论文目录 | |
| 摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 缩略词表 | 第17-21页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-47页 |
| 1 甘草的研究进展 | 第21-27页 |
| 1.1 简介 | 第21页 |
| 1.2 活性成分 | 第21-22页 |
| 1.2.1 皂苷类 | 第21-22页 |
| 1.2.2 黄酮类 | 第22页 |
| 1.2.3 异黄酮类 | 第22页 |
| 1.2.4 香豆素类 | 第22页 |
| 1.2.5 其他化合物类 | 第22页 |
| 1.3 药理作用 | 第22-27页 |
| 2 甘草酸苷的研究进展 | 第27-32页 |
| 2.1 结构与分类 | 第27页 |
| 2.2 生物活性 | 第27-31页 |
| 2.2.1 免疫调节 | 第28页 |
| 2.2.2 抗病毒 | 第28-29页 |
| 2.2.3 抗菌、抗原虫 | 第29-30页 |
| 2.2.4 抗炎 | 第30页 |
| 2.2.5 抗哮喘和神经保护 | 第30-31页 |
| 2.3 药代动力学 | 第31页 |
| 2.4 副作用和安全性研究 | 第31-32页 |
| 3 沙门氏菌的简介 | 第32-35页 |
| 3.1 沙门氏菌的毒力岛 | 第32-33页 |
| 3.2 沙门氏菌感染与肠道免疫反应 | 第33-35页 |
| 4 树突状细胞(DC)的成熟与功能 | 第35-41页 |
| 4.1 DC的来源和分类 | 第35-38页 |
| 4.1.1 cDCs | 第35-36页 |
| 4.1.2 pDCs | 第36页 |
| 4.1.3 LCs | 第36-37页 |
| 4.1.4 moDCs | 第37-38页 |
| 4.2 DC的成熟 | 第38-39页 |
| 4.3 TLR信号在DC成熟中的作用 | 第39-41页 |
| 4.3.1 TLRs信号对DC功能的调控作用 | 第40页 |
| 4.3.2 TLR介导的DC成熟信号通路 | 第40-41页 |
| 5 巨噬细胞的极化 | 第41-46页 |
| 5.1 巨噬细胞的来源和分类 | 第41-42页 |
| 5.2 巨噬细胞的极化类型 | 第42页 |
| 5.3 巨噬细胞极化相关的信号通路 | 第42-45页 |
| 5.4 病原微生物对巨噬细胞极化的调控 | 第45-46页 |
| 6 本研究的目的和意义 | 第46-47页 |
| 第二章 甘草酸苷对小鼠免疫功能和抗沙门氏菌感染能力的影响 | 第47-82页 |
| 1 引言 | 第47页 |
| 2 实验材料 | 第47-49页 |
| 2.1 实验药物 | 第47页 |
| 2.2 实验动物 | 第47-48页 |
| 2.3 实验菌株 | 第48页 |
| 2.4 实验试剂 | 第48页 |
| 2.5 所用试剂的配制 | 第48-49页 |
| 2.5.1 PBS(0.1M)缓冲液 | 第48页 |
| 2.5.2 多聚甲醛(4%)固定液 | 第48-49页 |
| 2.5.3 生理盐水(0.9%) | 第49页 |
| 2.5.4 戊二醛(2.5%)固定液 | 第49页 |
| 2.6 主要仪器和设备 | 第49页 |
| 3 实验方法 | 第49-58页 |
| 3.1 沙门氏菌的培养与准备 | 第49-50页 |
| 3.2 体外抑菌实验 | 第50-53页 |
| 3.2.1 抑菌圈(琼脂扩散法) | 第50页 |
| 3.2.2 生长曲线 | 第50页 |
| 3.2.3 毒力基因表达的检测 | 第50-53页 |
| 3.3 小鼠体内实验 | 第53-57页 |
| 3.3.1 实验分组 | 第53页 |
| 3.3.2 采样及预处理 | 第53-54页 |
| 3.3.3 石蜡包埋 | 第54页 |
| 3.3.4 HE染色 | 第54-55页 |
| 3.3.5 Tunel | 第55页 |
| 3.3.6 肠道菌群分析 | 第55-56页 |
| 3.3.7 组织中ST的计数 | 第56页 |
| 3.3.8 细胞因子及sIgA分泌的检测 | 第56页 |
| 3.3.9 NO合成和caspase-1活性的检测 | 第56页 |
| 3.3.10 细胞因子基因表达的检测 | 第56-57页 |
| 3.4 数据分析 | 第57-58页 |
| 4 结果与分析 | 第58-78页 |
| 4.1 GL对ST的体外抑菌效果 | 第58-59页 |
| 4.1.1 GL对ST生长和增殖的影响 | 第58页 |
| 4.1.2 GL对ST毒力基因表达的影响 | 第58-59页 |
| 4.2 GL对小鼠免疫功能和抗ST感染能力的影响 | 第59-78页 |
