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巴马小型猪精原干细胞相关问题的研究

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巴马小型猪精原干细胞相关问题的研究
论文目录
 
摘要第1-7页
ABSTRACT第7-13页
第一章 文献综述第13-33页
  1. 巴马小型猪简介第13-14页
  2. 精原干细胞的研究进展第14-29页
  2.1 精原干细胞(spermatogonial stem cell,SSC)研究回顾第14-16页
  2.2 精原干细胞分离纯化方法第16-18页
  2.3 精原干细胞体外培养第18-19页
  2.4 精原干细胞特征性分子(biomarker)第19-22页
  2.5 精原干细胞分子调控机制的研究进展第22-24页
  2.6 精原干细胞移植第24-25页
  2.7 精原干细胞体外诱导精子第25-27页
  2.8 精原干细胞转基因第27-29页
  3. 巴马小型猪精原干细胞的研究意义第29-32页
  3.1 通过分离培养和体外分化精原干细胞,可以研究精子形成的机理和过程第29页
  3.2 进行品种保护第29-30页
  3.3 生产转基因动物第30页
  3.4 挽救濒危动物第30-31页
  3.5 治疗男性不育第31页
  3.6 诱导精原干细胞分化成其他细胞,为再生性障碍疾病的临床治疗开辟了一条新的途径第31页
  3.7 生产人体可以利用的动物器官第31-32页
  4. 展望第32-33页
第二章 巴马小型猪睾丸形态学观察和精原干细胞的鉴定第33-46页
前言第33-34页
  1. 材料与方法第34-39页
  1.1 主要试剂第34页
  1.2 试剂的配制第34-36页
  1.3 主要仪器设备第36页
  1.4 石蜡切片的制作第36-37页
  1.5 H.E染色(hematoxylin and eosin stain)第37-38页
  1.6 巴马小型猪睾丸切片内精原干细胞鉴定第38-39页
  2. 结果与分析第39-43页
  2.1 巴马小型猪睾丸的组织学观察第39-40页
  2.2 巴马小型猪睾丸切片精原干细胞的鉴定第40-43页
  3. 讨论第43-45页
  3.1 巴马小型猪睾丸的组织学观察第43页
  3.2 巴马小型猪睾丸组织内精原干细胞的鉴定第43-45页
  4. 小结第45-46页
第三章 巴马小型猪精原干细胞的分离和体外培养第46-58页
前言第46-47页
  1. 材料和方法第47-50页
  1.1 主要药品第47页
  1.2 主要溶液的准备第47-50页
  1.3 主要仪器第50页
  2. STO饲养层的制作第50-51页
  2.1 STO饲养层制作条件的探索第50页
  2.2 饲养层细胞的冷冻和复苏第50-51页
  3. 精原干细胞的分离和培养第51-52页
  3.1 精原干细胞的分离第51-52页
  3.2 精原干细胞的体外培养第52页
  4. 实验结果第52-55页
  4.1 饲养层处理条件的探索第52-54页
  4.2 解冻后饲养层细胞的存活情况第54页
  4.3 精原干细胞的分离和体外培养第54-55页
  5. 讨论第55-57页
  6. 小结第57-58页
第四章 体外培养的巴马小型猪精原干细胞的鉴定第58-72页
  1. 材料和方法第59-64页
  1.1 主要试剂第59页
  1.2 溶液的配制第59-60页
  1.3 主要仪器第60页
  1.4 免疫荧光染色第60-61页
    1.4.1 OCT4染色第60-61页
    1.4.2 UCHL1、DBA双染色第61页
    1.4.3 CDH1、DBA双染色第61页
  1.5 RT-PCR第61-64页
    1.5.1 总RNA的提取第61-62页
    1.5.2 RNA反转录成cDNA第62-63页
    1.5.3 PCR扩增目的基因第63页
    1.5.4 目的片段的鉴定第63-64页
  1.6 精原干细胞的电镜观察第64页
  1.7 体外培养细胞的DNA分析第64页
  2. 实验结果第64-70页
  2.1 克隆的鉴定第65-66页
  2.2 RT-PCR结果第66-67页
  2.3 精原干细胞的电镜观察第67-68页
  2.4 DNA含量的检测第68-69页
  2.5 单倍体细胞的鉴定第69-70页
  3. 讨论第70-71页
  4. 小结第71-72页
第五章 巴马小型猪精原干细胞转基因条件的初步研究第72-83页
  1. 材料与方法第74-77页
  1.1 主要药品及相关溶液的配制第74页
  1.2 质粒的扩增、提取和鉴定第74-76页
    1.2.1 质粒的小量扩增第74-75页
    1.2.2 质粒的提取第75页
    1.2.3 质粒的鉴定第75页
    1.2.4 质粒的扩增和提取第75-76页
  1.3 脂质体在293T细胞中的表达第76页
  1.4 精原干细胞转基因第76-77页
    1.4.1 脂质体转染法第76-77页
    1.4.2 慢病毒转染第77页
  2. 实验结果第77-81页
  2.1 EGP-N1质粒的鉴定第77-78页
  2.2 EGFP-N1质粒在293T细胞中的表达第78-79页
  2.3 脂质体转染精原干细胞第79页
  2.4 慢病毒转染精原干细胞第79-81页
  3. 讨论第81-82页
  4. 小结第82-83页
总结论第83-84页
参考文献第84-95页
缩略词表第95-97页
致谢第97-98页
攻读博士期间发表的论文第98页
攻读博士期间所获得的基金支持第98页

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