论文目录 | |
| 摘要 | 第11-17页 |
| Abstract | 第17-23页 |
| 第一章 文献综述 | 第23-33页 |
| 1 桔小实蝇的危害与防治 | 第23页 |
| 2 桔小实蝇抗性的发展和现状 | 第23-25页 |
| 3 桔小实蝇的抗性机理研究 | 第25-30页 |
| 3.1 代谢抗性 | 第25-29页 |
| 3.2 靶标抗性 | 第29-30页 |
| 3.3 表皮穿透性 | 第30页 |
| 4 组学在桔小实蝇抗性研究的应用 | 第30-33页 |
| 引言 | 第33-35页 |
| 1 研究背景及意义 | 第33页 |
| 2 研究思路及总体框架 | 第33-35页 |
| 第二章 桔小实蝇细胞色素P450基因的克隆与序列分析 | 第35-59页 |
| 1 材料与方法 | 第35-40页 |
| 1.1 试虫 | 第35-36页 |
| 1.2 桔小实蝇总RNA的提取 | 第36页 |
| 1.3 反转录合成cDNA | 第36页 |
| 1.4 P450基因片段的扩增 | 第36-37页 |
| 1.5 P450基因3'RACE和5'RACE扩增 | 第37页 |
| 1.6 P450基因cDNA全长的验证 | 第37-39页 |
| 1.7 桔小实蝇P450基因编码蛋白的生物信息学分析 | 第39-40页 |
| 1.8 桔小实蝇P450基因氨基酸序列比对 | 第40页 |
| 1.9 系统发育树的构建 | 第40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-53页 |
| 2.1 桔小实蝇P450基因cDNA的获得及命名 | 第40页 |
| 2.2 P450基因编码蛋白生物信息学分析 | 第40-41页 |
| 2.3 桔小实蝇P450基因氨基酸序列一致性比较 | 第41-53页 |
| 2.4 桔小实蝇P450基因系统发育分析 | 第53页 |
| 3 讨论 | 第53-57页 |
| 4 小结 | 第57-59页 |
| 第三章 桔小实蝇细胞色素P450基因的表达模式解析 | 第59-73页 |
| 1 材料与方法 | 第59-61页 |
| 1.1 样本收集 | 第59-60页 |
| 1.2 RNA提取和cDNA的合成 | 第60-61页 |
| 1.3 定量PCR | 第61页 |
| 1.4 数据分析 | 第61页 |
| 1.5 P450基因在桔小实蝇不同发育阶段数字表达谱分析 | 第61页 |
| 2 结果与分析 | 第61-69页 |
| 2.1 桔小实蝇P450基因在不同地理种群的表达量 | 第61-62页 |
| 2.2 桔小实蝇P450基因在不同发育阶段的表达量 | 第62-64页 |
| 2.3 桔小实蝇P450基因在不同组织的表达量 | 第64-65页 |
| 2.4 桔小实蝇P450基因在雌雄成虫及其中肠的表达量差异 | 第65-67页 |
| 2.5 桔小实蝇P450基因在高效氯氰菊酯处理后表达量变化 | 第67-68页 |
| 2.6 桔小实蝇P450基因在柠檬醛处理后的表达量变化 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-72页 |
| 4 小结 | 第72-73页 |
| 第四章 桔小实蝇细胞色素P450还原酶基因克隆与功能研究 | 第73-95页 |
| 1 材料与方法 | 第73-77页 |
| 1.1 试虫 | 第73页 |
| 1.2 桔小实蝇细胞色素P450还原酶基因的克隆 | 第73-74页 |
| 1.3 序列分析和系统发育树构建 | 第74-75页 |
| 1.4 BdCPR的表达水平的定量PCR分析 | 第75页 |
| 1.5 利用RNAi沉默桔小实蝇P450还原酶基因 | 第75-76页 |
| 1.6 沉默效率检测以及马拉硫磷生物测定 | 第76页 |
| 1.7 桔小实蝇P450还原酶的真核表达 | 第76页 |
| 1.8 Western blot检测表达蛋白 | 第76-77页 |
| 1.9 BdCPR活性测定和细胞毒性测定 | 第77页 |
| 2 结果与分析 | 第77-88页 |
| 2.1 桔小实蝇细胞色素P450还原酶基因的克隆和序列分析 | 第77-82页 |
| 2.2 BdCPR系统发育树以及CPR序列间的一致性分析 | 第82-84页 |
| 2.3 桔小实蝇BdCPR在不同发育阶段的表达量变化 | 第84-85页 |
