论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-19页 |
| 绪论 | 第19-23页 |
| 第一篇 文献综述 | 第23-51页 |
| 第1章 PRRSV概述 | 第23-39页 |
| 1 PRRSV病毒学特征 | 第23-29页 |
| 1.1 PRRSV基因组结构 | 第24-25页 |
| 1.2 PRRSV非结构蛋白 | 第25-26页 |
| 1.3 PRRSV结构蛋白 | 第26-27页 |
| 1.4 PRRSV复制周期 | 第27-29页 |
| 2 PRRSV致病机理 | 第29-33页 |
| 2.1 PRRSV变异 | 第29页 |
| 2.2 PRRSV免疫抑制 | 第29-30页 |
| 2.3 PRRSV持续性感染 | 第30页 |
| 2.4 PRRSV抗体依赖性增强作用（ADE） | 第30-31页 |
| 2.5 PRRSV延迟中和抗体产生 | 第31-32页 |
| 2.6 PRRSV诱导炎症反应 | 第32-33页 |
| 3 PRRSV调控IFN-I信号通路 | 第33-39页 |
| 3.1 PRRSV调控TLR信号通路 | 第36页 |
| 3.2 PRRSV通过IRF-介导的RIG-I/MDA5途径靶向IFN增强子 | 第36-37页 |
| 3.3 PRRSV调控NF-κB信号通路 | 第37-38页 |
| 3.4 PRRSV抑制JAK-STAT信号和ISGs表达 | 第38-39页 |
| 第2章 MicroRNAs概述 | 第39-51页 |
| 1 miRNAs生物合成 | 第39-42页 |
| 2 miRNA与病毒 | 第42-44页 |
| 2.1 病毒miRNA影响病毒复制 | 第42-43页 |
| 2.2 宿主miRNA影响病毒复制 | 第43-44页 |
| 3 miRNA与IFN-I | 第44-48页 |
| 3.1 IFN-I诱导miRNA表达 | 第45页 |
| 3.2 miRNA与干扰素受体 | 第45-46页 |
| 3.3 miRNA与JAK-STAT信号通路 | 第46-47页 |
| 3.4 miRNA与干扰素调节因子（IRFs） | 第47页 |
| 3.5 miRNA与干扰素诱导基因（ISGs） | 第47页 |
| 3.6 miRNA与PRRSV | 第47-48页 |
| 4 本研究目的与意义 | 第48-51页 |
| 第二篇 MicroRNA-373 通过负向调控Ⅰ型干扰素促进猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）复制的机制研究 | 第51-135页 |
| 第1章 材料和方法 | 第51-81页 |
| 1 材料 | 第51-59页 |
| 1.1 实验材料 | 第51-56页 |
| 1.2 实验试剂 | 第56-59页 |
| 2 方法 | 第59-81页 |
| 2.1 细胞培养 | 第59-61页 |
| 2.2 载体构建 | 第61-67页 |
| 2.3 生物信息学预测 | 第67-68页 |
| 2.4 细胞转染、病毒增殖实验 | 第68-69页 |
| 2.5 双荧光素酶报告基因检测系统 | 第69页 |
| 2.6 实时荧光定量PCR | 第69-71页 |
| 2.7 蛋白质免疫印迹实验 | 第71-73页 |
| 2.8 电泳迁移率实验 | 第73-77页 |
| 2.9 染色质免疫共沉淀实验 | 第77-79页 |
| 2.10 病毒TCID50测定 | 第79页 |
| 2.11 数据统计学分析 | 第79-81页 |
| 第2章 结果与分析 | 第81-129页 |
| 1 PRRSV通过上调Sp1的表达促进miR-373 的转录 | 第81-92页 |
| 1.1 PRRSV感染MARC-145 细胞后上调miR-373 的表达 | 第81-83页 |
| 1.2 miR-373 核心启动子鉴定、验证 | 第83-84页 |
| 1.3 Sp1是调控miR-373 转录的重要转录因子 | 第84-88页 |
| 1.4 PRRSV和Sp1协同上调miR-373 的表达 | 第88-90页 |
| 1.5 PRRSV的nsp9和N蛋白上调miR-373 的表达 | 第90-91页 |
