论文目录 | |
| 摘要 | 第11-15页 |
| ABSTRACT | 第15-20页 |
| 第一部分 | 第20-58页 |
| 1 单核细胞增生李斯特菌概述 | 第22页 |
| 2 单核细胞增生李斯特菌的致病力 | 第22-28页 |
| 3 单核细胞增生李斯特菌的致病机理 | 第28-30页 |
| 4 单核细胞增生李斯特菌的毒力因子及其调控 | 第30-52页 |
| 4.1 粘附与侵袭相关因子 | 第30-39页 |
| 4.2 细胞内增殖相关因子 | 第39-45页 |
| 4.3 细胞间迁移相关因子 | 第45-48页 |
| 4.4 单核细胞增生李斯特菌的毒力调控因子 | 第48-52页 |
| 5 单核细胞增生李斯特菌的抗酸应激作用 | 第52-56页 |
| 5.1 酸耐受反应 | 第52页 |
| 5.2 精氨酸脱亚胺酶和鲱精氨脱亚胺酶系统 | 第52-53页 |
| 5.3 F_0F_1-ATPase系统 | 第53-54页 |
| 5.4 谷氨酸脱羧酶系统 | 第54-56页 |
| 6 研究目的 | 第56-58页 |
| 第二部分 | 第58-198页 |
| 第一章 单核细胞增生李斯特菌谱系Ⅲ强毒株与弱毒株比较基因组 | 第60-112页 |
| 第一节 单核细胞增生李斯特菌强毒株与弱毒菌株的生物学特性 | 第60-79页 |
| 摘要 | 第60-61页 |
| 1 材料与方法 | 第61-69页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第61-62页 |
| 1.2 主要试剂 | 第62页 |
| 1.3 谱系Ⅲ菌株生化特性与基因分析 | 第62页 |
| 1.4 生长特性与溶脂溶血活性 | 第62-63页 |
| 1.5 小鼠毒力试验 | 第63-64页 |
| 1.6 粘附与侵袭试验 | 第64-65页 |
| 1.7 全菌多抗制备与免疫荧光 | 第65-66页 |
| 1.8 细胞间迁移试验 | 第66-68页 |
| 1.9 巨噬细胞内生长试验 | 第68-69页 |
| 2 结果 | 第69-79页 |
| 2.1 生化反应特性 | 第69页 |
| 2.2 毒力基因与看家基因分析 | 第69-73页 |
| 2.3 生长特性 | 第73页 |
| 2.4 溶脂与溶血表型 | 第73-74页 |
| 2.5 小鼠毒力 | 第74-75页 |
| 2.6 粘附与侵袭能力 | 第75页 |
| 2.7 全菌多抗效果 | 第75-76页 |
| 2.8 细胞间迁移能力 | 第76-78页 |
| 2.9 巨噬细胞中生存能力 | 第78-79页 |
| 第二节 单核细胞增生李斯特菌谱系Ⅲ强毒株与弱毒株全基因组比较 | 第79-90页 |
| 摘要 | 第79-80页 |
| 1 材料与方法 | 第80-82页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第80页 |
| 1.2 主要试剂 | 第80页 |
| 1.3 基因组DNA的提取 | 第80-81页 |
| 1.4 全基因组测序 | 第81-82页 |
| 1.5 基因组序列注释与分析 | 第82页 |
| 2 结果 | 第82-90页 |
| 2.1 基因组DNA的质量 | 第82页 |
| 2.2 强毒株与弱毒株基因组特点 | 第82-83页 |
| 2.3 强毒株与弱毒株基因组差异分析 | 第83-90页 |
| 第三节 前噬菌体对单核细胞增生李斯特菌致病力的影响 | 第90-109页 |
| 摘要 | 第90-91页 |
| 1 材料与方法 | 第91-97页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第91页 |
| 1.2 主要试剂 | 第91-92页 |
| 1.3 谱系Ⅲ强毒株与弱毒株特异性区域分析 | 第92-93页 |
| 1.4 基因缺失株的构建 | 第93-97页 |
| 1.5 粘附与侵袭试验 | 第97页 |
| 1.6 细胞间迁移试验 | 第97页 |
| 1.7 小鼠毒力试验 | 第97页 |
| 2 结果 | 第97-109页 |
| 2.1 20K、38K和44K特异区域的基因构成 | 第97-102页 |
| 2.2 20K、38K和44K特异区域在单增李斯特菌中的分布 | 第102-105页 |
| 2.3 20K、38K和44K缺失株的鉴定 | 第105-106页 |
