论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-21页 |
| 第一部分 奶牛肝功能酶检测 | 第21-42页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-25页 |
| 1.1 奶牛产后肝功能的代谢状态 | 第21-22页 |
| 1.2 肝功酶在临床疾病中的应用 | 第22-24页 |
| 1.3 奶牛产后血浆与奶中部分肝功能指标研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 奶牛产后血浆与乳清中ALT、AST、GGT及ALP测定与相关分析 | 第25-42页 |
| 前言 | 第25-26页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-34页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第26页 |
| 2.1.2 主要仪器与试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要试剂配制液 | 第27-28页 |
| 2.1.4 血与奶样的收集及处理 | 第28页 |
| 2.1.5 实验分析 | 第28-34页 |
| 2.1.6 数据处理 | 第34页 |
| 2.2 实验结果 | 第34-39页 |
| 2.2.1 ALT、AST的标准曲线 | 第34-36页 |
| 2.2.2 奶牛血浆与乳清中ALT、AST、GGT及ALP含量的测定结果 | 第36-39页 |
| 2.3 讨论 | 第39-41页 |
| 2.4 小结 | 第41-42页 |
| 第二部分 奶牛乳房炎白色念珠菌快速诊断试纸条研究 | 第42-168页 |
| 第一章 文献综述 | 第42-56页 |
| 1.1 白色念珠菌的生物特性及其对奶牛养殖业的危害 | 第42-44页 |
| 1.1.1 白色念珠菌的生物学特性 | 第42-43页 |
| 1.1.2 白色念珠菌的致病机制 | 第43-44页 |
| 1.2 白色念珠菌引起真菌性乳房炎对奶牛养殖业的危害 | 第44-46页 |
| 1.2.1 白色念珠菌引起真菌性奶牛乳房炎的国外现状 | 第45-46页 |
| 1.2.2 白色念珠菌引起真菌性奶牛乳房炎的国内现状 | 第46页 |
| 1.3 白色念珠菌引起真菌性奶牛乳房炎的治疗 | 第46-47页 |
| 1.4 白色念珠菌引起真菌性奶牛乳房炎诊断及检测方法 | 第47-50页 |
| 1.4.1 白色念珠菌引起真菌性奶牛乳房炎临床表现 | 第47-48页 |
| 1.4.2 白色念珠菌的微生物学检查 | 第48页 |
| 1.4.3 分子生物学方法检测 | 第48-50页 |
| 1.5 胶体金标记技术基本原理与研究背景 | 第50-53页 |
| 1.5.1 胶体金标记技术的应用 | 第51-52页 |
| 1.5.2 抗体用于胶体金中标记应用的进展 | 第52页 |
| 1.5.3 免疫胶体金快速诊断技术在奶牛疾病中的应用 | 第52-53页 |
| 1.6 颗粒性抗原制备抗体技术 | 第53-54页 |
| 1.7 多克隆抗体的基本原理 | 第54页 |
| 1.8 单克隆抗体的基本原理 | 第54-55页 |
| 1.9 奶牛肝功能酶检测与乳房炎白色念珠菌快速诊断试纸条研究目的和意义 | 第55-56页 |
| 第二章 广西部分地区奶牛乳房炎白色念珠菌发病率的调查 | 第56-69页 |
| 前言 | 第56-57页 |
| 2.1 材料与方法 | 第57-60页 |
| 2.1.1 培养基与试剂 | 第57页 |
| 2.1.2 实验设备 | 第57页 |
| 2.1.3 实验动物和奶样 | 第57页 |
| 2.1.4 奶样的采集 | 第57-58页 |
| 2.1.5 白色念珠菌的镜检观察 | 第58页 |
| 2.1.6 白色念珠菌无菌膜的培养鉴定 | 第58页 |
