论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-20页 |
| 第1章 文献综述 | 第20-46页 |
| 1.1 冷胁迫是影响玉米产量最重要的非生物胁迫之一 | 第20-21页 |
| 1.2 低温对玉米生长的影响 | 第21页 |
| 1.3 低温胁迫的整体效应 | 第21-24页 |
| 1.3.1 低温对光合作用的影响 | 第22-24页 |
| 1.4 逆境响应蛋白 | 第24-26页 |
| 1.4.1 COR/LEA和脱水蛋白 | 第24-25页 |
| 1.4.2 抗冻蛋白 | 第25-26页 |
| 1.4.3 冷休克蛋白和RNA结合蛋白 | 第26页 |
| 1.5 膜组分的改变 | 第26-27页 |
| 1.6 渗透调节物质 | 第27-29页 |
| 1.6.1 脯氨酸 | 第27页 |
| 1.6.2 甜菜碱 | 第27-28页 |
| 1.6.3 多胺 | 第28-29页 |
| 1.7 活性氧清除系统 | 第29-30页 |
| 1.8 植物激素 | 第30-31页 |
| 1.8.1 脱落酸 | 第30页 |
| 1.8.2 水杨酸 | 第30-31页 |
| 1.8.3 油菜素内酯 | 第31页 |
| 1.8.4 茉莉酸 | 第31页 |
| 1.9 低温信号转导途径 | 第31-39页 |
| 1.9.1 逆境感受器 | 第32页 |
| 1.9.2 信号转导 | 第32-33页 |
| 1.9.3 转录调控 | 第33-35页 |
| 1.9.4 转录后调控 | 第35-37页 |
| 1.9.5 翻译后修饰 | 第37-39页 |
| 1.10 蛋白质组学的研究进展 | 第39-44页 |
| 1.10.1 蛋白质组学研究的技术手段 | 第40-42页 |
| 1.10.2 蛋白质组在非生物胁迫中的应用 | 第42-44页 |
| 1.11 本研究的目的和意义 | 第44-46页 |
| 第2章 冷胁迫下玉米叶片和根部基因表达谱的研究 | 第46-74页 |
| 2.1 材料与方法 | 第47-60页 |
| 2.1.1 菌种与载体 | 第47页 |
| 2.1.2 试剂 | 第47-48页 |
| 2.1.3 试验所需试剂及培养基的配制 | 第48-49页 |
| 2.1.4 仪器 | 第49页 |
| 2.1.5 植物材料 | 第49页 |
| 2.1.6 冷胁迫处理 | 第49页 |
| 2.1.7 总RNA的提取 | 第49-50页 |
| 2.1.8 基因组DNA的去除 | 第50页 |
| 2.1.9 双链cDNA的合成 | 第50-51页 |
| 2.1.10 cDNA-AFLP程序 | 第51-56页 |
| 2.1.11 再次PCR | 第56页 |
| 2.1.12 目的片段的琼脂糖回收 | 第56-57页 |
| 2.1.13 测序 | 第57-58页 |
| 2.1.14 序列分析 | 第58-59页 |
| 2.1.15 荧光定量RT- PCR | 第59-60页 |
| 2.2 结果与分析 | 第60-70页 |
| 2.2.1 RNA的提取 | 第60-61页 |
| 2.2.2 cDNA合成 | 第61-62页 |
| 2.2.3 cDNA-AFLP分析 | 第62-65页 |
| 2.2.4 差异片段的回收测序 | 第65-66页 |
| 2.2.5 序列分析 | 第66-68页 |
| 2.2.6 差异表达基因的验证 | 第68-70页 |
| 2.3 讨论 | 第70-72页 |
| 2.3.1 信号转导 | 第71页 |
| 2.3.2 转录调控 | 第71页 |
| 2.3.3 翻译和翻译后修饰 | 第71-72页 |
| 2.3.4 细胞代谢与组织 | 第72页 |
| 2.4 结论 | 第72-74页 |
| 第3章 玉米ZmSEC14p基因的克隆及序列分析 | 第74-90页 |
| 3.1 材料与方法 | 第75-82页 |
| 3.1.1 菌种与载体 | 第75页 |
| 3.1.2 试剂 | 第75页 |
| 3.1.3 试验所需试剂及培养基的配制 | 第75页 |
| 3.1.4 仪器 | 第75页 |
| 3.1.5 植物材料 | 第75页 |
| 3.1.6 冷胁迫处理 | 第75页 |
| 3.1.7 RNA提取和cDNA第一链的合成 | 第75-76页 |
| 3.1.8 ZmSEC14p基因 3’端序列的克隆 | 第76页 |
| 3.1.9 ZmSEC14p 3’端引物设计与合成 | 第76页 |
| 3.1.10 ZmSEC14p 3’端的扩增 | 第76-77页 |
| 3.1.11 ZmSEC14p 3’端PCR产物的回收、连接及测序 | 第77页 |
| 3.1.12 ZmSEC14p 5’端的克隆 | 第77-78页 |
| 3.1.13 ZmSEC14p 5’端引物的设计与合成 | 第78页 |
| 3.1.14 cDNA第一条链的合成 | 第78-79页 |