| 2.4 20K、38K和44K区域缺失对单增李斯特菌致病力的影响 | 第106-109页 |
| 第四节 讨论 | 第109-112页 |
| 1 单核细胞增生李斯特菌谱系Ⅲ菌株的致病性 | 第109页 |
| 2 单核细胞增生李斯特菌比较基因组 | 第109-110页 |
| 3 前噬菌体对单核细胞增生李斯特菌致病性的影响 | 第110-112页 |
| 第二章 单核细胞增生李斯特菌谱系Ⅲ强毒株与弱毒株致病力差异机制的探索 | 第112-155页 |
| 第一节 主要毒力因子抗体制备与表达GFP的李斯特菌的构建 | 第112-122页 |
| 摘要 | 第112-113页 |
| 1 材料与方法 | 第113-118页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第113-114页 |
| 1.2 主要试剂 | 第114页 |
| 1.3 主要毒力因子表达质粒构建与诱导表达 | 第114-116页 |
| 1.4 蛋白纯化 | 第116页 |
| 1.5 抗体制备 | 第116-117页 |
| 1.6 构建表达GFP的单增李斯特菌 | 第117-118页 |
| 2 结果 | 第118-122页 |
| 2.1 原核表达质粒的鉴定 | 第118-119页 |
| 2.2 蛋白表达与纯化 | 第119页 |
| 2.3 抗体效价与特异性 | 第119-120页 |
| 2.4 GFP表达质粒的鉴定 | 第120页 |
| 2.5 表达GFP的单增李斯特菌的筛选 | 第120-121页 |
| 2.6 表达GFP的单增李斯特菌用于感染试验 | 第121-122页 |
| 第二节 活化型PrfA对单核细胞增生李斯特菌谱系Ⅲ强毒株与弱毒株致病力的影响 | 第122-137页 |
| 摘要 | 第122-123页 |
| 1 材料与方法 | 第123-129页 |
| 1.1 菌株与细胞及其培养条件 | 第123页 |
| 1.2 主要试剂 | 第123-124页 |
| 1.3 PrfA序列分析 | 第124页 |
| 1.4 受PrfA调控的毒力基因转录水平分析 | 第124-126页 |
| 1.5 强毒株与弱毒株prfA置换突变株的构建 | 第126-127页 |
| 1.6 溶脂溶血活性与细胞毒性 | 第127-128页 |
| 1.7 粘附与侵袭试验 | 第128页 |
| 1.8 细胞间迁移试验 | 第128页 |
| 1.9 小鼠毒力试验 | 第128-129页 |
| 2 结果 | 第129-137页 |
| 2.1 PrfA序列分析 | 第129页 |
| 2.2 PrfA调控的毒力基因转录水平 | 第129-130页 |
| 2.3 prfA突变株的溶脂溶血活性和细胞毒性 | 第130-132页 |
| 2.4 prfA突变株的粘附与侵袭能力 | 第132-134页 |
| 2.5 prfA突变株的细胞间迁移能力 | 第134-135页 |
| 2.6 prfA突变株对小鼠的致病力 | 第135-137页 |
| 第三节 单核细胞增生李斯特菌强毒株与弱毒株感染能力差异的分子基础探索 | 第137-152页 |
| 摘要 | 第137-138页 |
| 1 材料与方法 | 第138-143页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第138页 |
| 1.2 主要试剂 | 第138-139页 |
| 1.3 细菌表面蛋白和培养上清蛋白的提取 | 第139页 |
| 1.4 免疫印迹分析 | 第139-140页 |
| 1.5 质谱分析 | 第140页 |
| 1.6 细菌沉降试验 | 第140页 |
| 1.7 透射电镜 | 第140-141页 |
| 1.8 抗生素敏感性分析 | 第141页 |
| 1.9 分泌系统及细胞壁代谢相关基因差异分析 | 第141页 |
| 1.10 细胞壁代谢相关基因转录水平分析 | 第141-143页 |
| 2 结果 | 第143-152页 |
| 2.1 PrfA活化型菌株的相关毒力因子高表达 | 第143页 |
| 2.2 弱毒株M7中高表达的InlB不能有效锚定在细菌表面 | 第143-145页 |
| 2.3 差异蛋白质谱鉴定 | 第145页 |
| 2.4 ActA介导单增李斯特菌的沉降 | 第145-146页 |
| 2.5 细胞壁的透射电镜分析 | 第146页 |
| 2.6 对靶向细胞壁的抗生素的敏感性 | 第146-147页 |
| 2.7 李斯特菌分泌系统和细胞壁代谢相关基因的差异 | 第147-148页 |
