论文目录 | |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-17页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-36页 |
| 第一章 猪瘟病毒与猪瘟研究进展 | 第17-36页 |
| 第一节 猪瘟病毒研究进展 | 第17-30页 |
| 1. 猪瘟病毒基因组及编码蛋白的功能 | 第17-23页 |
| 2. 影响猪瘟病毒毒力相关蛋白及其变异 | 第23-24页 |
| 3. 猪瘟病毒的复制周期 | 第24-25页 |
| 4. 猪瘟病毒的致病机制 | 第25-27页 |
| 5. 反向遗传系统在猪瘟病毒研究中的应用 | 第27-30页 |
| 第二节 猪瘟的免疫预防 | 第30-36页 |
| 1. 猪瘟的流行 | 第30-31页 |
| 2. 猪瘟病毒的变异趋势 | 第31-32页 |
| 3. 猪瘟兔化弱毒疫苗 | 第32页 |
| 4. 猪瘟标记疫苗 | 第32-35页 |
| 本研究目的及意义 | 第35-36页 |
| 第二部分 研究内容 | 第36-103页 |
| 第二章 猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的制备与表位鉴定 | 第36-56页 |
| 1. 材料与方法 | 第38-47页 |
| 1.1. 细胞与病毒 | 第38页 |
| 1.2. 菌株与载体 | 第38页 |
| 1.3. 试剂与主要仪器 | 第38-39页 |
| 1.4. CSFV E2蛋白的原核表达与纯化 | 第39页 |
| 1.5. CSFV E2蛋白的真核表达与纯化 | 第39-41页 |
| 1.6. 融合蛋白免疫反应性分析 | 第41-42页 |
| 1.7. 病毒的体外培养 | 第42页 |
| 1.8. 间接免疫荧光(IFA) | 第42页 |
| 1.9. 抗体中和活性检测 | 第42-43页 |
| 1.10. 质粒抽提 | 第43页 |
| 1.11. E2单点突变重组质粒的构建 | 第43-44页 |
| 1.12. 重组表达质粒转染 | 第44-45页 |
| 1.13. 单克隆抗体制备 | 第45页 |
| 1.14. 单克隆抗体反应性鉴定 | 第45页 |
| 1.15. 重组病毒拯救 | 第45-47页 |
| 2. 结果 | 第47-54页 |
| 2.1. CSFV E2蛋白不同抗原区域原核蛋白鉴定 | 第47页 |
| 2.2. 猪瘟病毒E2单克隆抗体的制备及反应性鉴定 | 第47-49页 |
| 2.3. 单克隆抗体识别抗原区的鉴定 | 第49-52页 |
| 2.4. 单克隆抗体识别关键氨基酸的鉴定 | 第52-54页 |
| 2.5. 单克隆抗体中和活性的检测 | 第54页 |
| 3. 讨论 | 第54-56页 |
| 第三章 携带流行毒株E2的嵌合重组C株病毒鉴定与免疫原性 | 第56-72页 |
| 1. 材料与方法 | 第58-62页 |
| 1.1. 细胞与病毒 | 第58页 |
| 1.2. 菌株与载体 | 第58页 |
| 1.3. 试剂与仪器 | 第58页 |
| 1.4. 实验动物及分组 | 第58-59页 |
| 1.5. 嵌合重组病毒全长cDNA的构建 | 第59-60页 |
| 1.6. 毒价测定 | 第60页 |
| 1.7. 病毒体外生长曲线测定 | 第60页 |
| 1.8. 荧光定量PCR测定病毒基因组拷贝数 | 第60-62页 |
| 1.9. 猪瘟病毒攻毒保护试验 | 第62页 |
| 2. 结果 | 第62-70页 |
| 2.1. 猪瘟病毒流行毒株E2高变区1变异特征 | 第62-64页 |
| 2.2. 嵌合重组病毒全长cDNA的拯救与鉴定 | 第64页 |
| 2.3. 嵌合重组病毒与单克隆抗体反应性鉴定 | 第64-65页 |
