论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 上篇 文献综述 | 第15-36页 |
| 第一章 猪肠道微生物群落与纤维素分解菌的研究进展及意义 | 第15-36页 |
| 1.1 引言 | 第15-16页 |
| 1.2 猪肠道微生物的组成及变化 | 第16-17页 |
| 1.3 影响肠道微生物的因素 | 第17-24页 |
| 1.3.1 品种与年龄 | 第17-18页 |
| 1.3.2 日粮纤维 | 第18-19页 |
| 1.3.3 抗生素 | 第19页 |
| 1.3.4 微生态制剂 | 第19-22页 |
| 1.3.5 其他物质 | 第22-24页 |
| 1.4 分子生物技术在胃肠道微生物研究中的应用 | 第24-27页 |
| 1.4.1 16S rRNA基因测序技术 | 第24-25页 |
| 1.4.2 变性梯度凝胶电泳技术 | 第25-26页 |
| 1.4.3 高通量测序技术 | 第26-27页 |
| 1.5 食草动物的食草特性与肠道微生物 | 第27-28页 |
| 1.6 纤维素分解菌及纤维素酶的研究进展 | 第28-32页 |
| 1.6.1 纤维素分解菌的来源及分离 | 第28-29页 |
| 1.6.2 纤维素酶作用机制及其生产 | 第29-30页 |
| 1.6.3 影响纤维素酶饲用效果的因素 | 第30-31页 |
| 1.6.4 纤维素酶基因的克隆表达及基因工程菌的构建 | 第31-32页 |
| 1.7 益生菌的评定及发展趋势 | 第32-35页 |
| 1.7.1 益生菌的作用机制及发展 | 第32-34页 |
| 1.7.2 益生菌筛选标准及应用 | 第34页 |
| 1.7.3 益生菌的发展趋势 | 第34-35页 |
| 1.8 研究的目的和意义 | 第35页 |
| 1.9 研究的技术路线 | 第35-36页 |
| 下篇 试验研究 | 第36-116页 |
| 第二章 藏猪胃肠道不同区段细菌群落多样性及组成研究 | 第36-55页 |
| 2.1 引言 | 第36页 |
| 2.2 材料与方法 | 第36-41页 |
| 2.2.1 样品的采集 | 第36-37页 |
| 2.2.2 质粒载体与主要试剂 | 第37页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第37-38页 |
| 2.2.4 猪胃肠道微生物总DNA的提取 | 第38页 |
| 2.2.5 猪胃肠道细菌 16S rRNA基因V4-V5区序列的扩增 | 第38页 |
| 2.2.6 PCR产物的纯化回收 | 第38页 |
| 2.2.7 试剂配制 | 第38-39页 |
| 2.2.8 变性梯度凝胶电泳 | 第39-40页 |
| 2.2.9 DGGE图谱上优势条带的切割回收及克隆测序 | 第40-41页 |
| 2.2.10 DGGE图谱分析及序列分析 | 第41页 |
| 2.3 结果与分析 | 第41-52页 |
| 2.3.1 藏猪胃肠道细菌的多样性 | 第42-44页 |
| 2.3.2 藏猪胃肠道细菌群落组成分析 | 第44-47页 |
| 2.3.3 藏猪和瘦肉型猪盲肠细菌的多样性的比较分析 | 第47-48页 |
| 2.3.4 藏猪和外来猪种瘦肉型猪盲肠细菌群落组成比较分析 | 第48-52页 |
| 2.4 讨论 | 第52-54页 |
| 2.4.1 细菌 16S rRNA基因可变区的选择 | 第52页 |
| 2.4.2 藏猪胃肠道细菌的多样性及群落组成 | 第52-53页 |
| 2.4.3 藏猪和瘦肉型猪盲肠细菌的多样性及群落组成比较分析 | 第53-54页 |
| 2.5 小结 | 第54-55页 |
| 第三章 藏猪和瘦肉型猪盲肠细菌群落多样性及组成研究 | 第55-74页 |
| 3.1 引言 | 第55页 |
| 3.2 材料和方法 | 第55-58页 |
| 3.2.1 样品准备 | 第55页 |
| 3.2.2 细菌 16S rRNA V4-V5高变区扩增 | 第55-56页 |
| 3.2.4 Miseq文库构建 | 第56页 |
| 3.2.5 Miseq测序 | 第56页 |
| 3.2.6 测数据优化与统计 | 第56页 |
| 3.2.7 测序数据的分析 | 第56-58页 |
| 3.2.8 生物统计分析及作图 | 第58页 |
| 3.2.9 核酸序列登录 | 第58页 |
| 3.3 结果与分析 | 第58-71页 |
| 3.3.1 两个猪种盲肠微生物总DNA的提取和细菌 16S rRNA基因V4-V5区扩增 | 第58-59页 |
| 3.3.2 藏猪和瘦肉型猪盲肠细菌的丰富度和多样性比较分析 | 第59-61页 |
| 3.3.3 藏猪和瘦肉型猪盲肠细菌群落组成的比较分析 | 第61-67页 |
| 3.3.4 藏猪和瘦肉型猪盲肠中核心菌群的比较分析 | 第67-71页 |
| 3.4 讨论 | 第71-73页 |
| 3.4.1 藏猪和瘦肉型猪盲肠中细菌群落的多样性 | 第71页 |
| 3.4.2 藏猪和瘦肉型猪盲肠中的核心菌群 | 第71-72页 |
