的功能第92-99页
    1.5.1 材料第92页
    1.5.2 方法第92-94页
      1.5.2.1 酵母表达载体pYES2-SgCS的构建第92-93页
      1.5.2.2 罗汉果pYES2-SgCS基因转化酵母IVF第93-94页
      1.5.2.3 提取酵母的次生代谢产物第94页
    1.5.3 结果第94-99页
      1.5.3.1 重组酵母表达载体的构建第94-96页
      1.5.3.2 SgCS-pYES2酵母重组质粒在酵母菌株中的表达及检测第96-99页
第六节 SgCS基因的亚细胞定位研究第99-101页
    1.6.1 材料第99页
    1.6.2 方法第99-100页
      1.6.2.1 SgCS基因亚细胞定位载体的构建第99页
      1.6.2.2 农杆菌感受态的制备第99-100页
      1.6.2.3 重组的亚细胞定位载体转化农杆菌第100页
      1.6.2.4 根癌农杆菌介导转化烟草叶片第100页
    1.6.3 结果第100-101页
第七节 SgCS基因植物过表达载体的构建及根癌农杆菌介导转化拟南芥的研究第101-108页
    1.7.1 材料第101页
    1.7.2 方法第101-104页
      1.7.2.1 SgCS基因的植物过表达载体构建第101-102页
      1.7.2.2 重组的植物过表达载体SgCS-ORF-pBI121转化农杆菌GV3101第102页
      1.7.2.3 农杆菌介导重组质粒SgCS-ORF-pBI121转化拟南芥第102-103页
      1.7.2.4 转基因拟南芥的PCR鉴定第103页
      1.7.2.5 转基因拟南芥的是实时荧光定量PCR分析第103-104页
    1.7.3 结果第104-108页
      1.7.3.1 SgCS-pBI121植物表达载体的构建第104-105页
      1.7.3.2 转基因拟南芥种子的筛选第105-106页
      1.7.3.3 转SgCS基因的拟南芥表型观察第106-108页
讨论第108-111页
第二章 SgCAS基因的克隆及功能研究第111-136页
第一节 SgCAS基因的全长克隆第111-112页
    2.1.1 材料第111页
    2.1.2 方法第111页
    2.1.3 结果第111-112页
第二节 SgCAS基因的生物信息学分析第112-117页
    2.2.1 试剂与方法第112页
    2.2.2 结果第112-117页
第三节 SgCAS基因的时空表达模式研究第117-119页
    2.3.1 材料第117页
    2.3.2 方法第117页
    2.3.3 结果第117-119页
      2.3.3.1 SgCAS基因在不同时期罗汉果果实中的表达规律第117-118页
      2.3.3.2 SgCAS基因在罗汉果不同部位中的表达规律第118-119页
第四节 SgCAS基因的原核表达研究第119-122页
    2.4.1 材料第119页
    2.4.2 方法第119页
    2.4.3 结果第119-122页
      2.4.3.1 SgCAS基因的原核表达载体构建第119-120页
      2.4.3.2 SgCAS重组蛋白的SDS-PAGE分析、融合蛋白的可溶性分析、Western Blot检测第120-122页
第五节 SgCAS基因在酵母中表达研究第122-125页
    2.5.1 材料第122页
    2.5.2 方法第122页
    2.5.3 结果第122-125页
      2.5.3.1 SgCAS基因的酵母表达载体构建第122-123页
      2.5.3.2 SgCAS-pYES2酵母重组质粒在酵母中的表达及检测第123-125页
第六节 SgCAS基因的亚细胞定位研究第125-127页
    2.6.1 材料第125页
    2.6.2 方法第125页
    2.6.3 结果第125-127页
第七节 SgCAS植物RNA干扰载体的构建及转化烟草的研究第127-134页
    2.7.1 材料第127-128页
    2.7.2 方法第128-130页
      2.7.2.1 SgCAS基因植物干扰载体的构建第128-129页
      2.7.2.2 农杆菌感受态的制备第129页
      2.7.2.3 重组植物干扰载体转化农杆菌第129页