| 2.1.7 假细菌、厚壁孢子的培养鉴定 | 第58页 |
| 2.1.8 细菌TCTA鉴定 | 第58页 |
| 2.1.9 菌株墨染法鉴定 | 第58-59页 |
| 2.1.10 菌液PCR鉴定 | 第59-60页 |
| 2.1.11 白色念珠菌的生化鉴定 | 第60页 |
| 2.1.12 保存菌种用20%甘油法 | 第60页 |
| 2.2 实验结果 | 第60-66页 |
| 2.2.1 经白色念珠菌感染奶样的外观 | 第60-61页 |
| 2.2.2 白色念珠菌培养及镜检鉴定 | 第61页 |
| 2.2.3 白色念珠菌无菌膜生长情况 | 第61-62页 |
| 2.2.4 白色念珠菌假菌丝、厚壁孢子的生长状态 | 第62页 |
| 2.2.5 白色念珠菌在TCTA培养颜色观察 | 第62页 |
| 2.2.6 白色念珠菌夹膜观察 | 第62页 |
| 2.2.7 菌液PCR检测结果 | 第62页 |
| 2.2.8 白色念珠菌的生化鉴定结果 | 第62-63页 |
| 2.2.9 用20%甘油保菌种效果 | 第63-66页 |
| 2.3 讨论 | 第66-68页 |
| 2.4 小结 | 第68-69页 |
| 第三章 白色念珠菌的致病力实验及药敏试验分析 | 第69-93页 |
| 前言 | 第70页 |
| 3.1 材料与方法 | 第70-74页 |
| 3.1.1 实验菌株、药物 | 第70-71页 |
| 3.1.2 实验动物 | 第71页 |
| 3.1.3 实验设备 | 第71页 |
| 3.1.4 白色念珠菌的致病力实验 | 第71页 |
| 3.1.5 攻毒后小鼠组织石蜡切片制作 | 第71-73页 |
| 3.1.6 药液制备 | 第73页 |
| 3.1.7 药敏实验的测定方法 | 第73页 |
| 3.1.8 大蒜和黄连的MIC/MBC测定 | 第73-74页 |
| 3.2 实验结果 | 第74-89页 |
| 3.2.0 白色念珠菌的致病力情况 | 第74-79页 |
| 3.2.1 攻毒小鼠各组织切片观察结果 | 第79-81页 |
| 3.2.2 白色念珠菌对中药药敏结果 | 第81-83页 |
| 3.2.3 白色念珠菌对七种西药药敏结果 | 第83-85页 |
| 3.2.4 16种奶牛场治疗乳房炎药物的药敏结果 | 第85-86页 |
| 3.2.5 大蒜与黄连的MIC/MBC测定结果 | 第86-89页 |
| 3.3 讨论 | 第89-92页 |
| 3.3.1 白色念珠菌的毒性与致病力对动物的影响 | 第89-90页 |
| 3.3.2 白色念珠菌的抗药作用 | 第90-92页 |
| 3.4 小结 | 第92-93页 |
| 第四章 白色念珠菌多克隆抗体的制备 | 第93-112页 |
| 前言 | 第93-94页 |
| 4.1 材料与方法 | 第94-100页 |
| 4.1.1 菌株来源 | 第94页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 | 第94页 |
| 4.1.3 本实验的常用溶液配制 | 第94页 |
| 4.1.4 实验动物 | 第94页 |
| 4.1.5 白色念珠菌的抗原制备 | 第94-95页 |
| 4.1.6 实验动物免疫 | 第95页 |
| 4.1.7 免疫兔血清抗体效价的测定 | 第95-96页 |
| 4.1.8 抗原中酶成分的消除 | 第96-97页 |
| 4.1.9 血清抗体效价检测条件优化 | 第97页 |
| 4.1.10 ELISA检测制备的多克隆抗体 | 第97-98页 |
| 4.1.11 SDS-PAGE电泳检测 | 第98-99页 |
| 4.1.12 白色念珠菌多克隆抗体的正辛硫-硫酸铵沉淀法纯化 | 第99页 |
| 4.1.13 蛋白透析 | 第99页 |
| 4.1.14 纯化后抗血清蛋白浓度的测定 | 第99-100页 |
| 4.1.15 白色念珠菌多克隆抗体交叉反应实验 | 第100页 |
| 4.2 实验结果 | 第100-109页 |