| 4.2.1 GL对正常小鼠和ST感染小鼠体重的影响 | 第59-60页 |
| 4.2.2 GL对正常小鼠和ST感染小鼠回肠组织结构的影响 | 第60-61页 |
| 4.2.3 GL对正常小鼠和ST感染小鼠盲肠和结肠组织结构的影响 | 第61-63页 |
| 4.2.4 GL对ST在小鼠肠道中定植和移位的影响 | 第63-64页 |
| 4.2.5 GL对正常小鼠和ST感染小鼠回肠粘膜sIgA分泌和NO合成的影响 | 第64-65页 |
| 4.2.6 GL对正常小鼠和ST感染小鼠回肠细胞因子分泌的影响 | 第65-66页 |
| 4.2.7 GL对正常小鼠和ST感染小鼠结肠细胞因子和NO产生的影响 | 第66-67页 |
| 4.2.8 GL对正常小鼠和ST感染小鼠血清细胞因子分泌的影响 | 第67-69页 |
| 4.2.9 GL对正常小鼠和ST感染小鼠脾脏指数的影响 | 第69页 |
| 4.2.10 GL对正常小鼠和ST感染小鼠脾脏细胞因子分泌的影响 | 第69-70页 |
| 4.2.11 GL对正常小鼠和ST感染小鼠肝脏结构和细胞凋亡的影响 | 第70-73页 |
| 4.2.12 GL对正常小鼠和ST感染小鼠肝脏中caspase-1活性的影响 | 第73-74页 |
| 4.2.13 GL对正常小鼠和ST感染小鼠肝脏细胞因子表达的影响 | 第74-75页 |
| 4.2.14 GL对正常小鼠和ST感染小鼠肠道菌群的影响 | 第75-78页 |
| 5 讨论 | 第78-81页 |
| 5.1 GL在体外对ST的抑菌效果 | 第78页 |
| 5.2 GL对正常小鼠免疫功能的影响 | 第78-79页 |
| 5.3 GL对小鼠抗ST感染能力的影响 | 第79-81页 |
| 6 小结 | 第81-82页 |
| 第三章 甘草酸苷对小鼠骨髓来源树突状细胞成熟的影响 | 第82-102页 |
| 1 引言 | 第82页 |
| 2 实验材料 | 第82-85页 |
| 2.1 实验药物 | 第82页 |
| 2.2 实验动物 | 第82-83页 |
| 2.3 实验试剂 | 第83-84页 |
| 2.3.1 细胞培养及功能检测 | 第83页 |
| 2.3.2 细胞因子表达及分泌检测 | 第83页 |
| 2.3.3 细胞表面分子检测 | 第83页 |
| 2.3.4 信号通路检测 | 第83-84页 |
| 2.4 主要仪器和设备 | 第84-85页 |
| 3 实验方法 | 第85-90页 |
| 3.1 小鼠骨髓来源树突状细胞的分离、培养与鉴定 | 第85-86页 |
| 3.2 细胞毒性检测 | 第86页 |
| 3.2.1 MTT法检测细胞活性 | 第86页 |
| 3.2.2 LDH泄漏法检测细胞毒性 | 第86页 |
| 3.3 细胞内ACP活性检测 | 第86页 |
| 3.4 树突状细胞成熟相关的表面标志分子的表达 | 第86-87页 |
| 3.5 树突状细胞细胞因子基因表达的检测 | 第87页 |
| 3.6 树突状细胞细胞因子分泌的检测 | 第87页 |
| 3.7 树突状细胞TLR受体及MyD88和TRIF表达的检测 | 第87-88页 |
| 3.8 树突状细胞成熟相关信号通路的检测 | 第88-89页 |
| 3.9 信号阻断实验 | 第89页 |
| 3.10 数据分析 | 第89-90页 |
| 4 结果与分析 | 第90-98页 |
| 4.1 GL对小鼠BMDCs的安全性 | 第90页 |
| 4.2 GL对小鼠BMDCs细胞内ACP活性的影响 | 第90-91页 |
| 4.3 GL对BMDCs成熟相关表面标志分子表达的影响 | 第91-93页 |
| 4.4 GL对BMDCs细胞因子基因表达的影响 | 第93-94页 |
| 4.5 GL对BMDCs细胞因子分泌的影响 | 第94页 |
| 4.6 GL对BMDCs TLR受体及MyD88和TRIF表达的影响 | 第94-96页 |
| 4.7 GL对BMDCs中MAPKs和NF-κB信号通路的激活 | 第96-97页 |
| 4.8 信号阻断对GL诱导的IL-12p70和IL-6分泌的影响 | 第97-98页 |
| 5 讨论 | 第98-101页 |
| 6 小结 | 第101-102页 |
| 第四章 甘草酸苷对小鼠骨髓来源巨噬细胞极化的影响 | 第102-128页 |
| 1 引言 | 第102页 |
| 2 实验材料 | 第102-103页 |
| 2.1 实验药物 | 第102页 |
| 2.2 实验动物 | 第102页 |
| 2.3 实验试剂 | 第102-103页 |
| 2.4 主要仪器和设备 | 第103页 |
| 3 实验方法 | 第103-109页 |
| 3.1 小鼠骨髓来源巨噬细胞的分离与培养 | 第103-104页 |
| 3.2 细胞毒性检测 | 第104-105页 |
