论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-36页 |
| 1 金龙胆草概述 | 第15-16页 |
| 2 攀西地区概述 | 第16-17页 |
| 3 植物次生代谢有效成分的含量测试方法 | 第17-22页 |
| 3.1 植物次生代谢物的主要类型 | 第17-20页 |
| 3.1.1 萜烯类化合物 | 第17-18页 |
| 3.1.2 酚类化合物 | 第18-19页 |
| 3.1.3 含氮有机物及其它 | 第19-20页 |
| 3.2 植物黄酮和萜类成分的提取和测定方法 | 第20-22页 |
| 3.2.1 植物黄酮和萜类成分的提取方法 | 第20-21页 |
| 3.2.2 植物黄酮和萜类成分的检测方法 | 第21-22页 |
| 4 植物遗传多样性研究现状及趋势 | 第22-28页 |
| 4.1 形态学标记 | 第22-23页 |
| 4.2 细胞学标记 | 第23页 |
| 4.3 DNA分子标记 | 第23-28页 |
| 4.3.1 DNA分子标记的分类 | 第24-25页 |
| 4.3.2 RAPD分子标记 | 第25页 |
| 4.3.3 SCAR标记 | 第25-26页 |
| 4.3.4 SRAP标记 | 第26-28页 |
| 5 药用植物关键酶基因研究现状 | 第28-33页 |
| 5.1 类黄酮类化合物的生物合成途径和基因调控 | 第28-29页 |
| 5.2 萜类化合物的生物合成途径和基因调控 | 第29-33页 |
| 6 本研究的目的和内容 | 第33-36页 |
| 6.1 立题依据 | 第33页 |
| 6.2 目的意义 | 第33-34页 |
| 6.3 研究内容和技术路线 | 第34-36页 |
| 6.3.1 研究内容 | 第34-35页 |
| 6.3.2 技术路线 | 第35-36页 |
| 第二章 金龙胆草植物形态研究 | 第36-44页 |
| 1 引言 | 第36页 |
| 2 材料与方法 | 第36-37页 |
| 2.1 金龙胆草实验材料 | 第36页 |
| 2.2 金龙胆草资源调查 | 第36-37页 |
| 2.3 金龙胆草扫描电镜叶片观察 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-42页 |
| 3.1 金龙胆草植物资源调查 | 第37-38页 |
| 3.2 金龙胆草植物形态 | 第38-40页 |
| 3.3 金龙胆草叶片扫描电镜观测结果 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 金龙胆草有效次生代谢物和无机元素含量测定 | 第44-75页 |
| 1 引言 | 第44页 |
| 2 材料和方法 | 第44-51页 |
| 2.1 金龙胆草植物材料 | 第44页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第44-45页 |
| 2.2.1 无机元素测量仪器与主要试剂 | 第44-45页 |
| 2.2.2 次生代谢物测量仪器与主要试剂 | 第45页 |
| 2.3 实验方法 | 第45-51页 |
| 2.3.1 仪器工作参数 | 第45-46页 |
| 2.3.2 金龙胆草样品溶液的制备 | 第46-47页 |
| 2.3.3 标准溶液制备 | 第47-50页 |
| 2.3.4 金龙胆草抗氧化研究 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-73页 |
| 3.1 金龙胆草中无机元素的含量测定 | 第51-54页 |
| 3.1.1 无机元素线性关系及方法考察 | 第51-52页 |
| 3.1.2 金龙胆草12种无机元素含量 | 第52-54页 |
| 3.2 金龙胆草总黄酮含量的测定 | 第54-59页 |
| 3.2.1 芦丁最大吸收波长和标准曲线的确立 | 第54-55页 |
| 3.2.2 金龙胆草总黄酮提取单因素实验结果 | 第55-56页 |
| 3.2.3 响应面优化金龙胆草总黄酮提取工艺实验结果 | 第56-58页 |
| 3.2.4 不同来源地金龙胆草总黄酮含量的测试结果 | 第58-59页 |
| 3.3 金龙胆草芦丁、槲皮素含量的测定 | 第59-61页 |
| 3.3.1 标准曲线的建立和方法检验 | 第59-60页 |
| 3.3.2 金龙胆草芦丁和槲皮素含量测定结果 | 第60-61页 |
| 3.4 响应面法优化金龙胆草总皂苷含量的提取工艺 | 第61-67页 |
| 3.4.1 齐墩果酸最大吸收波长和标准曲线的确立 | 第61页 |
| 3.4.2 金龙胆草总皂苷提取单因素实验结果 | 第61-62页 |
| 3.4.3 响应面优化金龙胆草总皂苷提取实验结果 | 第62-66页 |
| 3.4.4 不同来源地金龙胆草总皂苷含量的测试结果 | 第66-67页 |
| 3.5 金龙胆草苦蒿素含量的测定 | 第67-69页 |
| 3.5.1 苦蒿素标准曲线的确立 | 第67-68页 |
| 3.5.2 金龙胆草苦蒿素含量的测定 | 第68-69页 |
| 3.6 金龙胆草抗氧化研究 | 第69-70页 |
| 3.6.1 DPPH自由基清除能力 | 第69页 |
| 3.6.2 羟自由基清除能力 | 第69-70页 |
| 3.7 金龙胆草有效成分的聚类分析 | 第70-73页 |
| 4 讨论 | 第73-75页 |
| 第四章 金龙胆草分子标记研究 | 第75-106页 |
| 1 引言 | 第75页 |
| 2 材料和试剂 | 第75-77页 |