| 2.8 李斯特菌细胞壁代谢相关基因转录水平分析 | 第148-152页 |
| 第四节 讨论 | 第152-155页 |
| 1 活化型PrfA与单核细胞增生李斯特菌的致病力的关系 | 第152-153页 |
| 2 毒力因子锚定与单核细胞增生李斯特菌致病力的关系 | 第153-155页 |
| 第三章 单核细胞增生李斯特菌谱系Ⅲ强毒株与弱毒株抗酸应激能力差异机制 | 第155-198页 |
| 第一节 单核细胞增生李斯特菌抗酸应激系统及其抗酸应激作用 | 第155-165页 |
| 摘要 | 第155-156页 |
| 1 材料与方法 | 第156-158页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第156页 |
| 1.2 主要试剂 | 第156-157页 |
| 1.3 抗酸应激系统比较 | 第157页 |
| 1.4 谷氨酸脱羧酶系统缺失株构建 | 第157-158页 |
| 1.5 抗酸应激试验 | 第158页 |
| 2 结果 | 第158-165页 |
| 2.1 强毒株与弱毒株的抗酸应激能力 | 第158-159页 |
| 2.2 强毒株与弱毒株的抗酸应激系统 | 第159-162页 |
| 2.3 谷氨酸脱羧酶系统基因缺失株的鉴定 | 第162页 |
| 2.4 不同抗酸应激系统的抗酸应激作用比较 | 第162-165页 |
| 第二节 单核细胞增生李斯特菌谷氨酸脱羧酶系统抗酸应激作用差异的基础 | 第165-176页 |
| 摘要 | 第165-166页 |
| 1 材料与方法 | 第166-170页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第166-167页 |
| 1.2 主要试剂 | 第167页 |
| 1.3 荧光定量PCR | 第167-168页 |
| 1.4 谷氨酸脱羧酶系统相关蛋白表达与抗体制备 | 第168页 |
| 1.5 免疫印迹 | 第168-169页 |
| 1.6 抗酸应激试验 | 第169-170页 |
| 2. 结果 | 第170-176页 |
| 2.1 谷氨酸脱羧酶系统相关基因转录水平分析 | 第170-171页 |
| 2.2 原核表达蛋白纯化与抗体制备 | 第171-173页 |
| 2.3 谷氨酸脱羧酶系统相关基因表达水平分析 | 第173-174页 |
| 2.4 谷氨酸脱羧酶系统表达量与抗酸应激能力的相关性 | 第174-176页 |
| 第三节 单核细胞增生李斯特菌谷氨酸脱羧酶系统的调控 | 第176-195页 |
| 摘要 | 第176-177页 |
| 1 材料与方法 | 第177-182页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第177页 |
| 1.2 主要试剂 | 第177-178页 |
| 1.3 谷氨酸脱羧酶系统报告基因的构建 | 第178-179页 |
| 1.4 酸应激对GAD系统的调控作用 | 第179-180页 |
| 1.5 应激调控因子SigB对谷氨酸脱羧酶系统的调控作用 | 第180页 |
| 1.6 GadR对GAD系统的调控作用 | 第180-181页 |
| 1.7 碱应激对GAD系统的调控作用 | 第181-182页 |
| 2 结果 | 第182-195页 |
| 2.1 不同菌株中谷氨酸脱羧酶系统启动子序列分析 | 第182-185页 |
| 2.2 不同菌株中报告基因的表达情况 | 第185-188页 |
| 2.3 酸应激对谷氨酸脱羧酶系统表达的影响 | 第188-189页 |
| 2.4 应激调控因子SigB对GAD系统的调控 | 第189-191页 |
| 2.5 GadR不参与调控谷氨酸脱羧酶系统 | 第191-192页 |
| 2.6 碱应激对谷氨酸脱羧酶系统的影响 | 第192-195页 |
| 第四节 讨论 | 第195-198页 |
| 1 单增李斯特菌的抗酸应激系统及其抗酸应激能力 | 第195-196页 |
| 2 单增李斯特菌谷氨酸脱羧酶系统的抗酸应激作用及其调控 | 第196-198页 |
| 全文结论 | 第198-200页 |
| 创新点 | 第200-202页 |
| 展望 | 第202-203页 |
| 参考文献 | 第203-224页 |
| 作者简介 | 第224-226页 |
| 攻读博士学位期间的科研成果 | 第226-228页 |
| 致谢 | 第228-229页 |
