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链格孢菌(Alternaria alternate(Fr.)Keissler)突变体001产毒代谢差异的分子机制研究

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链格孢菌(Alternaria alternate(Fr.)Keissler)突变体001产毒代谢差异的分子机制研究
论文目录
 
摘要第1-12页
ABSTRACT第12-17页
缩略语第17-18页
引言第18-21页
第一章 文献综述第21-49页
1 链格孢菌及其产毒相关基因研究概况第21-29页
  1.1 对基质广适性的链格孢种—链格孢(Alternaria alternata(Fr.)Keissler)第21-22页
  1.2 链格孢毒素及其产毒相关基因研究概况第22-29页
2 组氨酸磷酸酶家族研究进展第29-37页
  2.1 结构特征第29-32页
  2.2 组氨酸磷酸酶家族基因功能第32-35页
  2.3 医学和应用价值第35-37页
3 本课题的目的、意义以及研究内容第37-39页
  3.1 研究目的和意义第37-38页
  3.2 研究内容第38-39页
参考文献第39-49页
第二章 链格孢菌突变体中缺失基因的克隆第49-81页
前言第49-50页
第一节 链格孢菌突变体001质粒插入边缘序列的克隆第50-61页
1 材料和方法第50-57页
  1.1 试验材料第50-51页
  1.2 质粒插入边缘序列的扩增第51-54页
  1.3 PCR产物的克隆第54-57页
  1.4 基因测序与分析第57页
2 结果和分析第57-59页
  2.1 质粒pSH75的构成第57-58页
  2.2 插入边缘序列的获得及分析第58-59页
3 讨论第59-61页
第二节 链格孢菌产毒调控基因HP001的克隆第61-71页
1 材料和方法第61-65页
  1.1 试验材料第61-62页
  1.2 HP001基因全长DNA序列扩增第62页
  1.3 HP001基因全长cDNA序列扩增第62-65页
2 结果与分析第65-70页
  2.1 HP001基因全长DNA序列的获得及分析第65-67页
  2.2 HP001基因全长cDNA序列的获得及分析第67-70页
3 讨论第70-71页
第三节 HP001基因缺失验证第71-79页
1 材料和方法第71-75页
  1.1 试验材料第71页
  1.2 试剂与试剂配制第71-72页
  1.3 试验方法第72-75页
2 结果和分析第75-77页
  2.1 HP001基因验证第75页
  2.2 质粒pSH75插入情况验证第75-77页
3 讨论第77-79页
参考文献第79-81页
第三章 链格孢菌HP001基因表达研究第81-117页
前言第81-82页
第一节 链格孢菌野生型与突变体001的生理学比较第82-93页
1 材料和方法第83-85页
  1.1 试验材料第83页
  1.2 培养方法第83-84页
  1.3 酸性磷酸酶活性测定第84-85页
2 结果与分析第85-92页
  2.1 菌落生长速率比较第85-86页
  2.2 不同PH值菌丝生物量比较第86-87页
  2.3 不同碳源生物量比较第87页
  2.4 不同氮源生物量比较第87-88页
  2.5 不同碳氮比生物量比较第88-89页
  2.6 孢子产量第89页
  2.7 病斑第89页
  2.8 孢子萌发第89-90页
  2.9 磷酸酶活性分析第90-92页
3 讨论第92-93页
第二节 HP001基因的原核表达与荧光定量分析第93-107页
1 材料与方法第93-101页
  1.1 材料第93-95页
  1.2 HP001原核表达第95-97页
  1.3 HP001基因表达的荧光定量检测第97-101页
2 结果与分析第101-105页
  2.1 原核表达第101-102页
  2.2 HP001基因表达分析第102-105页
3 讨论第105-107页
第三节 野生型和突变体001中Gα和Gβ亚基表达研究第107-114页
1 材料与方法第107-109页
  1.1 菌株培养条件第107-108页
  1.2 TotalRNA提取方法第108页
  1.3 试剂第108页
  1.4 Gβ基的克隆第108页
  1.5 荧光定量检测第108-109页
2 结果与分析第109-111页
  2.1 Gβ基的克隆第109-110页
  2.2 Gα和Gβ基的基因表达分析第110-111页
3 讨论第111-114页
参考文献第114-117页
第四章 链格孢菌野生型和突变体中表达差异基因的筛选第117-145页
前言第117-119页
第一节 抑制性消减杂交建库筛选第119-135页
1 材料和方法第119-128页
  1.1 材料准备第119-120页
  1.2 方法第120-126页
    1.3. Subtracted cDNA Library construction and analysis第126-128页
2 结果与分析第128-134页
  2.1 菌落PCR第128-129页
  2.2 斑点杂交第129-131页
  2.3 测序结果第131-134页
3 讨论第134-135页
第二节 Virtual Northern Blot验证和基因克隆第135-143页
1 材料和方法第135-138页
  1.1 实验材料第135-136页
  1.2 菌株Total RNA提取第136页
  1.3 Virtual northern blot第136-137页
  1.4 RACE法扩增目的基因第137页
  1.5 基因敲除载体构建第137-138页
2 结果与分析第138-142页
  2.1 Virtual northern blot第138页
  2.2 Race法扩增基因第138-140页
  2.3 基因敲除载体的构建第140-142页
3 讨论第142-143页
参考文献第143-145页
第五章 链格孢菌野生型中HP001互作蛋白的筛选第145-165页
前言第145-147页
1 材料和方法第147-156页
  1.1 试验材料第147-148页
  1.2 建库第148-150页
  1.3 诱饵蛋白构建第150-151页
  1.4 双杂交文库的构建第151-152页
  1.5 文库保存第152-153页
  1.6 诱饵蛋白筛选第153页
  1.7 诱饵蛋白检测第153-154页
  1.8 文库筛选第154-155页
  1.9 阳性互作验证第155-156页
2 结论与分析第156-161页
  2.1 杂交文库的构建以及筛选第156-157页
  2.2 诱饵蛋白的构建与检测第157页
  2.3 文库筛选以及捕获蛋白序列第157-160页
  2.4 阳性互作验证第160-161页
3 讨论第161-163页
参考文献第163-165页
第六章 全文讨论和总结第165-175页
1 讨论第165-169页
  1.1 HP001基因特性第165-166页
  1.2 真菌致病的毒力因子第166-167页
  1.3 链格孢菌野生型和突变体表达差异基因第167-168页
  1.4 HP001基因互作蛋白第168-169页
2 结论第169-171页
  2.1 HP001基因是链格孢菌的毒力因子第169页
  2.2 HP001基因的缺失导致链格孢菌突变体中下游基因表达量下降第169-170页
  2.3 HP001基因通过互作蛋白参与代谢、致病过程第170-171页
3 创新点第171-172页
参考文献第172-175页
致谢第175-177页
攻读博士学位期间发表的研究论文第177页

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