| 1.6 PRRSV的nsp9和N蛋白上调Sp1的表达 | 第91-92页 |
| 2 miR-373 促进PRRSV复制 | 第92-97页 |
| 2.1 miR-373 促进PRRSV在MARC-145 细胞中的复制 | 第92-93页 |
| 2.2 miR-373 促进PRRSV在PAMs中的复制 | 第93-95页 |
| 2.3 Sp1促进PRRSV复制 | 第95-96页 |
| 2.4 Sp1促进PRRSV复制是依赖于miR-373 的表达 | 第96-97页 |
| 3 miR-373 负向调控IFN-I信号通路 | 第97-110页 |
| 3.1 miR-373 靶基因的初筛选 | 第97-98页 |
| 3.2 PRRSV影响miR-373 候选靶基因的表达 | 第98-99页 |
| 3.3 miR-373 候选靶基因影响PRRSV复制 | 第99-101页 |
| 3.4 miR-373 靶基因的鉴定 | 第101-107页 |
| 3.5 miR-373 抑制IFN-β 的产生 | 第107-110页 |
| 4 NFIA和NFIB促进IFN-I的产生 | 第110-119页 |
| 4.1 检测MARC-145 细胞中抑制和过表达NFIA和NFIB的效果 | 第110-111页 |
| 4.2 NFIA和NFIB促进MARC-145 细胞中IFN-β 启动子活性和表达 | 第111-112页 |
| 4.3 NFIA和NFIB与猕猴IFN-β 启动子结合 | 第112-115页 |
| 4.4 检测PAMs中下调和过表达NFIA和NFIB的效果 | 第115-116页 |
| 4.5 NFIA和NFIB促进PAMs中IFN-β 启动子活性和表达 | 第116-117页 |
| 4.6 NFIA和NFIB能与猪IFN-β 启动子结合 | 第117-119页 |
| 5 PRRSV抑制NFIA和NFIB的表达 | 第119-123页 |
| 5.1 PRRSV抑制MARC-145 细胞和PAMs中NFIA和NFIB的表达 | 第119-120页 |
| 5.2 PRRSV抑制NFIA和NFIB的表达是依赖于miR-373 | 第120-121页 |
| 5.3 PRRSV的nsp9和N蛋白抑制MARC-145 细胞中NFIA， NFIB，IRAK1，IRAK4，IRF1，IRF9，IFNAR1和IFNAR2的表达 | 第121-123页 |
| 6 NFIA和NFIB抑制PRRSV的复制 | 第123-129页 |
| 6.1 下调NFIA和NFIB可以促进PRRSV在MRAC-145 细胞中的复制 | 第124-125页 |
| 6.2 过表达NFIA和NFIB能够抑制PRRSV在MRAC-145 细胞中的复制 | 第125-126页 |
| 6.3 下调NFIA和NFIB能够促进PRRSV在PAMs中的复制 | 第126-127页 |
| 6.4 过表达NFIA和NFIB可以抑制PRRSV在PAMs中的复制 | 第127-128页 |
| 6.5 MARC-145 细胞和PAMs的活力检测 | 第128-129页 |
| 第3章 讨论 | 第129-135页 |
| 1 PRRSV通过上调Sp1的表达促进miR-373 的转录 | 第129-130页 |
| 2 miR-373 通过负向调控IFN-I促进PRRSV复制 | 第130-133页 |
| 2.1 miR-373 促进PRRSV复制 | 第130-131页 |
| 2.2 miR-373 抑制IFN-I信号通路 | 第131页 |
| 2.3 NFIA和NFIB可能是IFN-β 的转录因子进而调控IFN-β的转录表达 | 第131-132页 |
| 2.4 PRRSV抑制NFIA、NFIB、IRAK1、IRAK4、IRF1、IRF9、IFNAR1和IFNAR2的表达 | 第132-133页 |
| 3 NFIA和NFIB抑制PRRSV的复制 | 第133-135页 |
| 结论 | 第135-137页 |
| 参考文献 | 第137-159页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果 | 第159-163页 |
| 导师及作者简介 | 第163-166页 |
| 致谢 | 第166-167页 |