| 4.2.1 在不同温度下抗原中酶成分的消除 | 第100-102页 |
| 4.2.2 抗血清效价检测最佳优化条件 | 第102-106页 |
| 4.2.3 抗血清效价的测定结果 | 第106-108页 |
| 4.2.4 抗血清SDS-PAGE分析 | 第108页 |
| 4.2.5 测定纯化抗血清蛋白浓度的结果 | 第108页 |
| 4.2.6 多克隆抗体与其它菌株交叉反应实验结果 | 第108-109页 |
| 4.3 讨论 | 第109-110页 |
| 4.3.1 制备高纯白色念珠菌的多克隆抗体关键因素 | 第109-110页 |
| 4.3.2 多克隆抗体纯化方法的选择 | 第110页 |
| 4.4 小结 | 第110-112页 |
| 第五章 白色念珠菌单克隆抗体的制备与特性分析 | 第112-133页 |
| 前言 | 第112-113页 |
| 5.1 材料与方法 | 第113-121页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第113页 |
| 5.1.2 实验动物 | 第113页 |
| 5.1.3 药品和试剂 | 第113-115页 |
| 5.1.4 工作液的配制 | 第115-116页 |
| 5.1.5 细菌抗原的制备 | 第116页 |
| 5.1.6 试验动物免疫 | 第116页 |
| 5.1.7 BALB/C小鼠抗血清效价的测定 | 第116页 |
| 5.1.8 SP2/0小鼠骨髓瘤细胞复苏 | 第116-117页 |
| 5.1.9 饲养层细胞制备 | 第117页 |
| 5.1.10 免BALB/C小鼠疫脾细胞的制备 | 第117-118页 |
| 5.1.11 SP2/0骨瘤细胞悬液的制备 | 第118页 |
| 5.1.12 细胞杂交融合 | 第118页 |
| 5.1.13 阳性杂交瘤细胞株筛选与克隆 | 第118-119页 |
| 5.1.14 阳性杂交瘤细胞的扩大培养 | 第119页 |
| 5.1.15 有限稀释法单克隆化 | 第119页 |
| 5.1.16 杂交瘤细胞株的冻存 | 第119页 |
| 5.1.17 杂交瘤细胞染色体检测 | 第119-120页 |
| 5.1.18 腹水的制备 | 第120页 |
| 5.1.19 腹水效价和特异性检测 | 第120-121页 |
| 5.1.20 白色念珠菌单克隆抗体腹水交叉反应实验 | 第121页 |
| 5.1.21 白色念珠菌单克隆抗体正辛硫-硫酸铵沉淀纯化 | 第121页 |
| 5.1.22 白色念珠菌单克隆抗体蛋白透析 | 第121页 |
| 5.1.23 单克隆抗体抗体蛋白浓度的测定 | 第121页 |
| 5.2 实验结果 | 第121-130页 |
| 5.2.1 免疫小鼠后的相关生理性状检测 | 第121-122页 |
| 5.2.2 抗白色念珠菌单克隆抗体杂交瘤细胞株筛选结果 | 第122-123页 |
| 5.2.3 杂交瘤细胞株上清液效价的检测结果 | 第123-125页 |
| 5.2.4 小鼠腹水效价的检测结果 | 第125-127页 |
| 5.2.5 单克隆抗体SDS-PAGE电泳分析 | 第127-128页 |
| 5.2.6 染色体检测结果 | 第128页 |
| 5.2.7 交叉反应实验结果 | 第128-129页 |
| 5.2.8 单克隆抗体的纯化结果 | 第129-130页 |
| 5.2.9 纯化后单克隆抗体蛋白浓度的测定结果 | 第130页 |
| 5.3 讨论 | 第130-132页 |
| 5.4 小结 | 第132-133页 |
| 第六章 白色念珠菌的胶金体的制备 | 第133-154页 |
| 前言 | 第133-134页 |
| 6.1 材料与方法 | 第134-138页 |
| 6.1.1 主要试剂 | 第134页 |
| 6.1.2 主要仪器 | 第134页 |
| 6.1.3 使用前玻璃器皿准备 | 第134页 |
| 6.1.4 柠檬酸三钠还原法的胶体金制备 | 第134-135页 |
