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玉米opaque10突变体基因的图位克隆和功能分析

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玉米opaque10突变体基因的图位克隆和功能分析
论文目录
 
摘要第1-8页
ABSTRACT第8-14页
第一章 文献综述第14-34页
  1.1 玉米第14-16页
    1.1.1 玉米研究的重要意义第14页
    1.1.2 玉米籽粒的结构和营养成分第14-15页
    1.1.3 玉米籽粒突变体的研究第15-16页
  1.2 粉质胚乳突变体的研究第16-23页
    1.2.1 粉质胚乳突变体研究的意义第16页
    1.2.2 粉质胚乳突变体介绍第16-19页
    1.2.3 粉质胚乳系列突变体的基因克隆和功能分析第19-20页
    1.2.4 粉质胚乳突变体的突变本质的研究第20-22页
    1.2.5 粉质胚乳突变体基因在生产中的应用第22-23页
  1.3 蛋白体发育的研究第23-33页
    1.3.1 蛋白体是禾本科植物中储藏蛋白的主要储存场所第23-24页
    1.3.2 玉米胚乳中的醇溶蛋白第24-25页
    1.3.3 蛋白体的发育过程第25-27页
    1.3.4 组成蛋白体的不同醇溶蛋白之间的关系第27-29页
    1.3.5 各种醇溶蛋白在蛋白体发育过程中的作用第29-31页
    1.3.6 非醇溶蛋白对蛋白体发育的影响第31-32页
    1.3.7 水稻和高粱中蛋白体发育的研究第32-33页
  1.4 立题意义第33-34页
第二章 实验材料和方法第34-52页
  2.1 实验材料第34-36页
    2.1.1 群体实验材料第34页
    2.1.2 实验中用到的菌株和载体第34-35页
    2.1.3 实验中用到的酶和生化试剂第35页
    2.1.4 培养基及抗生素所用试剂第35-36页
    2.1.5 亚细胞定位试剂第36页
    2.1.6 非连续密度梯度分离所用试剂第36页
    2.1.7 酵母双杂交所用试剂第36页
  2.2 实验方法第36-52页
    2.2.1 碱煮法提取玉米籽粒基因组第36-37页
    2.2.2 TPS法抽提玉米籽粒基因组第37页
    2.2.3 月桂基肌氨酸钠抽提法抽提叶片基因组第37-38页
    2.2.4 玉米籽粒总蛋白和醇溶蛋白的抽提第38页
    2.2.5 蛋白含量的BCA测定法(方法参考BCA定量试剂盒)第38-39页
    2.2.6 玉米籽粒总淀粉含量的测定(方法参考总淀粉含量测定试剂盒)第39页
    2.2.7 油脂成分分析方法第39-40页
    2.2.8 玉米RNA抽提第40-41页
    2.2.9 半薄切片的制作第41-43页
    2.2.10 超薄切片制作第43-44页
    2.2.11 Leica超薄切片机操作步骤第44-45页
    2.2.12 扫描电镜观察第45页
    2.2.13 免疫金标电镜染色方法第45页
    2.2.14 蛋白诱导第45-46页
    2.2.15 Western杂交第46-47页
    2.2.16 DNA片段的回收(方法参考DNA回收试剂盒)第47页
    2.2.17 连接反应体系及条件第47-48页
    2.2.18 大肠杆菌感受态细胞的热激转化第48页
    2.2.19 碱法小量提取质粒DNA第48页
    2.2.20 亚细胞定位第48-49页
    2.2.21 非连续密度梯度离心第49-50页
    2.2.22 酵母感受态的制备与转化第50-51页
    2.2.23 双荧光素酶互补实验第51-52页
第三章 实验结果与分析第52-87页
  3.1 玉米o10突变体籽粒表型分析第52-54页
    3.1.1 直接表型观察第52页
    3.1.2 细胞学观察第52-54页
  3.2 玉米o10突变体的生化成分分析第54-56页
    3.2.1 蛋白含量分析第54-55页
    3.2.2 淀粉,油脂,总氨基酸含量分析第55-56页
  3.3 O10的图位克隆第56-57页
  3.4 O10候选基因的转基因确认第57-60页
    3.4.1 RNAi确认第57-59页
    3.4.2 转基因功能互补确认第59-60页
  3.5 O10编码一个禾本科植物中特有的新型蛋白第60-62页
  3.6 O10蛋白中间的重复序列负责其在玉米中的二聚化第62-65页
    3.6.1 O10蛋白以二聚体的形式存在第62-63页
    3.6.2 O10蛋白的二聚化是由中间重复序列决定的第63-64页
    3.6.3 O10蛋白的二聚化可能是分子间的疏水作用力造成的第64-65页
  3.7 O10基因主要在籽粒中表达第65-66页
    3.7.1 O10在玉米各组织中的表达和蛋白积累第65页
    3.7.2 O10在玉米胚乳各发育时期的表达和蛋白积累第65-66页
  3.8 O10在突变体胚乳中的转录和蛋白积累第66-67页
  3.9 O10蛋白在玉米胚乳中定位在蛋白体第67-71页
    3.9.1 O10蛋白和o10蛋白在烟草中的定位第67-68页
    3.9.2 O10蛋白和o10蛋白在烟草细胞中与内质网marker的共定位第68-69页
    3.9.3 通过细胞组分分离的方法检测O10在玉米胚乳中的定位第69-70页
    3.9.4 O10定位在蛋白体的内部第70-71页
  3.10 O10蛋白的N端与醇溶蛋白互作第71-73页
    3.10.1 酵母双杂系统分析第71-72页
    3.10.2 荧光素酶系统分析第72-73页
  3.11 16-kD γ-zein和 22-kD α-zein在o10蛋白体中的分布发生变化第73-74页
  3.12 16-kD γ-zein的表达和积累上升第74-76页
  3.13 O10与其它粉质胚乳突变体之间的关系第76-78页
    3.13.1 O10与O1和FL1在酵母中没有直接的互作第76-77页
    3.13.2 O10与FL1在烟草中存在直接的互作第77页
    3.13.3 O10在各种粉质胚乳突变体中的积累第77-78页
  3.14 O10在高粱和水稻中的同源蛋白的功能第78-87页
    3.14.1 高粱和水稻中O10同源蛋白的克隆第78-80页
    3.14.2 Sb01g010810和Os03g49630主要在籽粒中表达第80-81页
    3.14.3 SB-O10和OS-O10都能在烟草细胞中与O10蛋白共定位第81页
    3.14.4 SB-O10蛋白的N端跟高粱中的醇溶蛋白互作第81-83页
    3.14.5 OS-O10蛋白的N端跟水稻中的醇溶蛋白互作第83-84页
    3.14.6 SB-O10和OS-O10蛋白的N端跟玉米中的醇溶蛋白互作第84-87页
第四章 讨论第87-93页
  4.1 O10编码一个禾本科植物中特有的快速进化的蛋白第87-88页
  4.2 O10是新发现的一个定位在蛋白体中的非醇溶蛋白第88-91页
  4.3 O10蛋白通过决定 16-kD γ-zein和 22-kD α-zein的在蛋白体中的分布来影响蛋白体的形态第91-93页
附件第93-98页
参考文献第98-105页
作者在攻读博士学位期间发表的论文第105页
作者在攻读博士学位期间发表的专利第105-106页
致谢第106页

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