| 3.1.15 cDNA第一条链的纯化 | 第79页 |
| 3.1.16 纯化cDNA第一条链的加尾反应 | 第79-80页 |
| 3.1.17 加尾cDNA的纯化 | 第80页 |
| 3.1.18 ZmSEC14p 5’端的克隆 | 第80页 |
| 3.1.19 ZmSEC14p ORF的克隆 | 第80-81页 |
| 3.1.20 回收产物的平末端加A | 第81页 |
| 3.1.21 琼脂糖凝胶回收、连接、测序 | 第81页 |
| 3.1.22 生物信息学分析 | 第81-82页 |
| 3.2 结果与分析 | 第82-88页 |
| 3.2.1 玉米ZmSEC14p基因 3’端序列的克隆 | 第82页 |
| 3.2.2 玉米ZmSEC14p基因 5’端序列的克隆 | 第82-83页 |
| 3.2.3 玉米ZmSEC14p基因ORF克隆 | 第83-84页 |
| 3.2.4 ZmSEC14p的结构特性 | 第84-85页 |
| 3.2.5 多重序列比对和系统进化树分析 | 第85-88页 |
| 3.3 讨论 | 第88-89页 |
| 3.4 结论 | 第89-90页 |
| 第4章 玉米ZmSEC14p基因的功能分析 | 第90-118页 |
| 4.1 材料 | 第90-92页 |
| 4.1.1 菌种和载体 | 第90-91页 |
| 4.1.2 试剂 | 第91页 |
| 4.1.3 仪器 | 第91页 |
| 4.1.4 试验所需试剂及培养基的配制 | 第91-92页 |
| 4.2 实验方法 | 第92-104页 |
| 4.2.1 二周龄玉米幼苗的处理 | 第92-93页 |
| 4.2.2 ZmSEC14p表达载体的构建 | 第93-96页 |
| 4.2.3 ZmSEC14p亚细胞定位载体的构建 | 第96页 |
| 4.2.4 转化拟南芥的研究 | 第96-104页 |
| 4.3 结果与分析 | 第104-114页 |
| 4.3.1 ZmSEC14p基因的克隆及表达载体的构建 | 第104-105页 |
| 4.3.2 亚细胞定位载体的构建 | 第105页 |
| 4.3.3 转基因拟南芥纯合株系的筛选及分子鉴定 | 第105-106页 |
| 4.3.4 非生物胁迫下ZmSEC14p基因的表达 | 第106页 |
| 4.3.5 玉米ZmSEC14p组织特异性表达 | 第106-107页 |
| 4.3.6 ZmSEC14p蛋白的亚细胞定位 | 第107-108页 |
| 4.3.7 转基因拟南芥的表型分析 | 第108-110页 |
| 4.3.8 ROS水平检测与抗氧化物分析 | 第110-112页 |
| 4.3.9 PLC基因与冷相关marker基因的表达 | 第112-114页 |
| 4.4 讨论 | 第114-116页 |
| 4.5 结论 | 第116-118页 |
| 第5章 低温胁迫下玉米蛋白质组学的研究 | 第118-154页 |
| 5.1 材料 | 第118-119页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第118页 |
| 5.1.2 冷胁迫处理 | 第118-119页 |
| 5.2 实验方法 | 第119-125页 |
| 5.2.1 实验流程 | 第119-120页 |
| 5.2.2 蛋白质提取过程 | 第120页 |
| 5.2.3 蛋白质浓度测定 | 第120-121页 |
| 5.2.4 SDS电泳 | 第121页 |
| 5.2.5 蛋白质酶解 | 第121页 |
| 5.2.6 iTRAQ标记 | 第121页 |
| 5.2.7 SCX分离 | 第121页 |
| 5.2.8 基于Triple TOF 5600的LC-ESI-MS/MS分析 | 第121-122页 |
| 5.2.9 差异蛋白的生物信息学分析 | 第122页 |
| 5.2.10 RNA提取和qRT-PCR | 第122-123页 |
| 5.2.11 抗氧化物的测定 | 第123-125页 |
| 5.3 结果与分析 | 第125-146页 |
| 5.3.1 蛋白浓度测定与SDS-PAGE检测 | 第125-126页 |
| 5.3.2 数据分析 | 第126-146页 |
| 5.4 讨论 | 第146-153页 |
| 5.4.1 碳和能量代谢 | 第147页 |
| 5.4.2 转录后调节和翻译后修饰 | 第147-149页 |
| 5.4.3 氨基酸转运与代谢 | 第149-150页 |
| 5.4.4 逆境响应 | 第150页 |
| 5.4.5 信号转导 | 第150-151页 |
| 5.4.6 玉米苗期低温胁迫响应的代谢通路 | 第151-153页 |
| 5.5 结论 | 第153-154页 |
| 第6章 全文结论 | 第154-156页 |
| 参考文献 | 第156-188页 |
| 作者简介与科研成果 | 第188-191页 |
| 致谢 | 第191-192页 |
