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miR156在光叶百脉根中的功能研究及百脉根转录组深度测序分析

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miR156在光叶百脉根中的功能研究及百脉根转录组深度测序分析
论文目录
 
中文摘要第1-5页
Abstract第5-7页
缩写第7-12页
第一章 引言第12-31页
  1.1 Small RNA的研究进展第12页
  1.2 sRNA的发现及分类第12-14页
  1.3 miRNA的生物发生过程及研究进展第14-17页
  1.4 miRNA在植物中的功能研究第17-19页
    1.4.1 miRNA参与植物激素信号通路的调节第17-18页
    1.4.2 miRNA在植物器官发育形成中的作用第18-19页
    1.4.3 miRNA在植物中的其他生物学功能第19页
  1.5 miR156及其靶基因SPL的功能研究进展第19-23页
  1.6 百脉根在生物学中的研究意义第23-25页
  1.7 百脉根与根瘤菌共生的分子调控机制第25-26页
  1.8 第二代测序技术第26-27页
  1.9 植物体内黄酮类化合物生物合成的研究及其意义第27-29页
  1.10 本研究的目的、内容和意义第29-31页
第二章 miR156在光叶百脉根中的功能研究第31-73页
  2.1 材料和主要试剂第31-33页
    2.1.1 植物材料第31页
    2.1.2 宿主菌和质粒载体第31页
    2.1.3 主要试剂和溶液的配制第31-33页
    2.1.4 主要仪器第33页
  2.2 载体构建和遗传转化第33-51页
    2.2.1 LjmiR156α的分子克隆第33-38页
      2.2.1.1 RNA的提取第33-35页
      2.2.1.2 cDNA第一链的合成第35页
      2.2.1.3 利用PCR克隆目标基因第35页
      2.2.1.4 PCR产物的回收第35-36页
      2.2.1.5 回收片段与克隆载体的连接第36-37页
      2.2.1.6 感受态细胞的制备及重组质粒对大肠杆菌的转化第37-38页
    2.2.2 过表达载体的构建第38页
    2.2.3 含有过表达载体的农杆菌的获得第38-39页
      2.2.3.1 农杆菌感受态细胞的制备第38-39页
      2.2.3.2 农杆菌的电转化第39页
    2.2.4 光叶百脉根的遗传转化第39-41页
    2.2.5 转基因光叶百脉根的筛选与鉴定第41-45页
      2.2.5.1 转基因植株的PCR鉴定第41-42页
      2.2.5.2 转基因株系的Southern印迹分析第42-45页
    2.2.6 LjmiR156靶基因的筛选及鉴定第45-48页
      2.2.6.1 LjmiR156靶基因的生物信息学筛选第45-46页
      2.2.6.2 LjmiR156靶基因切割位点的验证第46-48页
    2.2.7 基因表达量的检测第48页
    2.2.8 原花青素的组织化学染色第48页
    2.2.9 光叶百脉根与根瘤菌的共生第48-50页
    2.2.10 根瘤发生相关基因的表达分析第50-51页
    2.2.11 统计学分析第51页
  2.3 结果与分析第51-68页
    2.3.1 LjmiR156a的分子克隆及在光叶百脉根中的过表达第51-54页
    2.3.2 过表达载体的构建第54-56页
    2.3.3 miR156过表达光叶百脉根的获得第56-57页
    2.3.4 miR156过表达光叶百脉根株系的Southern杂交验证第57-59页
    2.3.5 miR156过表达植株的表型特征第59-61页
    2.3.6 光叶百脉根miR156靶基因的预测及检验第61-65页
      2.3.6.1 光叶百脉根miR156潜在靶基因的预测分析第61-62页
      2.3.6.2 Lj-miR156对靶基因的调控作用第62-65页
    2.3.7 过表达miR156对光叶百脉根与根瘤菌共生的影响第65-67页
    2.3.8 miR156可以影响黄酮类化合物的分布第67-68页
  2.4 讨论第68-73页
第三章 百脉根转录组及表达谱的测定第73-87页
  3.1 实验材料与方法第73-76页
    3.1.1 实验材料第73页
    3.1.2 RNA的提取第73页
    3.1.3 转录组测定第73-74页
    3.1.4 数据分析第74-76页
  3.2 百脉根转录组的分析第76-84页
    3.2.1 测序结果分析第76-77页
    3.2.2 百脉根转录组与光叶百脉根基因组的比较第77-78页
    3.2.3 对拼接序列进行基因功能注释第78-79页
    3.2.4 类黄酮合成代谢途径相关基因第79-83页
    3.2.5 百脉根转录组中的转录因子第83-84页
  3.3 各器官基因的数字表达谱分析第84-86页
  3.4 讨论第86-87页
结论第87-88页
附录第88-91页
附表1 论文中所使用的引物第88-91页
参考文献第91-102页
攻读博士学位期间取得的学术成果第102-103页
个人简介第103-104页
致谢第104页

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