论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 缩略词 | 第9-15页 |
| 1 前言 | 第15-27页 |
| 1.1 BT研究进展 | 第15-18页 |
| 1.1.1 Bt简介 | 第15-16页 |
| 1.1.2 Bt的作用机制及假说模型 | 第16-18页 |
| 1.2 Bt抗性现状 | 第18-20页 |
| 1.2.1 昆虫对Bt室内抗性 | 第19页 |
| 1.2.2 昆虫对Bt田间抗性 | 第19-20页 |
| 1.2.3 棉铃虫对Bt的抗性 | 第20页 |
| 1.3 昆虫对Bt抗性机制、受体和抗性治理策略 | 第20-21页 |
| 1.3.1 昆虫对Bt抗性的机制简介 | 第20-21页 |
| 1.3.2 昆虫中肠受体蛋白种类 | 第21页 |
| 1.3.3 Bt作物害虫抗性治理策略 | 第21页 |
| 1.4 植物的抗虫性 | 第21-24页 |
| 1.4.1 植物组成性防御 | 第21-22页 |
| 1.4.2 植物诱导性防御 | 第22-23页 |
| 1.4.3 虫害诱导的植物体内信号分子 | 第23-24页 |
| 1.4.4 棉花的防御功能 | 第24页 |
| 1.5 高通量测序技术 | 第24-26页 |
| 1.5.1 高通量测序技术简介 | 第24页 |
| 1.5.2 高通量测序技术的种类 | 第24-25页 |
| 1.5.3 转录组测序 | 第25页 |
| 1.5.4 RNA Seq原理 | 第25页 |
| 1.5.5 RNA Seq的技术优势 | 第25-26页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第26页 |
| 1.7 本研究目标 | 第26-27页 |
| 2 抗、感棉铃虫钙粘蛋白、氨肽酶-N和碱性磷酸酶基因毒素结合区克隆与分析 | 第27-40页 |
| 2.1 材料与方法 | 第27-34页 |
| 2.1.1 供试材料 | 第27-28页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 LB培养基及试剂的配制 | 第28页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第28-29页 |
| 2.1.5 技术路线 | 第29页 |
| 2.1.6 CAD、APN1和ALP1基因Cry1Ac毒素结合区克隆、测序 | 第29-34页 |
| 2.2 结果与分析 | 第34-38页 |
| 2.2.1 棉铃虫中肠总RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.2 CAD、APN1和ALP1基因毒素结合区的特异性扩增 | 第35页 |
| 2.2.3 CAD、APN1和ALP1基因Cry1Ac结合区EST分析 | 第35-38页 |
| 2.3 讨论 | 第38-40页 |
| 3 抗、感棉铃虫钙粘蛋白、氨肽酶-N和碱性磷酸酶时、空相对表达量比较 | 第40-58页 |
| 3.1 材料与方法 | 第40-44页 |
| 3.1.1 供试材料 | 第40-41页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第41页 |
| 3.1.4 技术路线 | 第41-42页 |
| 3.1.5 主要方法 | 第42页 |
| 3.1.6 引物的设计与合成 | 第42-43页 |
| 3.1.7 qPCR反应体系和程序 | 第43页 |
| 3.1.8 探针可靠性验证 | 第43页 |
| 3.1.9 数据分析及处理 | 第43-44页 |
| 3.2 结果与分析 | 第44-55页 |
| 3.2.1 结果与分析 | 第44页 |
| 3.2.2 探针的可靠性验证 | 第44-50页 |
| 3.2.3 CAD在抗、感棉铃虫世代历期中相对表达量分析 | 第50页 |
| 3.2.4 APN1在抗、感棉铃虫世代历期中相对表达量分析 | 第50-51页 |
| 3.2.5 ALP1在抗、感棉铃虫世代历期中相对表达量分析 | 第51-52页 |
| 3.2.6 CAD、APN1和ALP1在敏感品系不同组织中相对表达量分析 | 第52-53页 |