| 3.2.1 MTT法检测细胞毒性 | 第104页 |
| 3.2.2 LDH泄漏法检测细胞毒性 | 第104-105页 |
| 3.3 BMDM极化相关的检测 | 第105-108页 |
| 3.3.1 BMDM活化状态的检测 | 第105页 |
| 3.3.2 细胞形态的观察 | 第105页 |
| 3.3.3 巨噬细胞极化表面标志物的检测 | 第105页 |
| 3.3.4 巨噬细胞极化标志基因表达的检测 | 第105-106页 |
| 3.3.5 BMDM细胞因子分泌的检测 | 第106页 |
| 3.3.6 iNOS蛋白表达和NO合成的检测 | 第106-107页 |
| 3.3.7 BMDM吞噬功能的检测 | 第107页 |
| 3.3.8 BMDM杀菌能力的检测 | 第107页 |
| 3.3.9 巨噬细胞极化相关信号分子活化的检测 | 第107页 |
| 3.3.10 信号阻断实验 | 第107-108页 |
| 3.4 影响IL-4诱导的M2型巨噬细胞极化的检测 | 第108-109页 |
| 3.4.1 巨噬细胞极化标志分子基因表达的检测 | 第108页 |
| 3.4.2 巨噬细胞细胞因子分泌的检测 | 第108-109页 |
| 3.4.3 M2型巨噬细胞相关信号分子表达的检测 | 第109页 |
| 3.5 数据处理 | 第109页 |
| 4 结果与分析 | 第109-124页 |
| 4.1 GL对小鼠BMDMs的安全性 | 第109-110页 |
| 4.2 GL对小鼠BMDMs的激活 | 第110-111页 |
| 4.3 GL对小鼠BMDMs极化的影响 | 第111-120页 |
| 4.3.1 GL对小鼠BMDMs细胞形态的影响 | 第112页 |
| 4.3.2 GL对BMDM M1和M2特征分子表达的影响 | 第112-115页 |
| 4.3.3 GL对BMDMs中NO合成的影响 | 第115-116页 |
| 4.3.4 GL对BMDM吞噬、杀菌能力的影响 | 第116-117页 |
| 4.3.5 GL对BMDMs中M1型巨噬细胞极化相关信号通路的影响 | 第117-119页 |
| 4.3.6 信号阻断对GL诱导的NO和IL-6产生的影响 | 第119页 |
| 4.3.7 ERK信号通路对GL诱导的IL-10和TGF-β基因表达和分泌的影响 | 第119-120页 |
| 4.4 GL对IL-4诱导的M2型巨噬细胞极化的影响 | 第120-124页 |
| 4.4.1 GL对IL-4诱导的M2型巨噬细胞特征分子基因表达的影响 | 第121-122页 |
| 4.4.2 GL对IL-4诱导的M2型巨噬细胞表达M1型特征分子的影响 | 第122-123页 |
| 4.4.3 GL对IL-4诱导的M2型巨噬细胞极化相关信号分子基因表达的影响 | 第123-124页 |
| 5 讨论 | 第124-127页 |
| 6 小结 | 第127-128页 |
| 第五章 甘草酸苷对鸡HD11巨噬细胞系免疫功能的影响 | 第128-140页 |
| 1 引言 | 第128页 |
| 2 实验材料 | 第128-129页 |
| 2.1 实验药物 | 第128页 |
| 2.2 实验细胞 | 第128页 |
| 2.3 实验试剂 | 第128页 |
| 2.4 主要仪器和设备 | 第128-129页 |
| 3 实验方法 | 第129-131页 |
| 3.1 细胞培养 | 第129页 |
| 3.2 细胞毒性检测 | 第129页 |
| 3.3 吞噬功能的检测 | 第129页 |
| 3.4 清除沙门氏菌能力的检测 | 第129-130页 |
| 3.5 HD11活化相关分子基因表达的检测 | 第130-131页 |
| 3.6 H_2O_2产生的检测 | 第131页 |
| 3.7 NO合成的检测 | 第131页 |
| 3.8 数据分析 | 第131页 |
| 4 结果与分析 | 第131-137页 |
| 4.1 GL对鸡HD11细胞的安全性 | 第131-132页 |
| 4.2 GL对鸡HD11细胞吞噬功能的影响 | 第132-133页 |
| 4.3 GL对鸡HD11细胞表面分子基因表达的影响 | 第133-135页 |
| 4.4 GL对鸡HD11细胞清除沙门氏菌能力的影响 | 第135页 |
| 4.5 GL对鸡HD11细胞产生NO和H_2O_2的影响 | 第135-136页 |
| 4.6 GL对鸡HD11细胞细胞因子表达的影响 | 第136-137页 |
| 5 讨论 | 第137-139页 |
| 6 小结 | 第139-140页 |
| 第六章 结论、创新点和研究展望 | 第140-141页 |
| 参考文献 | 第141-163页 |
| 致谢 | 第163-164页 |
| 个人简介 | 第164-165页 |
