论文目录 | |
| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-33页 |
| 1.1 骨骼肌概论 | 第14-19页 |
| 1.1.1 骨骼肌分类 | 第14-16页 |
| 1.1.2 肌肉的组织分布 | 第16页 |
| 1.1.3 不同肌肉类型的差异 | 第16-19页 |
| 1.1.4 肌肉的转变 | 第19页 |
| 1.2 肌纤维与肉质 | 第19-23页 |
| 1.2.1 肉质性状 | 第19-20页 |
| 1.2.2 肌纤维类型影响猪肉肉质 | 第20-21页 |
| 1.2.3 肌纤维中影响肉质的因素 | 第21-23页 |
| 1.3 PGC-1α研究进展 | 第23-31页 |
| 1.3.1 PGC-1α基因家族结构特征和生物学特性 | 第24-26页 |
| 1.3.2 PGC-1α的生物学功能 | 第26-31页 |
| 1.4 研究的目的与意义 | 第31-33页 |
| 第二章 材料与方法 | 第33-63页 |
| 2.1 主要仪器设备和试剂 | 第33-39页 |
| 2.1.1 主要仪器与设备 | 第33-34页 |
| 2.1.2 主要试剂及耗材 | 第34-35页 |
| 2.1.3 常用化学试剂及其配制 | 第35-39页 |
| 2.1.4 载体 | 第39页 |
| 2.1.5 主要分子生物学软件及数据库 | 第39页 |
| 2.2 试验方法 | 第39-63页 |
| 2.2.1 p-sMCK-sPGC-1α载体构建及鉴定 | 第39-44页 |
| 2.2.2 转基因小鼠制备与表达检测 | 第44-53页 |
| 2.2.3 猪胚胎成纤维转基因细胞系的建立与检测 | 第53-56页 |
| 2.2.4 转基因猪的制备 | 第56-57页 |
| 2.2.5 转基因猪的初步分子检测 | 第57-63页 |
| 第三章 结果与分析 | 第63-84页 |
| 3.1 p-sMCK-sPGC-1α载体的构建 | 第63-66页 |
| 3.1.1 pMD18-sPGC-1α载体和pEGFP-sMCK载体的双酶切 | 第63页 |
| 3.1.2 连接双酶切的产物 | 第63-64页 |
| 3.1.3 p-sMCK-sPGC-1α载体线性化Swa Ⅰ酶切位点的加入 | 第64页 |
| 3.1.4 p-sMCK-sPGC-1α载体的PCR鉴定 | 第64-65页 |
| 3.1.5 p-sMCK-sPGC-1α载体的酶切鉴定 | 第65-66页 |
| 3.1.6 序列测定对载体信息的确认 | 第66页 |
| 3.2 转基因小鼠的制备及检测鉴定分析 | 第66-72页 |
| 3.2.1 转基因小鼠原代及F1代基因组DNA的PCR检测鉴定 | 第67-68页 |
| 3.2.2 转基因小鼠的Southern Blot分析鉴定 | 第68页 |
| 3.2.3 PGC-1α转基因小鼠的肌肉外观形态变化 | 第68-69页 |
| 3.2.4 PGC-1α转基因小鼠骨骼肌中相关基因RNA水平表达分析 | 第69-71页 |
| 3.2.5 转基因小鼠的Western blot检测 | 第71页 |
| 3.2.6 小鼠腓肠肌切片ATP酶异染 | 第71-72页 |
| 3.3 30日龄猪胚胎成纤维细胞分离与转染 | 第72-75页 |
| 3.3.1 30日龄猪胚胎成纤维细胞分离 | 第72-73页 |
| 3.3.2 猪胎儿成纤维细胞的p-sMCK-sPGC-1α载体稳转 | 第73-75页 |
| 3.4 体细胞克隆转基因猪的制备及分析 | 第75-84页 |
| 3.4.1 猪阳性成纤维细胞 | 第75-76页 |
| 3.4.2 转PGC-1α载体克隆猪PCR鉴定 | 第76页 |
| 3.4.3 转PGC-1α载体克隆猪定量PCR鉴定 | 第76-77页 |
| 3.4.4 转基因猪中PGC-1α拷贝数分析 | 第77-79页 |
| 3.4.5 转基因猪中PGC-1α整合位点分析 | 第79页 |
| 3.4.6 转基因猪外观形态变化 | 第79-80页 |
| 3.4.7 转基因猪肌肉中PGC-1α及下游基因RNA水平检测 | 第80-81页 |
| 3.4.8 转基因猪腓肠肌ATP酶染色 | 第81-82页 |
| 3.4.9 转基因猪F1代肉质测定 | 第82-84页 |
| 第四章 讨论 | 第84-87页 |
| 4.1 PGC-1α与肌纤维转变 | 第84页 |
| 4.2 PGC-1α与糖代谢脂肪酸氧化 | 第84-85页 |
| 4.3 PGC-1α与线粒体 | 第85-86页 |
| 4.4 PGC-1α与猪肉肉质 | 第86-87页 |
| 第五章 结论 | 第87-89页 |
| 5.1 主要研究成果 | 第87页 |
| 5.2 主要创新点 | 第87-88页 |
| 5.3 研究的不足之处 | 第88页 |
| 5.4 下一步工作 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-105页 |
| 附录 | 第105-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
