论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-18页 |
| 主要符号表 | 第18-19页 |
| 1 绪论 | 第19-36页 |
| 1.1 番茄晚疫病的研究进展 | 第20-23页 |
| 1.1.1 晚疫病致病菌 | 第20页 |
| 1.1.2 番茄晚疫病的危害 | 第20-21页 |
| 1.1.3 番茄抗晚疫病的研究现状 | 第21-22页 |
| 1.1.4 番茄晚疫病的抗病机制 | 第22-23页 |
| 1.2 植物转录因子概述 | 第23-29页 |
| 1.2.1 转录因子结构特征 | 第24-25页 |
| 1.2.2 转录因子功能的研究策略 | 第25-27页 |
| 1.2.3 与植物胁迫应答相关的转录因子 | 第27-29页 |
| 1.3 WRKY转录因子家族研究进展 | 第29-34页 |
| 1.3.1 WRKY转录因子的结构与分类 | 第29-30页 |
| 1.3.2 WRKY转录因子的作用机制及调控方式 | 第30-31页 |
| 1.3.3 WRKY转录因子的表达及生物学功能 | 第31-33页 |
| 1.3.4 番茄WRKY转录因子的研究现状 | 第33-34页 |
| 1.4 本论文的选题依据和研究内容 | 第34-36页 |
| 1.4.1 选题依据 | 第34-35页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第35-36页 |
| 2 SpWRKY基因的克隆及表达特性分析 | 第36-65页 |
| 2.1 引言 | 第36页 |
| 2.2 材料、试剂及仪器 | 第36-37页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第37页 |
| 2.2.3 主要实验仪器 | 第37页 |
| 2.3 实验方法 | 第37-46页 |
| 2.3.1 番茄材料的培养 | 第37-38页 |
| 2.3.2 致病疫霉的培养及接种 | 第38页 |
| 2.3.3 WRKY转录因子保守结构域片段的克隆 | 第38-42页 |
| 2.3.4 SpWRKY基因的电子克隆 | 第42-43页 |
| 2.3.5 SpWRKY基因的RT-PCR验证 | 第43-44页 |
| 2.3.6 检测SpWRKY基因在感病番茄品种中的存在 | 第44页 |
| 2.3.7 序列的生物信息学分析 | 第44页 |
| 2.3.8 SpWRKY基因在番茄中的表达特性分析 | 第44-46页 |
| 2.3.9 数据统计分析 | 第46页 |
| 2.4 结果与分析 | 第46-62页 |
| 2.4.1 获得含有WRKY结构域的基因片段 | 第46-47页 |
| 2.4.2 SpWRKY基因的获得 | 第47-49页 |
| 2.4.3 SpWRKY与其它番茄种质中同源基因的序列比对 | 第49-51页 |
| 2.4.4 SpWRKY基因编码蛋白的特性分析 | 第51-56页 |
| 2.4.5 SpWRKY同源蛋白序列比对及进化树分析 | 第56-58页 |
| 2.4.6 SpWRKY基因在番茄不同组织中的表达分析 | 第58页 |
| 2.4.7 致病疫霉接种后SpWRKY在抗、感病番茄中的差异表达分析 | 第58-60页 |
| 2.4.8 非生物胁迫条件下SpWRKY基因的表达特性分析 | 第60-62页 |
| 2.5 讨论 | 第62-64页 |
| 2.6 本章小结 | 第64-65页 |
| 3 SpWRKY基因在番茄防卫反应中的功能研究 | 第65-117页 |
| 3.1 引言 | 第65-66页 |
| 3.2 材料、试剂及仪器 | 第66-67页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第66页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第66-67页 |
| 3.2.3 主要实验仪器 | 第67页 |
| 3.3 实验方法 | 第67-81页 |
| 3.3.1 重组病毒载体pTRV2-SpWRKY的构建 | 第67-69页 |
| 3.3.2 载体转化农杆菌 | 第69页 |
| 3.3.3 病毒诱导SpWRKY基因沉默 | 第69-70页 |
| 3.3.4 SpWRKY基因沉默效率的检测 | 第70页 |