| 2.4 桔小实蝇BdCPR在雌雄成虫的表达量差异 | 第85-86页 |
| 2.5 桔小实蝇BdCPR在雌雄成虫不同组织的表达量差异 | 第86页 |
| 2.6 桔小实蝇BdCPR在马拉硫磷抗性和敏感品系的表达量差异 | 第86页 |
| 2.7 桔小实蝇BdCPR的基因沉默以及对马拉硫磷的敏感性测定 | 第86-87页 |
| 2.8 BdCPR基因的异源表达及活性测定 | 第87-88页 |
| 3 讨论 | 第88-93页 |
| 4 小结 | 第93-95页 |
| 第五章 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系转录组比较分析 | 第95-123页 |
| 1 材料与方法 | 第95-97页 |
| 1.1 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系试虫总RNA提取 | 第95-96页 |
| 1.2 样品文库的构建和质量检测 | 第96页 |
| 1.3 Illumina高通量测序及数据分析 | 第96页 |
| 1.4 基因表达水平及不同样品间基因差异表达分析 | 第96-97页 |
| 2 结果与分析 | 第97-117页 |
| 2.1 桔小实蝇各样品RNA质量检测 | 第97-98页 |
| 2.2 桔小实蝇转录组产量统计 | 第98页 |
| 2.3 序列组装与基因表达量 | 第98-100页 |
| 2.4 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系成虫差异表达基因 | 第100-105页 |
| 2.5 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系成虫中肠的表达差异基因 | 第105-109页 |
| 2.6 桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系成虫脂肪体的差异表达基因 | 第109-117页 |
| 3 讨论 | 第117-121页 |
| 4 小结 | 第121-123页 |
| 第六章 CYP6G6在桔小实蝇马拉硫磷抗性中的作用 | 第123-135页 |
| 1 材料与方法 | 第123-125页 |
| 1.1 CYP6G6序列分析 | 第123页 |
| 1.2 试虫及样本收集 | 第123页 |
| 1.3 利用RNAi沉默桔小实蝇CYP6G6 | 第123-124页 |
| 1.4 桔小实蝇CYP6G6的真核表达 | 第124页 |
| 1.5 桔小实蝇CYP6G6表达产物活性检测 | 第124-125页 |
| 2 结果与分析 | 第125-131页 |
| 2.1 桔小实蝇CYP6G6序列分析 | 第125-127页 |
| 2.2 CYP6G6在桔小实蝇马拉硫磷抗性和敏感品系的表达量 | 第127页 |
| 2.3 CYP6G6在桔小实蝇雌雄成虫不同组织的表达量 | 第127页 |
| 2.4 CYP6G6在桔小实蝇不同日龄成虫的表达量 | 第127-128页 |
| 2.5 桔小实蝇CYP6G6的基因沉默和生物测定 | 第128-130页 |
| 2.6 桔小实蝇CYP6G6的真核表达和活性测定 | 第130-131页 |
| 3 讨论 | 第131-134页 |
| 4 小结 | 第134-135页 |
| 第七章 主要结论、创新点及研究展望 | 第135-139页 |
| 1 主要结论 | 第135-137页 |
| 1.1 桔小实蝇38个P450基因具有P450大家族的特征 | 第135页 |
| 1.2 桔小实蝇不同P450基因的时空表达分布和应激反应存在差异 | 第135-136页 |
| 1.3 细胞色素P450还原酶影响桔小实蝇对马拉硫磷的敏感性 | 第136页 |
| 1.4 桔小实蝇马拉硫磷抗性品系中一些基因的表达量发生变化 | 第136-137页 |
| 1.5 CYP6G6可能与桔小实蝇马拉硫磷抗性有关 | 第137页 |
| 2 创新点 | 第137页 |
| 3 展望 | 第137-139页 |
| 参考文献 | 第139-161页 |
| 在读期间发表论文及参研课题情况 | 第161-163页 |
| 发表论文目录 | 第161-162页 |
| 参研课题情况 | 第162-163页 |
| 致谢 | 第163-164页 |
