论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 文献综述 | 第14-38页 |
| 第一章 皮肤源干细胞的研究进展 | 第14-27页 |
| 1.1 皮肤的结构与功能 | 第14-15页 |
| 1.2 表皮干细胞的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.3 毛囊干细胞的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.4 皮肤源性前体细胞的研究进展 | 第21-23页 |
| 1.5 Muse细胞的研究进展 | 第23-27页 |
| 第二章 体细胞核移植后核重编程的研究进展 | 第27-38页 |
| 2.1 体细胞核移植研究进展 | 第27-31页 |
| 2.1.1 体细胞核移植研究概述 | 第27-28页 |
| 2.1.2 影响体细胞核移植重编程效率的因素 | 第28-31页 |
| 2.2 供体细胞的分化程度对重编程的影响 | 第31-38页 |
| 2.2.1 干细胞的作为供体细胞的重编程效率 | 第32-34页 |
| 2.2.2 Muse细胞的重编程 | 第34-38页 |
| 试验研究 | 第38-82页 |
| 第三章 牛皮肤源SSEA4阳性细胞的分离与培养 | 第38-51页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第38-39页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第38页 |
| 3.1.2 试剂 | 第38-39页 |
| 3.2 方法 | 第39-43页 |
| 3.2.1 牛胎儿皮肤成纤维细胞的培养 | 第39页 |
| 3.2.2 免疫磁珠法（MASC）分选SSEA4阳性细胞 | 第39-40页 |
| 3.2.3 SSEA4阳性细胞和阴性细胞的后续培养 | 第40页 |
| 3.2.4 碱性磷酸酶染色检测 | 第40页 |
| 3.2.5 免疫荧光染色检测 | 第40页 |
| 3.2.6 PCR检测 | 第40-42页 |
| 3.2.7 流式细胞分析 | 第42页 |
| 3.2.8 透射电镜观察 | 第42页 |
| 3.2.9 体外诱导分化实验 | 第42页 |
| 3.2.10 裸鼠畸胎瘤实验 | 第42页 |
| 3.2.11 数据统计 | 第42-43页 |
| 3.3 结果 | 第43-49页 |
| 3.3.1 牛胎儿成纤维细胞的分离培养 | 第43页 |
| 3.3.2 SSEA4在牛胎儿皮肤成纤维细胞中的表达 | 第43-44页 |
| 3.3.3 SSEA4阳性细胞的磁珠分选与培养 | 第44-45页 |
| 3.3.4 SSEA4阳性细胞多能性检测 | 第45-46页 |
| 3.3.5 SSEA4阳性细胞的增殖特性检测 | 第46-47页 |
| 3.3.6 SSEA4阳性细胞的表达间质细胞特性 | 第47-48页 |
| 3.3.7 体外向三胚层分化和畸胎瘤试验 | 第48-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-50页 |
| 3.5 小结 | 第50-51页 |
| 第四章 酶消化法分离牛皮肤源Muse细胞 | 第51-63页 |
| 4.1 材料和试剂 | 第51-52页 |
| 4.1.1 材料 | 第51页 |
| 4.1.2 试剂 | 第51-52页 |
| 4.2 方法 | 第52-54页 |
| 4.2.1 胰酶处理胎儿成纤维细胞时间的优化 | 第52页 |
| 4.2.2 Muse细胞的分离和培养 | 第52页 |
| 4.2.3 AP染色 | 第52页 |
| 4.2.4 Muse细胞体外分化 | 第52页 |
| 4.2.5 端粒酶活性分析 | 第52页 |
| 4.2.6 胰酶应激处理过程中自噬的发生 | 第52-54页 |
| 4.2.7 数据统计 | 第54页 |
| 4.3 结果 | 第54-59页 |
| 4.3.1 胰酶应激处理不同时间的细胞活率 | 第54页 |
| 4.3.2 胰酶应激处理不同时间的细胞多能性 | 第54-55页 |
