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玉米ZmVPP5、Opaque7和Shrunken4基因的功能研究

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玉米ZmVPP5、Opaque7和Shrunken4基因的功能研究
论文目录
 
摘要第1-8页
ABSTRACT第8-13页
第1章 文献综述第13-37页
  1.1 玉米简介及重要性第13-14页
  1.2 VPPs蛋白家族及研究进展第14-22页
  1.3 细胞凋亡与植物发育第22-24页
  1.4 玉米opaque突变及相关研究进展第24-30页
  1.5 玉米shrunken突变及相关研究进展第30-36页
  1.6 本研究的目的和意义第36-37页
第2章 材料与方法第37-53页
  2.1 试验材料第37-38页
    2.1.1 生物材料第37-38页
    2.1.2 酶和试剂第38页
  2.2 实验方法第38-53页
    2.2.1 未成熟玉米籽粒总蛋白的提取第38-39页
    2.2.2 抗体制备第39页
    2.2.3 蛋白的表达和纯化第39-41页
    2.2.4 洋葱细胞瞬时转化-基因枪法第41页
    2.2.5 农杆菌介导的烟草转化[191]第41-42页
    2.2.6 植物细胞细胞器分离第42-43页
    2.2.7 Zm VPP5互作蛋白筛选及回转验证第43-44页
    2.2.8 互作验证-LCI assay第44-45页
    2.2.9 酵母细胞的盐敏感实验第45页
    2.2.10 转基因玉米OxVPP5的水培第45页
    2.2.11 定量PCR分析第45-46页
    2.2.12 TCA循环相关代谢物的质谱分析[145]第46页
    2.2.13 石蜡切片的制备和观察第46-47页
    2.2.14 半薄切片制备及观察第47-48页
    2.2.15 透射电镜切片制备和观察第48-49页
    2.2.16 扫描电镜样品制备和观察第49页
    2.2.17 活细胞染色[157]第49页
    2.2.18 生化成分分析第49-53页
第3章 Zm VPP5的克隆和功能研究第53-70页
3.1、引言第53页
3.2、结果与分析第53-65页
    3.2.1 ZmVPP5是一个截短形式的VPPs蛋白家族成员第53-55页
    3.2.2 类ZmVPP5截短形式VPPs成员没有形成单独的进化分支第55-56页
    3.2.3 玉米ZmVPP5在植株各组织中普遍表达第56-58页
    3.2.4 ZmVPP5在质膜、液泡膜和细胞核上均有定位第58-59页
    3.2.5 异源表达Zm VPP5降低酵母的高盐耐受性第59-60页
    3.2.6 过表达ZmVPP5的玉米植株对高盐更加敏感第60-62页
    3.2.7 酵母双杂交分析表明Zmbag6和ZmVPP5可以发生互作第62-64页
    3.2.8 共定位法进行Zm Bag6和Zm VPP5互作验证第64-65页
    3.2.9 荧光素酶半分子蛋白互作验证第65页
  3.3 总结第65-66页
  3.4 讨论第66-70页
    3.4.1 VPP5和VPP1存在潜在的相互作用关系第66-67页
    3.4.2 ZmVPP5进化来源分析第67-68页
    3.4.3 ZmVPP5互作蛋白筛选第68页
    3.4.4 ZmVPP5的生理功能第68-70页
第4章 玉米Opaque7的功能研究第70-81页
  4.1 引言第70页
  4.2 结果与分析第70-78页
    4.2.1 Opaque7是一个酰基活化酶第70-71页
    4.2.2 草酸是Opaque7的特异性底物第71-73页
    4.2.3 缺失4个氨基酸不影响Opaque7的酶活第73页
    4.2.4 籽粒中opaque7蛋白含量降低是造成突变表型的本质原因第73-74页
    4.2.5 Opaque7定位在细胞质基质中第74-75页
    4.2.6 Opaque7功能丧失造成氨基酸合成前体含量降低第75-77页
    4.2.7 加入GST-Opaque7能够使无细胞基质中产生小分子代谢物第77-78页
  4.3 总结第78-79页
  4.4 讨论第79-81页
    4.4.1 opaque7突变分子机制研究第79页
    4.4.2 草酸活化后的命运第79-81页
第5章 玉米Shrunken4基因的功能研究第81-101页
  5.1 引言第81页
  5.2 结果与分析第81-98页
    5.2.1 sh4是一个典型的玉米籽粒发育缺陷突变体第81-82页
    5.2.2 未成熟籽粒胚乳填充不足第82-83页
    5.2.3 Sh4突变造成胚乳细胞发育异常第83-85页
    5.2.4 sh4突变体主要储藏物质积累显著下降第85-87页
    5.2.5 Sh4 突变造成醇溶蛋白转录水平下降第87页
    5.2.6 Sh4 突变造成胚乳细胞大量基因表达变化第87-89页
    5.2.7 Sh4突变造成胚乳细胞凋亡提前第89-90页
    5.2.8 Sh4突变引起胚乳细胞细胞自噬现象第90-92页
    5.2.9 Sh4突变显著抑制对蛋白翻译第92-94页
    5.2.10 凋亡对糖类代谢的影响第94-98页
    5.2.11 sh4基因的图位克隆第98页
  5.3 总结第98-100页
  5.4 讨论第100-101页
    5.4.1 Sh4蛋白突变造成籽粒物质合成降低第100页
    5.4.2 Sh4突变造成细胞严重的凋亡表型第100-101页
参考文献第101-113页
作者在攻读博士学位期间公开发表的论文第113页
作者在攻读博士学位期间公开发表的专利第113-114页
作者在攻读博士学位期间所作的项目第114-115页
致谢第115-116页

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