      2.7.2.4 农杆菌GV3101介导的烟草转化第129-130页
      2.7.2.5 转基因烟草的PCR鉴定及定量分析第130页
    2.7.3 结果第130-134页
      2.7.3.1 SgCAS基因植物干扰载体的构建第130-131页
      2.7.3.2 转基因植株烟草的获得及PCR鉴定第131-134页
讨论第134-136页
第三章 SgSQS基因的克隆及功能初步研究第136-153页
第一节 SgSQS基因的RACE全长克隆第136-137页
    3.1.1 材料第136页
    3.1.2 方法第136页
      3.1.2.1 SgSQS基因的RACE全长克隆第136页
    3.1.3 结果第136-137页
第二节 SgSQS全长基因的生物信息学分析第137-141页
    3.2.1 材料第137页
    3.2.2 方法第137页
    3.2.3 结果第137-141页
第三节 SgSQS基因在罗汉果中时空表达模式第141-143页
    3.3.1 材料第141页
    3.3.2 方法第141页
    3.3.3 结果第141-143页
      3.3.3.1 SgSQS基因在罗汉果果实不同时期的差异表达第141页
      3.3.3.2 SgSQS基因在罗汉果不同组织中的差异表达第141-143页
第四节 SgSQS基因的原核表达研究第143-146页
    3.4.1 材料第143页
    3.4.2 方法第143页
    3.4.3 结果第143-146页
      3.4.3.1 SgSQS原核表达载体的构建第143-144页
      3.4.3.2 SgCQS重组蛋白的SDS-PAGE分析、融合蛋白的可溶性分析、Western Blot检测第144-146页
第五节 SgSQS基因的亚细胞定位研究第146-148页
    3.5.1 材料第146页
    3.5.2 方法第146页
    3.5.3 结果第146-148页
第六节 SgSQS基因的植物过表达载体及植物RNA干扰载体的构建第148-152页
    3.6.1 材料第148页
    3.6.2 方法第148-149页
    3.6.3 结果第149-152页
      3.6.3.1 SgSQS植物过表达载体的构建第149-150页
      3.6.3.2 SgSQS植物干扰载体的构建第150-152页
讨论第152-153页
第四章 SgHMGR基因的全长克隆及功能初步研究第153-169页
第一节 SgHMGR基因的RACE克隆第153-154页
    4.1.1 材料第153页
    4.1.2 方法第153页
    4.1.3 结果第153-154页
第二节 SgHMGR全长基因的生物信息学分析第154-160页
    4.2.1 材料第154页
    4.2.2 方法第154页
    4.2.3 结果第154-160页
第三节 SgHMGR基因在罗汉果不同组织中的表达模式第160-161页
    4.3.1 材料第160页
    4.3.2 方法第160页
    4.3.3 结果第160-161页
第四节 SgHMGR的原核表达研究第161-163页
    4.4.1 材料第161页
    4.4.2 方法第161页
    4.4.3 结果第161-163页
      4.4.3.1 SgHMGR原核表达载体重组质粒的构建第161页
      4.4.3.2 重组质粒的诱导表达产物SDS-PAGE分析第161-162页
      4.4.3.3 Western blotting鉴定第162-163页
第五节 SgHMGR基因的亚细胞定位研究第163-165页
    4.5.1 材料第163页
    4.5.2 方法第163页
    4.5.3 结果第163-165页
第六节 SgHMGR基因植物过表达载体和干扰载体的构建第165-168页
    4.6.1 材料第165页
    4.6.2 方法第165-166页
    4.6.3 结果第166-168页
      4.6.3.1 SgHMGR植物过表达载体的构建第166页
      4.6.3.2 SgHMGR植物干扰载体的构建第166-168页
讨论第168-169页
参考文献第169-172页
个人简历第172-174页
致谢第174-175页

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