| 4.3.3 Muse细胞的分离与鉴定 | 第55页 |
| 4.3.4 Muse细胞的OCT4表达情况的检测 | 第55-56页 |
| 4.3.5 Muse细胞的免疫荧光染色 | 第56-57页 |
| 4.3.6 Muse细胞的悬浮培养 | 第57页 |
| 4.3.7 Muse细胞体外向三胚层分化 | 第57-58页 |
| 4.3.8 透射电镜观察自噬体 | 第58-59页 |
| 4.3.9 GFP-LC3转染成纤维细胞检测自噬体形成 | 第59页 |
| 4.3.10 Western Blotting检测LC3的表达 | 第59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-62页 |
| 4.5 小结 | 第62-63页 |
| 第五章 Muse细胞培养条件的优化 | 第63-73页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第63页 |
| 5.1.1 材料 | 第63页 |
| 5.1.2 试剂 | 第63页 |
| 5.2 方法 | 第63-65页 |
| 5.2.1 CCK8检测不同b FGF浓度下Muse细胞生长情况 | 第63-64页 |
| 5.2.2 不同浓度b FGF对Muse细胞AP阳性率检测 | 第64页 |
| 5.2.3 不同b FGF浓度下细胞Brd U掺入分析 | 第64页 |
| 5.2.4 QRT-PCR检测不同浓度b FGF下Muse细胞多能性基因表达情况 | 第64页 |
| 5.2.5 Muse细胞的悬浮培养 | 第64-65页 |
| 5.2.6 免疫荧光染色 | 第65页 |
| 5.2.7 体外分化能力检测 | 第65页 |
| 5.2.8 核型分析 | 第65页 |
| 5.2.9 统计分析 | 第65页 |
| 5.3 结果 | 第65-70页 |
| 5.3.1 不同浓度b FGF对Muse细胞生长和增殖的的影响 | 第65-67页 |
| 5.3.2 不同浓度b FGF对Mues细胞多能性的影响 | 第67页 |
| 5.3.3 Muse细胞的悬浮培养 | 第67-68页 |
| 5.3.4 悬浮培养Muse细胞多能性的鉴定 | 第68-69页 |
| 5.3.5 悬浮培养Muse细胞分化能力检测和核型分析 | 第69-70页 |
| 5.4 讨论 | 第70-72页 |
| 5.5 小结 | 第72-73页 |
| 第六章 Muse细胞核移植胚胎体外发育潜能的研究 | 第73-82页 |
| 6.1 材料与试剂 | 第74页 |
| 6.1.1 材料 | 第74页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第74页 |
| 6.2 方法 | 第74-76页 |
| 6.2.1 供体细胞的准备 | 第74页 |
| 6.2.2 卵母细胞的采集、成熟培养和去核 | 第74页 |
| 6.2.3 核移植及重构胚获得 | 第74-75页 |
| 6.2.4 胚胎免疫荧光染色 | 第75页 |
| 6.2.5 胚胎凋亡染色 | 第75页 |
| 6.2.6 QRT-PCR检测胚胎发育相关基因表达 | 第75页 |
| 6.2.7 试验设计 | 第75-76页 |
| 6.2.8 数据统计 | 第76页 |
| 6.3 结果 | 第76-79页 |
| 6.3.1 重构胚的体外发育 | 第76页 |
| 6.3.2 克隆胚胎质量：胚胎细胞数 | 第76-77页 |
| 6.3.3 各组克隆胚胎的质量：囊胚凋亡率 | 第77-78页 |
| 6.3.4 QRT-PCR检测各组囊胚发育相关基因表达水平 | 第78-79页 |
| 6.4 讨论 | 第79-81页 |
| 6.5 小结 | 第81-82页 |
| 全文总结 | 第82-83页 |
| 创新之处和进一步研究的课题 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-102页 |
| 附录 | 第102-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 个人简介 | 第108页 |
