论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 单位符号表 | 第13-14页 |
| 附录列表 | 第14-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-29页 |
| 1.1 蚜虫对小麦生产的危害 | 第15-16页 |
| 1.2 小麦抗虫研究现状 | 第16-19页 |
| 1.2.1 利用植物体内抗蚜次生物质防治蚜虫危害 | 第17页 |
| 1.2.2 利用植物体内植物挥发性次生物质防治蚜虫危害 | 第17-18页 |
| 1.2.3 抗蚜小麦转基因研究 | 第18-19页 |
| 1.3. RNAi技术 | 第19-23页 |
| 1.3.1 RNAi机制 | 第19-20页 |
| 1.3.2 RNAi的特点 | 第20-21页 |
| 1.3.3 RNAi技术在农业研究中运用 | 第21-23页 |
| 1.4 dsRNA导入虫体的方法 | 第23-25页 |
| 1.4.1 微注射法 | 第23-24页 |
| 1.4.2 掺入到饲料中饲喂 | 第24页 |
| 1.4.3 浸泡和微喷洒 | 第24-25页 |
| 1.5 蚜虫基因组研究进展 | 第25-26页 |
| 1.6 第二代测序技术(Next Generation Sequencing,"NGS") | 第26-27页 |
| 1.7 立题依据和创新 | 第27-28页 |
| 1.8 项目的预期目标 | 第28-29页 |
| 第二章 蚜虫转录组测序 | 第29-39页 |
| 2.1 材料与实验方法 | 第29-35页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第29页 |
| 2.1.2 蚜虫总RNA分离 | 第29-30页 |
| 2.1.3 mRNA分离 | 第30页 |
| 2.1.4 mRNA随机打断 | 第30-31页 |
| 2.1.5 双链cDNA合成 | 第31页 |
| 2.1.6 454文库构建 | 第31-32页 |
| 2.1.7 确定文库分子数 | 第32页 |
| 2.1.8 SV (Small Volume) emPCR | 第32-33页 |
| 2.1.9 LV (Large Volume) emPCR | 第33-34页 |
| 2.1.10 上机收集信号 | 第34-35页 |
| 2.2 实验结果与分析 | 第35-38页 |
| 2.2.1 RNA提取结果 | 第35页 |
| 2.2.2 文库质控指标 | 第35-37页 |
| 2.2.3 测序结果 | 第37-38页 |
| 2.3 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 蚜虫转录组分析 | 第39-68页 |
| 3.1 数据分析方法 | 第39-45页 |
| 3.1.1 序列预处理 | 第39页 |
| 3.1.2 序列组装 | 第39页 |
| 3.1.3 表达分析 | 第39-40页 |
| 3.1.4 Nt、Nr、Swissprot、KOG、KEGG和Go注释 | 第40-41页 |
| 3.1.5 唾液腺体和肠道特异基因筛选 | 第41页 |
| 3.1.6 蚜虫与人、小麦特异序列分析 | 第41-42页 |
| 3.1.7 unigenes的RPKM相对表达量值与qPCR相对表达量比较 | 第42-44页 |
| 3.1.8 进化压(Ka/Ks)分析 | 第44-45页 |
| 3.2 结果与分析 | 第45-63页 |
| 3.2.1 数据组装结果与分析 | 第45-47页 |
| 3.2.2 unigenes注释结果与分析 | 第47-48页 |
| 3.2.3 unigenes功能分类 | 第48-51页 |
| 3.2.4 麦蚜转录组序列Nt/Nr注释中最佳比配同源基因的物种统计 | 第51-52页 |
| 3.2.5 蚜虫特异表达基因分析(人和小麦无同源) | 第52-53页 |
| 3.2.6 唾液腺、消化系统表达的基因 | 第53页 |
| 3.2.7 unigenes的RPKM与qPCR相对表达量比较 | 第53-54页 |
| 3.2.8 麦蚜转录组和豌豆蚜mRNA差异分析 | 第54-57页 |
| 3.2.9 麦蚜和豌豆蚜间直系家族基因GC含量和CpG岛分布分析 | 第57-59页 |
| 3.2.10 进化压分析(Ka/Ks)结果 | 第59-63页 |
| 3.3 讨论 | 第63-67页 |
| 3.3.1 罗氏GS-FLX mRNA测序适合于转录组测序 | 第63页 |
| 3.3.2 罗氏GS FLX mRNA测序的技术优势 | 第63-64页 |
| 3.3.3 麦长管蚜中存在RNAi调控Pathway | 第64-66页 |
| 3.3.4 进化选择选择压分析结果 | 第66-67页 |
| 3.4 小结 | 第67-68页 |
| 第四章 抗蚜RNAi靶基因筛选 | 第68-87页 |
| 4.1 材料与实验方法 | 第68-75页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第68页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第68-75页 |
| 4.2 实验结果与分析 | 第75-81页 |
| 4.2.1 候选基因靶序列扩增结果 | 第75-77页 |
| 4.2.2 靶序列dsRNA饲喂蚜虫结果 | 第77-78页 |
| 4.2.3 目标靶在饲喂dsRNA后的蚜虫体内表达抑制结果 | 第78-80页 |
| 4.2.4 Cy3标记dsRNA饲喂蚜虫后示踪蚜虫 | 第80-81页 |
| 4.3 讨论 | 第81-85页 |
| 4.3.1 RNA-seq结合dsRNA体外饲喂是进行RNAi靶标基因筛选的有效方法 | 第81-82页 |
| 4.3.2 dsRNA吸收及RNAi系统效应 | 第82-84页 |
| 4.3.3 四个靶标基因的功能及蚜虫致死原因 | 第84-85页 |
| 4.4 小结 | 第85-87页 |
| 结论 | 第87-89页 |
| 博士后期间发表的文章及专利 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-96页 |
| 附录 | 第96-105页 |