| 3.2.7 CAD、APN1和ALP1在抗性品系不同组织中相对表达量分析 | 第53-54页 |
| 3.2.8 CAD、APN1和ALP1同一龄期(初孵)不同抗性水平相对表达量分析 | 第54-55页 |
| 3.3 讨论 | 第55-58页 |
| 4 RNA干扰棉铃虫体内的钙粘蛋白、氨肽酶-N和碱性磷酸酶及其功能验证 | 第58-71页 |
| 4.1 材料和方法 | 第58-61页 |
| 4.1.1 供试材料 | 第58页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第58-59页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第59页 |
| 4.1.4 技术路线 | 第59-60页 |
| 4.1.5 主要方法 | 第60-61页 |
| 4.2 结果与分析 | 第61-69页 |
| 4.2.1 不同siCAD片段和不同时间点沉默效果 | 第61-62页 |
| 4.2.2 不同siAPN1片段和不同时间点沉默效果 | 第62-63页 |
| 4.2.3 不同siALP1片段和不同时间点沉默效果 | 第63-64页 |
| 4.2.4 有效siRNA注射后24小时沉默效果 | 第64-65页 |
| 4.2.5 RNA干扰后的幼虫体重抑制(Bt胁迫) | 第65页 |
| 4.2.6 RNA干扰后的幼虫死亡率(Bt胁迫) | 第65-66页 |
| 4.2.7 RNA干扰后的幼虫化蛹率(Bt胁迫) | 第66-67页 |
| 4.2.8 RNA干扰后的羽化率(Bt胁迫) | 第67-68页 |
| 4.2.9 RNA干扰ALP1后的死亡率、化蛹率及羽化率(非Bt胁迫) | 第68-69页 |
| 4.3 讨论 | 第69-71页 |
| 5 棉铃虫取食诱导棉花转录组变化测序 | 第71-80页 |
| 5.1 材料与方法 | 第71-76页 |
| 5.1.1 供试材料 | 第71-72页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第72页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第72页 |
| 5.1.4 棉苗栽培 | 第72-73页 |
| 5.1.5 技术路线 | 第73页 |
| 5.1.6 虫害胁迫 | 第73-74页 |
| 5.1.7 棉花总RNA的提取和纯化 | 第74-75页 |
| 5.1.8 cDNA合成 | 第75-76页 |
| 5.1.9 建库和测序 | 第76页 |
| 5.2 结果与分析 | 第76-78页 |
| 5.2.1 棉花总RNA提取 | 第76页 |
| 5.2.2 Solexa测序统计数据量与拼接Contig数量关系 | 第76-77页 |
| 5.2.3 Solexa测序统计总Reads数 | 第77页 |
| 5.2.4 EST拼装 | 第77-78页 |
| 5.3 讨论 | 第78-80页 |
| 6 棉铃虫取食诱导棉花转录组变化分析和抗虫基因的筛选 | 第80-91页 |
| 6.1 材料与方法 | 第80页 |
| 6.2 结果与分析 | 第80-89页 |
| 6.2.1 基因注释 | 第80页 |
| 6.2.2 GO分析 | 第80-82页 |
| 6.2.3 代谢通路构建 | 第82-84页 |
| 6.2.4 表达丰度分析 | 第84-86页 |
| 6.2.5 GO term类别富集分析 | 第86-88页 |
| 6.2.6 Pathway富集分析结果 | 第88页 |
| 6.2.7 两样本间基因显著性差异分析 | 第88-89页 |
| 6.2.8 不同时间点同时上调、下调的处理样本 | 第89页 |
| 6.2.9 抗性基因简单筛选 | 第89页 |
| 6.3 讨论 | 第89-91页 |
| 7 全文结论与讨论 | 第91-94页 |
| 7.1 全文结论 | 第91-93页 |
| 7.2 全文讨论 | 第93-94页 |
| 7.2.1 问题 | 第93页 |
| 7.2.2 展望 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-103页 |
| 附录 | 第103页 |