| 3.4.4 藏猪盲肠中细菌群落组成与食草特性 | 第72-73页 |
| 3.5 小结 | 第73-74页 |
| 第四章 藏猪盲肠中纤维素分解菌的分离鉴定及特性研究 | 第74-94页 |
| 4.1 引言 | 第74页 |
| 4.2 材料与方法 | 第74-81页 |
| 4.2.1 材料 | 第74-75页 |
| 4.2.2 方法 | 第75-81页 |
| 4.2.3 数据的整理与分析 | 第81页 |
| 4.3 结果与分析 | 第81-91页 |
| 4.3.1 葡萄糖标准曲线的绘制 | 第81-82页 |
| 4.3.2 纤维素分解菌的分离筛选 | 第82-83页 |
| 4.3.3 纤维素分解菌的鉴定 | 第83-85页 |
| 4.3.4 纤维素分解菌Bacillus sublitis BY-2 的生长特性 | 第85-86页 |
| 4.3.5 CMCase的酶学特性分析 | 第86-88页 |
| 4.3.6 发酵条件对Bacillus sublitis BY-2 产CMCase的影响 | 第88-91页 |
| 4.4 讨论 | 第91-93页 |
| 4.4.1 纤维素分解菌的分离与筛选 | 第91页 |
| 4.4.2 纤维素分解菌Bacillus subtilis BY-2 的生长特性 | 第91页 |
| 4.4.3 CMCase的酶学特性 | 第91-92页 |
| 4.4.4 发酵条件对Bacillus subtilis BY-2 产酶的影响 | 第92-93页 |
| 4.5 小结 | 第93-94页 |
| 第五章 藏猪源Bacillus subtilis BY-2 纤维素酶基因的克隆表达 | 第94-104页 |
| 5.1 引言 | 第94页 |
| 5.2 材料与方法 | 第94-98页 |
| 5.2.1 材料 | 第94-95页 |
| 5.2.2 方法 | 第95页 |
| 5.2.3 引物设计 | 第95页 |
| 5.2.4 Bacillus sublitis BY-2 纤维素酶基因的克隆及表达 | 第95-98页 |
| 5.3 结果与分析 | 第98-102页 |
| 5.3.1 Bacillus sublitis BY-2 纤维素酶基因egls-BY的克隆 | 第98页 |
| 5.3.2 纤维素酶基因egls-BY的序列分析 | 第98-99页 |
| 5.3.3 纤维素酶蛋白结构预测 | 第99-100页 |
| 5.3.4 纤维素酶基因egls-BY的原核表达 | 第100-101页 |
| 5.3.5 纤维素酶基因egls-BY表达产物的SDS-PAGE分析 | 第101-102页 |
| 5.4 讨论 | 第102-103页 |
| 5.4.1 纤维素酶基因的克隆 | 第102页 |
| 5.4.2 纤维素酶基因egls-BY的表达及SDS-PAGE分析 | 第102-103页 |
| 5.5 小结 | 第103-104页 |
| 第六章 藏猪源Bacillus sublitis BY-2 的益生特性研究 | 第104-116页 |
| 6.1 引言 | 第104页 |
| 6.2 材料和方法 | 第104-109页 |
| 6.2.1 材料 | 第104-105页 |
| 6.2.2 方法 | 第105-109页 |
| 6.2.3 数据统计分析 | 第109页 |
| 6.3 结果与分析 | 第109-112页 |
| 6.3.1 Bacillus subtilis BY-2 的耐热能力 | 第109页 |
| 6.3.2 Bacillus subtilis BY-2 耐人工胃液能力 | 第109-110页 |
| 6.3.3 Bacillus subtilis BY-2 的耐人工肠液和耐胆盐能力 | 第110-111页 |
| 6.3.4 Bacillus sublitis BY-2 的抑菌特性 | 第111页 |
| 6.3.5 Bacillus sublitis BY-2 对细胞的毒性和粘附试验 | 第111-112页 |
| 6.4 讨论 | 第112-115页 |
| 6.4.1 Bacillus sublitis BY-2 的耐热性 | 第113页 |
| 6.4.2 Bacillus sublitis BY-2 的耐酸性 | 第113页 |
| 6.4.3 Bacillus sublitis BY-2 的耐人工肠液和耐胆盐性 | 第113-114页 |
| 6.4.4 Bacillus sublitis BY-2 的抑菌特性 | 第114页 |
| 6.4.5 Bacillus sublitis BY-2 对猪小肠上皮细胞的毒性及粘附特性 | 第114-115页 |
| 6.5 小结 | 第115-116页 |
| 结论 | 第116-117页 |
| 创新点 | 第117页 |
| 进一步研究的问题 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-135页 |
| 附录 | 第135-142页 |
| 缩略词 | 第142-143页 |
| 致谢 | 第143-144页 |
| 作者简介 | 第144页 |
