论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 1 引言 | 第14-28页 |
| 1.1 类胡萝卜素概述 | 第14-15页 |
| 1.2 植物中类胡萝卜素的功能 | 第15-16页 |
| 1.3 植物类胡萝卜素的生物合成 | 第16-24页 |
| 1.3.1 植物类胡萝卜素的合成途径 | 第16-19页 |
| 1.3.2 植物类胡萝卜素的合成调控 | 第19-22页 |
| 1.3.3 植物类胡萝卜素的基因工程 | 第22-24页 |
| 1.4 西瓜果实类胡萝卜素的研究进展 | 第24-26页 |
| 1.5 本课题的立题依据及研究内容 | 第26-28页 |
| 1.5.1 立题依据 | 第26页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第26-28页 |
| 2 西瓜GGPS和PSY基因全长CDNA的克隆与序列分析 | 第28-46页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.2.1 植物材料、菌株及质粒 | 第28页 |
| 2.2.2 工具酶及生化试剂 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-32页 |
| 2.3.1 果实总RNA提取与cDNA合成 | 第29页 |
| 2.3.2 保守序列的扩增 | 第29-30页 |
| 2.3.3 5‘端和 3‘序列的扩增 | 第30-31页 |
| 2.3.4 全长序列的扩增 | 第31-32页 |
| 2.3.5 序列分析 | 第32页 |
| 2.4 结果与分析 | 第32-45页 |
| 2.4.1 果实总RNA的提取 | 第32页 |
| 2.4.2 GGPS基因全长的克隆 | 第32-34页 |
| 2.4.3 GGPS核酸与氨基酸序列分析 | 第34-39页 |
| 2.4.4 PSY基因全长的克隆 | 第39-40页 |
| 2.4.5 PSY核酸与氨基酸序列分析 | 第40-45页 |
| 2.5 小结 | 第45-46页 |
| 3 西瓜果实发育过程中类胡萝卜素的组成与其代谢相关酶基因的表达 | 第46-60页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.2.1 植物材料 | 第46-47页 |
| 3.2.2 工具酶及生化试剂 | 第47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-50页 |
| 3.3.1 果实瓤色的检测 | 第47页 |
| 3.3.2 果实类胡萝卜素的提取 | 第47-48页 |
| 3.3.3 类胡萝卜素的HPLC检测 | 第48页 |
| 3.3.4 果实总RNA提取与cDNA合成 | 第48页 |
| 3.3.5 荧光定量PCR引物设计 | 第48-50页 |
| 3.3.6 荧光定量PCR反应 | 第50页 |
| 3.3.7 数据分析 | 第50页 |
| 3.4 结果与分析 | 第50-56页 |
| 3.4.1 果实发育过程中瓤色的变化 | 第50-51页 |
| 3.4.2 果实发育过程中类胡萝卜素的组成 | 第51-54页 |
| 3.4.3 果实发育过程中类胡萝卜素代谢相关酶基因的表达 | 第54-55页 |
| 3.4.4 类胡萝卜素含量与其代谢相关酶基因表达量的相关性分析 | 第55-56页 |
| 3.5 讨论 | 第56-59页 |
| 3.6 小结 | 第59-60页 |
| 4 类胡萝卜素合成酶基因果实特异性表达载体的构建 | 第60-72页 |
| 4.1 引言 | 第60页 |
| 4.2 实验材料 | 第60-62页 |
| 4.2.1 植物材料、菌株及质粒 | 第60页 |
| 4.2.2 工具酶及生化试剂 | 第60-61页 |
| 4.2.3 培养基及主要试剂 | 第61页 |
| 4.2.4 PCR引物 | 第61-62页 |
| 4.3 实验方法 | 第62-64页 |
| 4.3.1 果实基因组DNA提取 | 第62页 |
| 4.3.2 果实总RNA提取与cDNA合成 | 第62页 |
| 4.3.3 PCR扩增 | 第62页 |
| 4.3.4 DNA酶切与连接 | 第62-63页 |
| 4.3.5 重组表达载体转化农杆菌 | 第63-64页 |
| 4.4 结果与分析 | 第64-70页 |
| 4.4.1 重组载体pAGPL1 的构建 | 第64-66页 |
| 4.4.2 重组表达载体pAGPL1-GGPS的构建 | 第66-68页 |
| 4.4.3 重组表达载体pAGPL1-PSY的构建 | 第68-69页 |
| 4.4.4 重组表达载体pAGPL1-LCYB的构建 | 第69页 |
| 4.4.5 重组表达载体转化农杆菌 | 第69-70页 |
| 4.5 讨论 | 第70-71页 |
| 4.6 小结 | 第71-72页 |
| 5 农杆菌介导GGPS基因对西瓜的遗传转化 | 第72-87页 |
| 5.1 引言 | 第72页 |
| 5.2 实验材料 | 第72-73页 |
| 5.2.1 植物材料及菌株 | 第72-73页 |
| 5.2.2 培养基及主要试剂 | 第73页 |
| 5.3 实验方法 | 第73-76页 |
| 5.3.1 西瓜子叶体外再生体系的建立 | 第73-74页 |
| 5.3.2 农杆菌介导西瓜遗传转化体系的建立 | 第74-76页 |
| 5.3.3 抗性苗的分子鉴定 | 第76页 |
| 5.4 结果与分析 | 第76-83页 |
| 5.4.1 西瓜子叶体外再生体系的建立 | 第76-79页 |
| 5.4.2 农杆菌介导西瓜遗传转化体系的建立 | 第79-82页 |
| 5.4.3 抗性苗的分子鉴定 | 第82-83页 |
| 5.5 讨论 | 第83-86页 |
| 5.5.1 西瓜子叶体外再生体系 | 第83-84页 |
| 5.5.2 农杆菌介导西瓜遗传转化体系 | 第84-86页 |
| 5.6 小结 | 第86-87页 |
| 6 番茄红素和β-胡萝卜素对癌细胞的作用及其机制 | 第87-98页 |
| 6.1 引言 | 第87页 |
| 6.2 实验材料 | 第87-89页 |
| 6.2.1 细胞材料 | 第87-88页 |
| 6.2.2 抗体及生化试剂 | 第88页 |
| 6.2.3 培养基及主要试剂 | 第88-89页 |
| 6.3 实验方法 | 第89-91页 |
| 6.3.1 MTT法检测细胞活力 | 第89页 |
| 6.3.2 Western Blotting检测蛋白表达 | 第89-91页 |
| 6.3.3 数据分析 | 第91页 |
| 6.4 实验结果 | 第91-95页 |
| 6.4.1 番茄红素和 β-胡萝卜素对癌细胞增殖的影响 | 第91-92页 |
| 6.4.2 番茄红素和 β-胡萝卜素对经GW9662 预处理细胞增殖的影响 | 第92-93页 |
| 6.4.3 番茄红素和 β-胡萝卜素对PPARγ 表达的影响 | 第93-94页 |
| 6.4.4 番茄红素和 β-胡萝卜素对p21WAF1/CIP1、Cyclin D1 和Cox-2 表达的影响 | 第94-95页 |
| 6.5 讨论 | 第95-97页 |
| 6.6 小结 | 第97-98页 |
| 7 结论与展望 | 第98-101页 |
| 7.1 结论 | 第98-99页 |
| 7.2 创新之处 | 第99-100页 |
| 7.3 研究展望 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-120页 |
| 附录 | 第120-125页 |
| 个人简历和文章发表情况 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126页 |
