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猕猴桃肌醇代谢对抗逆性和抗坏血酸形成的影响

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猕猴桃肌醇代谢对抗逆性和抗坏血酸形成的影响
论文目录
 
摘要第1-7页
ABSTRACT第7-14页
第一章 文献综述第14-30页
  1.1 肌醇的发现及命名第14页
  1.2 肌醇在动植物中的作用第14-16页
    1.2.1 肌醇在植物中的作用第14-16页
    1.2.2 肌醇在动物中的作用第16页
  1.3 肌醇及其衍生物的代谢第16-22页
    1.3.1 肌醇的合成途径第16-17页
    1.3.2 肌醇的降解途径第17-18页
    1.3.3 肌醇甲基化衍生物和糖苷类衍生物第18-19页
    1.3.4 多磷酸肌醇第19-20页
    1.3.5 磷脂酰肌醇及磷酸化的磷脂酰肌醇第20-22页
  1.4 肌醇与抗坏血酸的关系第22-23页
  1.5 肌醇合成和降解途径关键酶研究进展第23-27页
    1.5.1 肌醇1磷酸合酶第23-25页
    1.5.2 肌醇单磷酸酶第25-26页
    1.5.3 肌醇加氧酶第26-27页
  1.6 猕猴桃中肌醇研究现状第27-28页
  1.7 本研究的目的和意义第28-30页
第二章 猕猴桃肌醇1磷酸合酶、肌醇加氧酶基因克隆及表达分析第30-61页
  2.1 材料、试剂和仪器第30-31页
    2.1.1 试验材料第30页
      2.1.1.1 植物材料第30页
      2.1.1.2 菌株及质粒第30页
    2.1.2 酶及生化试剂第30页
    2.1.3 主要仪器第30-31页
  2.2 试验方法第31-38页
    2.2.1 美味猕猴桃‘秦美’MIPS的克隆和表达分析第31-33页
      2.2.1.1 猕猴桃RNA的提取第31页
      2.2.1.2 反转录第31页
      2.2.1.3 引物的设计第31页
      2.2.1.4 PCR扩增第31-32页
      2.2.1.5 扩增片段连接中间载体第32页
      2.2.1.6 阳性克隆的筛选与检测第32页
      2.2.1.7 阳性菌液测序第32页
      2.2.1.8 序列分析比对第32页
      2.2.1.9 AdMIPS的亚细胞定位第32页
      2.2.1.10 MIPS在美味猕猴桃果实不同发育期和不同组织的表达分析第32-33页
      2.2.1.11 AdMIPS酶活性的测定第33页
      2.2.1.12 干旱处理和盐处理第33页
    2.2.2 野生种猕猴桃中MIPS的克隆和表达分析第33-34页
      2.2.2.1 RNA的提取和反转录第33页
      2.2.2.2 MIPS基因的克隆、测序和序列分析第33-34页
      2.2.2.3 实时定量PCR第34页
      2.2.2.4 MIPS酶活性的测定第34页
      2.2.2.5 肌醇和其它糖类含量的测定第34页
    2.2.3 美味猕猴桃‘秦美’MIOX4的克隆及表达分析第34-38页
      2.2.3.1 RNA的提取和反转录第34页
      2.2.3.2 引物的设计第34-35页
      2.2.3.3 cDNA第一链的合成第35-36页
      2.2.3.4 Rapid Amplification of cDNA Ends (RACE)第36-38页
      2.2.3.5 MIOX4的实时定量分析第38页
    2.2.4 数据分析第38页
  2.3 结果与分析第38-59页
    2.3.1 美味猕猴桃‘秦美’MIPS的克隆和表达分析第38-47页
      2.3.1.1 猕猴桃RNA的提取第38-39页
      2.3.1.2 反转录cDNA第39页
      2.3.1.3 扩增片段的克隆第39页
      2.3.1.4 测序结果的分析第39-43页
      2.3.1.5 AdMIPS的亚细胞定位第43-44页
      2.3.1.6 实时定量PCR分析第44-45页
      2.3.1.7 MIPS酶活性分析第45页
      2.3.1.8 干旱和盐胁迫下美味猕猴桃MIPS的表达分析第45-47页
    2.3.2 野生种猕猴桃中MIPS的克隆和表达分析第47-57页
      2.3.2.1 栽培种和野生种猕猴桃MIPS序列分析和比对第47-53页
      2.3.2.2 实时定量PCR分析第53-54页
      2.3.2.3 MIPS酶活性分析第54-55页
      2.3.2.4 肌醇和其它糖类的含量及比例分析第55-57页
    2.3.3 美味猕猴桃MIOX的克隆及表达分析第57-59页
      2.3.3.1 3’ RACE第57页
      2.3.3.2 5’ RACE第57-58页
      2.3.3.3 序列拼接第58页
      2.3.3.4 MIOX4在不同组织中的表达第58-59页
  2.4 小结第59-61页
第三章 猕猴桃MIPS基因干扰对抗坏血酸形成、植株形态和抗逆性的影响第61-89页
  3.1 材料、试剂和仪器第61-62页
    3.1.1 试验材料第61页
      3.1.1.1 植物材料第61页
      3.1.1.2 菌株及质粒第61页
    3.1.2 酶及生化试剂第61页
    3.1.3 主要仪器第61-62页
  3.2 试验方法第62-66页
    3.2.1 干扰载体的构建第62-63页
    3.2.2 外植体的建立第63页
    3.2.3 转化猕猴桃第63-64页
    3.2.4 抗性植株的Southern杂交检测第64-65页
    3.2.5 AdMIPS在转基因植株中的表达第65页
    3.2.6 肌醇和可溶性糖含量的测定第65页
    3.2.7 抗坏血酸含量的测定第65页
    3.2.8 其它生理指标的测定第65页
    3.2.9 转基因植株的干旱和盐胁迫处理及指标测定第65-66页
      3.2.9.1 干旱和盐胁迫处理第65页
      3.2.9.2 指标测定第65-66页
    3.2.10 数据分析第66页
  3.3 结果与分析第66-88页
    3.3.1 抗性植株的检测第66-68页
      3.3.1.1 DNA水平的PCR检测和Southern杂交检测第66-68页
      3.3.1.2 cDNA水平的PCR检测第68页
    3.3.2 转基因植株叶片AdMIPS表达分析第68-69页
    3.3.3 叶片肌醇和抗坏血酸含量的检测第69-70页
    3.3.4 转基因植株生理指标的测定第70-74页
    3.3.5 干旱和盐胁迫下转基因植株生理指标和基因表达测定第74-88页
  3.4 小结第88-89页
第四章 讨论第89-94页
  4.1 猕猴桃MIPS的高度保守性第89页
  4.2 幼果期是猕猴桃肌醇积累的主要时期第89-90页
  4.3 猕猴桃MIPS受非生物逆境的调控第90-91页
  4.4 猕猴桃MIPS在各组织中分布的普遍性第91-92页
  4.5 降低猕猴桃肌醇含量对抗坏血酸含量和抗逆性的影响第92-94页
第五章 结论和主要创新点第94-96页
参考文献第96-110页
缩略词第110-112页
致谢第112-113页
作者简介第113页

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