论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-29页 |
| 1.1 拟南芥nudt6-2nudt7-1双突变体的自身免疫反应 | 第13-21页 |
| 1.1.1 植物的免疫系统 | 第13-16页 |
| 1.1.2 植物中一氧化氮的产生 | 第16-17页 |
| 1.1.3 一氧化氮在抗病反应中的上游和下游信号传导 | 第17-19页 |
| 1.1.4 本研究的背景和意义 | 第19-21页 |
| 1.2 用蛋白质组学技术发掘对氧化还原敏感的蛋白质 | 第21-26页 |
| 1.2.1 植物细胞中ROS的产生和清除 | 第21-22页 |
| 1.2.2 ROS的信号分子作用 | 第22-23页 |
| 1.2.3 研究氧化还原敏感蛋白质的技术进展 | 第23-24页 |
| 1.2.4 本实验中鉴定氧化还原敏感蛋白质的策略 | 第24-26页 |
| 1.3 拟南芥中内源mART活性催化蛋白质单二磷酸腺苷核糖化修饰 | 第26-29页 |
| 1.3.1 mARTs和单二磷酸腺苷核糖化 | 第26-27页 |
| 1.3.2 单二磷酸腺苷核糖化对底物蛋白质的调控 | 第27-29页 |
| 第二章 材料和方法 | 第29-43页 |
| 2.1 拟南芥nudt6-2nudt7-1双突变体的自身免疫反应 | 第29-35页 |
| 2.1.1 植物材料、菌株及质粒载体 | 第29页 |
| 2.1.2 拟南芥在土壤中的生长条件 | 第29页 |
| 2.1.3 拟南芥在固体培养基和液体培养基中的生长条件 | 第29-31页 |
| 2.1.4 丁香假单孢菌的培养 | 第31-32页 |
| 2.1.5 提取基因组DNA(2XCTAB法) | 第32页 |
| 2.1.6 抽提RNA | 第32页 |
| 2.1.7 反转录 | 第32-33页 |
| 2.1.8 实时荧光定量PCR(Real-time PCR) | 第33页 |
| 2.1.9 DAB染色法检测叶片中过氧化氢的含量 | 第33-34页 |
| 2.1.10 Trypan Blue染色法检测叶片中的死细胞 | 第34页 |
| 2.1.11 农杆菌C58C01感受态的热激转化 | 第34页 |
| 2.1.12 用农杆菌侵染法转化拟南芥 | 第34-35页 |
| 2.1.13 叶绿素含量的测定 | 第35页 |
| 2.1.14 植物体内病原菌生长计数实验 | 第35页 |
| 2.1.15 一氧化氮水平的测定 | 第35页 |
| 2.2 用蛋白质组学技术发掘对氧化还原敏感的蛋白质 | 第35-41页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第36页 |
| 2.2.2 T87悬浮细胞的培养和过氧化氢处理 | 第36页 |
| 2.2.3 蛋白质的提取和标记 | 第36-37页 |
| 2.2.4 双向电泳 | 第37-38页 |
| 2.2.5 蛋白质图像扫描 | 第38页 |
| 2.2.6 第二向胶的图像分析 | 第38页 |
| 2.2.7 对蛋白质点的质谱分析 | 第38页 |
| 2.2.8 蛋白质数据库搜索 | 第38-39页 |
| 2.2.9 巯基差异标记-免疫沉淀-Western印记偶联法验证蛋白质在体内的氧化还原状态 | 第39-40页 |
| 2.2.10 尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第40-41页 |
| 2.2.11 蛋白质泳动率迁移法分析AtCIAPIN1在体内的氧化还原状态 | 第41页 |
| 2.3 拟南芥中内源mART活性催化蛋白质单二磷酸腺苷核糖化修饰 | 第41-43页 |
| 2.3.1 实验材料 | 第41页 |
| 2.3.2 拟南芥的生长和氧化胁迫处理 | 第41页 |
| 2.3.3 二磷酸腺苷核糖化反应 | 第41-42页 |
| 2.3.4 竞争实验 | 第42页 |
| 2.3.5 测试蛋白质和ADP-ribose基团之间共价键的化学稳定性 | 第42页 |
| 2.3.6 AtPARP2的原核表达和活性测试 | 第42-43页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第43-80页 |
| 3.1 拟南芥nudt6-2nudt7-1双突变体的自身免疫反应 | 第43-61页 |
| 3.1.1 AtNUDT6和AtNUDT7共同负调控植物的抗病反应 | 第43-45页 |
| 3.1.2 在nudt6-2nudt7-1双突变体中,细胞的延伸和分裂受到温度的调控 | 第45-48页 |
| 3.1.3 在nudt6-2nudt7-1双突变体中,自身免疫反应受到温度的调控 | 第48-49页 |
| 3.1.4 nudt6-2nudt7-1的自身免疫反应部分由SNC1介导,并完全依赖于EDS1 | 第49-52页 |
| 3.1.5 AtNUDT6和AtNUDT7影响了EDS1的亚细胞分布和超敏反应 | 第52-54页 |
| 3.1.6 rudt6-2nudt7-1的表型可以被nahG部分阻断,但是不受npr1突变的影响 | 第54-55页 |
| 3.1.7 在培养基中,nudt6-2nudt7-1的生长受NO_3~-和NH_4~+的比例控制 | 第55-56页 |
| 3.1.8 nudt6-2nudt7-1的自身免疫反应受NO_3~-和NH_4~+的比例控制 | 第56-58页 |
| 3.1.9 小结与展望 | 第58-61页 |
| 3.2 用蛋白质组学技术发掘对氧化还原敏感的蛋白质 | 第61-73页 |
| 3.2.1 确定对拟南芥细胞进行氧化胁迫的实验条件 | 第61-62页 |
| 3.2.2 检测和鉴定在拟南芥细胞中含有巯基的对过氧化氢敏感的蛋白质 | 第62-64页 |
| 3.2.3 巯基差异标记-免疫沉淀-Western印记偶联法验证蛋白质在植物体内的氧化还原状态 | 第64-66页 |
| 3.2.4 在受到Flg22或者SA处理的植物中,AtCIAPIN1发生了氧化 | 第66-68页 |
| 3.2.5 氧化还原敏感蛋白质的分类 | 第68-72页 |
| 3.2.6 四种蛋白质组学方法是互为补充的关系 | 第72页 |
| 3.2.7 小结 | 第72-73页 |
| 3.3 拟南芥中内源mART活性催化蛋白质单二磷酸腺苷核糖化修饰 | 第73-80页 |
| 3.3.1 在拟南芥叶片蛋白抽提液中检测受到单二磷酸腺苷核糖化修饰的蛋白质 | 第73-74页 |
| 3.3.2 在蛋白质的标记反应中核苷酸衍生物对[~(32)P]NAD~+的竞争作用 | 第74-76页 |
| 3.3.3 32 kDa底物蛋白中受到单二磷酸腺苷核糖化修饰的残基是一个半胱氨酸 | 第76页 |
| 3.3.4 拟南芥中的单二磷酸腺苷核糖化修饰具有组织特异性,并受到氧化胁迫的诱导 | 第76-78页 |
| 3.3.5 对实验结果的讨论和小结 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-98页 |
| 附录 本研究鉴定的氧化还原敏感蛋白质 | 第98-102页 |
| 致谢 | 第102-104页 |
| 在读期间发表论文和书籍 | 第104-105页 |
| 论文 | 第104页 |
| 书籍 | 第104-105页 |