| 6.1.5 胶体金紫外光扫描鉴定 | 第135页 |
| 6.1.6 最适宜抗体蛋白结合量 | 第135页 |
| 6.1.7 抗体蛋白与胶体金结合最适宜PH值的选择 | 第135-136页 |
| 6.1.8 抗体—胶体金复合物稳定剂的选择 | 第136页 |
| 6.1.9 胶体金复合物缓冲液的选择 | 第136-137页 |
| 6.1.10 胶体金—抗体复合物的制备与纯化 | 第137-138页 |
| 6.2 实验结果 | 第138-150页 |
| 6.2.1 胶体金溶液颜色的观察 | 第138-139页 |
| 6.2.2 最佳的胶体金颗粒直径大小筛选结果 | 第139-140页 |
| 6.2.3 胶体金颗粒稳定性 | 第140-141页 |
| 6.2.4 胶体金颗粒抗体浓度的选择 | 第141页 |
| 6.2.5 抗体蛋白与胶体金结合最适宜PH值的选择 | 第141-144页 |
| 6.2.6 抗体—胶体金复合物稳定剂的选择 | 第144-145页 |
| 6.2.7 胶体金复合物缓冲液组分的选择 | 第145-149页 |
| 6.2.8 胶体金—抗体复合物的制备与纯化结果 | 第149-150页 |
| 6.3 讨论 | 第150-153页 |
| 6.3.1 影响胶体金颗粒制备的因素 | 第150-151页 |
| 6.3.2 影响金标抗制备的因素 | 第151-153页 |
| 6.4 小结 | 第153-154页 |
| 第七章 试纸条组成及临床应用 | 第154-168页 |
| 前言 | 第154-155页 |
| 7.1 材料与方法 | 第155-159页 |
| 7.1.1 菌株 | 第155页 |
| 7.1.2 主要试剂及耗材 | 第155页 |
| 7.1.3 斑点金免疫渗滤试验 | 第155-156页 |
| 7.1.4 分析膜预处理 | 第156页 |
| 7.1.5 分析膜封闭液的优化 | 第156页 |
| 7.1.6 分析膜干燥方式选择 | 第156页 |
| 7.1.7 胶体金-抗体复合物结合垫的制备 | 第156页 |
| 7.1.8 样品垫制备 | 第156页 |
| 7.1.9 分析膜的抗体包被 | 第156-157页 |
| 7.1.10 吸水垫制备 | 第157页 |
| 7.1.11 试纸条组装 | 第157-158页 |
| 7.1.12 试纸条检测阳性结果判定 | 第158页 |
| 7.1.13 试纸条灵敏度检测 | 第158页 |
| 7.1.14 试纸条特异的性检测 | 第158-159页 |
| 7.1.15 重复性测试 | 第159页 |
| 7.1.16 稳定性测试 | 第159页 |
| 7.1.17 比较试验 | 第159页 |
| 7.2 实验结果 | 第159-164页 |
| 7.2.1. 分析膜上抗体包被量的测定结果 | 第159-160页 |
| 7.2.2 不同的封闭液对分析膜封闭效果 | 第160-161页 |
| 7.2.3 分析膜在不同温度下干燥效果 | 第161页 |
| 7.2.4 试纸条对不同浓度菌液检测的效果 | 第161页 |
| 7.2.5 试纸条对不同种菌检测的效果 | 第161-163页 |
| 7.2.6 试纸条重复性检测的效果 | 第163页 |
| 7.2.7 试纸条稳定性检测的效果 | 第163-164页 |
| 7.2.8 试纸条比较试验结果 | 第164页 |
| 7.3 讨论 | 第164-166页 |
| 7.3.1 抗体包被量及硝酸纤维素膜封闭方法的分析 | 第164-165页 |
| 7.3.2 假阳性和假阴性分析 | 第165-166页 |
| 7.3.3 特异性分析及灵敏度分析 | 第166页 |
| 7.3.4 试纸条的稳定性分析 | 第166页 |
| 7.4 小结 | 第166-168页 |
| 参考文献 | 第168-185页 |
| 附录 | 第185-193页 |
| 致谢 | 第193-195页 |
| 文章发表情况 | 第195页 |