| 2.1 金龙胆草实验材料 | 第75页 |
| 2.2 实验仪器与试剂 | 第75-77页 |
| 3 实验方法 | 第77-83页 |
| 3.1 金龙胆草DNA提取和检验 | 第77页 |
| 3.2 金龙胆草的RAPD研究 | 第77-79页 |
| 3.2.1 金龙胆草RAPD-PCR反应体系的优化 | 第77-79页 |
| 3.2.2 金龙胆草RAPD引物筛选 | 第79页 |
| 3.2.3 金龙胆草RAPD遗传多样性分析 | 第79页 |
| 3.3 金龙胆草的SRAP研究 | 第79-81页 |
| 3.3.1 金龙胆草SRAP银染检测体系的优化 | 第79-80页 |
| 3.3.2 金龙胆草SRAP-PCR反应体系的优化 | 第80-81页 |
| 3.3.3 金龙胆草SRAP引物筛选 | 第81页 |
| 3.3.4 金龙胆草SRAP遗传多样性分析 | 第81页 |
| 3.4 金龙胆草RAPD-SCAR标记转化 | 第81-83页 |
| 3.4.1 金龙胆草RAPD特异片段回收 | 第81-82页 |
| 3.4.2 金龙胆草SCAR标记的转化 | 第82页 |
| 3.4.3 大肠杆菌感受态的制备(TSS法) | 第82页 |
| 3.4.4 金龙胆草PCR产物的回收、连接和转化 | 第82-83页 |
| 3.4.5 金龙胆草SCAR标记的应用研究 | 第83页 |
| 4 实验结果和分析 | 第83-103页 |
| 4.1 金龙胆草基因组DNA提取方法比较 | 第83-85页 |
| 4.2 金龙胆草RAPD标记研究结果 | 第85-90页 |
| 4.2.1 金龙胆草RAPD反应体系的优化结果 | 第85-86页 |
| 4.2.2 金龙胆草RAPD遗传多样性分析 | 第86-90页 |
| 4.3 金龙胆草SRAP研究结果 | 第90-96页 |
| 4.3.1 金龙胆草SRAP银染检测方法的优化结果 | 第90-91页 |
| 4.3.2 金龙胆草SRAP-PCR体系正交优化结果 | 第91-93页 |
| 4.3.3 金龙胆草SRAP引物筛选 | 第93页 |
| 4.3.4 金龙胆草SRAP遗传多样性分析 | 第93-96页 |
| 4.4 金龙胆草RAPD和SRAP数据整合分析 | 第96-98页 |
| 4.5 金龙胆草RAPD-SCAR转化与鉴别应用 | 第98-103页 |
| 4.5.1 金龙胆草RAPD特异片段的回收、克隆和测序 | 第98-99页 |
| 4.5.2 金龙胆草SCAR标记的转化 | 第99-100页 |
| 4.5.3 金龙胆草SCAR标记的应用研究 | 第100-103页 |
| 5 讨论 | 第103-106页 |
| 第五章 金龙胆草关键酶基因的克隆研究 | 第106-136页 |
| 1 引言 | 第106页 |
| 2 材料和方法 | 第106-116页 |
| 2.1 材料 | 第106-108页 |
| 2.1.1 植物材料和菌株 | 第106页 |
| 2.1.2 主要试剂和药品 | 第106-107页 |
| 2.1.3 主要溶液 | 第107-108页 |
| 2.1.4 培养基 | 第108页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第108页 |
| 2.2 实验方法 | 第108-116页 |
| 2.2.1 金龙胆草RNA的提取 | 第108-109页 |
| 2.2.2 第一链cDNA制备 | 第109页 |
| 2.2.3 PCR引物设计与合成 | 第109-111页 |
| 2.2.4 PCR反应体系和程序 | 第111-113页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态的制备(TSS法) | 第113页 |
| 2.2.6 PCR产物的回收、连接和转化 | 第113页 |
| 2.2.7 序列分析 | 第113页 |
| 2.2.8 金龙胆草CbCHS、CbβAS基因的半定量分析 | 第113-114页 |
| 2.2.9 金龙胆草CbCHS关键酶基因的原核表达 | 第114-116页 |
| 3 结果与分析 | 第116-133页 |
| 3.1 金龙胆草不同组织部位总RNA的提取 | 第116-117页 |
| 3.2 金龙胆草CbCHS基因的克隆研究 | 第117-126页 |
| 3.2.1 金龙胆草CbCHS基因cDNA与DNA序列PCR扩增 | 第117-118页 |
| 3.2.2 金龙胆草CbCHS基因的序列分析 | 第118-122页 |
| 3.2.3 花期金龙胆草不同组织部位CbCHS基因的半定量分析 | 第122-124页 |
| 3.2.4 金龙胆草CbCHS基因的原核表达 | 第124-126页 |
| 3.3 金龙胆草CbβAS基因的克隆研究 | 第126-133页 |
| 3.3.1 金龙胆草CbβAS基因cDNA序列PCR扩增 | 第126-127页 |
| 3.3.2 金龙胆草CbβAS基因的序列分析 | 第127-131页 |
| 3.3.3 花期金龙胆草不同组织部位CbβAS基因的半定量分析 | 第131-133页 |
| 4 讨论 | 第133-136页 |
| 结论与创新点 | 第136-139页 |
| 1 论文取得的结果 | 第136-137页 |
| 2 创新点 | 第137-139页 |
| 参考文献 | 第139-148页 |
| 致谢 | 第148-149页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第149页 |