| 3.3.5 过表达载体pBI121-SpWRKY的构建 | 第70-72页 |
| 3.3.6 农杆菌介导的番茄遗传转化 | 第72-73页 |
| 3.3.7 转基因番茄植株的分子检测 | 第73-75页 |
| 3.3.8 番茄植株的抗病性鉴定 | 第75-76页 |
| 3.3.9 番茄植株的抗逆性鉴定 | 第76页 |
| 3.3.10 组织化学染色 | 第76-77页 |
| 3.3.11 转基因番茄生理指标的测定 | 第77-80页 |
| 3.3.12 防卫相关基因的表达分析 | 第80-81页 |
| 3.3.13 数据统计分析 | 第81页 |
| 3.4 结果与分析 | 第81-111页 |
| 3.4.1 重组病毒载体pTRV2-SpWRKY的获得 | 第81-84页 |
| 3.4.2 沉默植株中SpWRKY基因表达量的检测 | 第84页 |
| 3.4.3 SpWRKY基因沉默减弱番茄植株的抗病能力 | 第84-87页 |
| 3.4.4 沉默SpWRKY影响PR基因的表达 | 第87-88页 |
| 3.4.5 重组表达载体pBI121-SpWRKY的获得 | 第88-90页 |
| 3.4.6 过表达SpWRKY转基因番茄植株的获得 | 第90-91页 |
| 3.4.7 转基因番茄植株的鉴定 | 第91-95页 |
| 3.4.8 过表达SpWRKY显著增强番茄的抗病性 | 第95-102页 |
| 3.4.9 过表达SpWRKY1显著提高番茄的耐盐性 | 第102-107页 |
| 3.4.10 过表达SpWRKY1显著提高番茄的抗旱性 | 第107-111页 |
| 3.5 讨论 | 第111-116页 |
| 3.6 本章小结 | 第116-117页 |
| 4 番茄SpWRKY1基因在烟草中的异源表达及功能分析 | 第117-137页 |
| 4.1 引言 | 第117页 |
| 4.2 材料、试剂及仪器 | 第117-118页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第117页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第117页 |
| 4.2.3 主要实验仪器 | 第117-118页 |
| 4.3 实验方法 | 第118-121页 |
| 4.3.1 烟草转化 | 第118页 |
| 4.3.2 转基因烟草的分子检测 | 第118-120页 |
| 4.3.3 转基因烟草的抗病性鉴定 | 第120页 |
| 4.3.4 转基因烟草的耐盐性及抗旱性鉴定 | 第120-121页 |
| 4.3.5 抗性生理指标的测定 | 第121页 |
| 4.3.6 防卫相关基因的表达分析 | 第121页 |
| 4.3.7 数据统计分析 | 第121页 |
| 4.4 结果与分析 | 第121-134页 |
| 4.4.1 异源表达SpWRKY1转基因烟草植株的获得 | 第121-122页 |
| 4.4.2 转基因烟草植株的鉴定 | 第122-123页 |
| 4.4.3 异源表达番茄SpWRKY1显著增强转基因烟草的抗病性 | 第123-127页 |
| 4.4.4 异源表达番茄SpWRKY1显著提高转基因烟草的耐盐性 | 第127-131页 |
| 4.4.5 异源表达番茄SpWRKY1显著提高转基因烟草的抗旱性 | 第131-134页 |
| 4.5 讨论 | 第134-136页 |
| 4.6 本章小结 | 第136-137页 |
| 5 结论与展望 | 第137-139页 |
| 5.1 结论 | 第137页 |
| 5.2 创新点 | 第137-138页 |
| 5.3 展望 | 第138-139页 |
| 参考文献 | 第139-152页 |
| 附录A 本论文所用培养基配方 | 第152-153页 |
| 附录B 本论文所用质粒图谱 | 第153-154页 |
| 附录C 本论文电泳所用DNA Marker | 第154-155页 |
| 附录D SpWRKY基因的cDNA序列及其推导的氨基酸序列 | 第155-158页 |
| 附录E SpWRKY基因与其它番茄种质中同源基因的序列比对 | 第158-162页 |
| 附录F SpWRKY转录因子的理化性质 | 第162-163页 |
| 作者简介 | 第163页 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 | 第163-165页 |
| 致谢 | 第165页 |