| 2.4. 嵌合重组病毒体外生长特性 | 第65-66页 |
| 2.5. 嵌合重组病毒免疫动物的体温变化 | 第66-67页 |
| 2.6. 重组病毒免疫动物病毒血症检测 | 第67页 |
| 2.7. 重组病毒免疫动物抗体生成曲线 | 第67-68页 |
| 2.8. 重组病毒免疫动物中和抗体差异比较 | 第68-69页 |
| 2.9. 免疫动物抵御猪瘟病毒攻毒 | 第69-70页 |
| 3. 讨论 | 第70-72页 |
| 第四章 Erns核心抗原区氨基酸变异对猪瘟病毒复制的影响 | 第72-85页 |
| 1. 材料与方法 | 第75-78页 |
| 1.1. 细胞与病毒 | 第75页 |
| 1.2. 菌株与载体 | 第75页 |
| 1.3. 试剂与仪器 | 第75-76页 |
| 1.4. Erns抗原区预测 | 第76页 |
| 1.5. 间接ELISA | 第76页 |
| 1.6. 定点突变PCR改造全长cDNA质粒 | 第76-78页 |
| 1.7. 重组病毒的构建及拯救 | 第78页 |
| 2. 结果 | 第78-82页 |
| 2.1. 猪瘟病毒C株Erns蛋白B细胞抗原表位预测 | 第78页 |
| 2.2. Erns核心抗原区连续缺失重组蛋白的表达纯化 | 第78-79页 |
| 2.3. Erns核心抗原区连续缺失重组蛋白反应性鉴定 | 第79页 |
| 2.4. 猪瘟病毒C株Erns核心抗原区突变对病毒复制的影响 | 第79-80页 |
| 2.5. 猪瘟病毒SM株Erns核心抗原区突变对病毒复制的影响 | 第80页 |
| 2.6. 猪瘟病毒SM株Erns核心抗原区置换Flag和HA标签对病毒复制的影响 | 第80-81页 |
| 2.7. 嵌合病毒Erns核心抗原区突变对病毒复制的影响 | 第81页 |
| 2.8. Erns核心抗原区多点连续缺失对嵌合重组病毒复制的影响 | 第81-82页 |
| 2.9. Erns核心抗原区多点连续缺失嵌合重组病毒不诱导兔体反应 | 第82页 |
| 3. 讨论 | 第82-85页 |
| 第五章 携带牛病毒性腹泻病毒Erns基因重组猪瘟病毒C株的拯救与鉴定 | 第85-103页 |
| 1. 材料与方法 | 第87-91页 |
| 1.1. 细胞与病毒 | 第87页 |
| 1.2. 菌株与载体 | 第87-88页 |
| 1.3. 试剂与仪器 | 第88页 |
| 1.4. BVDV病毒的分离与鉴定 | 第88-89页 |
| 1.5. 嵌合重组病毒全长cDNA的构建 | 第89-90页 |
| 1.6. 嵌合重组病毒的拯救 | 第90页 |
| 1.7. 嵌合重组病毒的鉴定 | 第90页 |
| 1.8. BVDV Erns蛋白表达与纯化 | 第90-91页 |
| 2. 结果 | 第91-100页 |
| 2.1. BVDV分离株的鉴定 | 第91-92页 |
| 2.2. BVDV Erns基因进化分析 | 第92页 |
| 2.3. 嵌合重组病毒全长cDNA的拯救与鉴定 | 第92-94页 |
| 2.4. 嵌合重组病毒Erns遗传稳定性 | 第94页 |
| 2.5. 嵌合重组病毒体外生长特性 | 第94-95页 |
| 2.6. 嵌合重组病毒的兔体反应性 | 第95-96页 |
| 2.7. 嵌合重组病毒免疫原性 | 第96-98页 |
| 2.8. BVDV Erns蛋白纯化 | 第98页 |
| 2.9. BVDV Erns蛋白反应性鉴定 | 第98-99页 |
| 2.10. 针对Erns单克隆抗体的制备与鉴定 | 第99-100页 |
| 3. 讨论 | 第100-103页 |
| 结论与展望 | 第103-104页 |
| 创新性 | 第104-105页 |
| 作者简介 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-116页 |
