论文目录 | |
| 致谢 | 第1-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-21页 |
| 第一章 文献综述与研究目的 | 第21-40页 |
| 1.1 烟粉虱 | 第21-22页 |
| 1.1.1 烟粉虱概述 | 第21-22页 |
| 1.1.2 烟粉虱的危害现状 | 第22页 |
| 1.2 双生病毒概述及其危害 | 第22-27页 |
| 1.2.1 双生病毒科的分类、寄主范围及介体传播 | 第22-24页 |
| 1.2.2 双生病毒(菜豆金黄花叶病毒属)的基因组结构和功能 | 第24-26页 |
| 1.2.3 双生病毒危害 | 第26-27页 |
| 1.3 双生病毒与介体昆虫的互作 | 第27-35页 |
| 1.3.1 介体昆虫传播植物病毒的方式 | 第27-28页 |
| 1.3.2 双生病毒由烟粉虱经卵和交配传播 | 第28-29页 |
| 1.3.3 烟粉虱传播双生病毒的特异性及其机制 | 第29-31页 |
| 1.3.3.1 烟粉虱传播双生病毒的特异性 | 第29页 |
| 1.3.3.2 影响烟粉虱特异性传播双生病毒的器官 | 第29-30页 |
| 1.3.3.3 参与病毒循环传播的烟粉虱蛋白 | 第30页 |
| 1.3.3.4 双生病毒的外壳蛋白 | 第30-31页 |
| 1.3.4 内共生细菌对烟粉虱传毒的影响 | 第31-32页 |
| 1.3.5 双生病毒对烟粉虱的直接影响 | 第32-35页 |
| 1.3.5.1 双生病毒对烟粉虱存活和产卵的影响 | 第32-33页 |
| 1.3.5.2 双生病毒对烟粉虱取食行为的影响 | 第33-34页 |
| 1.3.5.3 双生病毒侵染对烟粉虱基因表达的影响 | 第34-35页 |
| 1.4 植物介导的双生病毒与烟粉虱互作 | 第35-38页 |
| 1.4.1 植物介导的双生病毒-烟粉虱互作的多样性 | 第35-36页 |
| 1.4.2 植物介导的双生病毒-烟粉虱互作的生理和分子机制 | 第36-38页 |
| 1.5 本研究目的与主要内容 | 第38-40页 |
| 1.5.1 本研究目的 | 第38-39页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第39-40页 |
| 第二章 基本材料和方法 | 第40-59页 |
| 2.1 基本材料 | 第40-44页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第40页 |
| 2.1.2 供试植物 | 第40-41页 |
| 2.1.3 供试病毒 | 第41页 |
| 2.1.4 感毒植物的获取 | 第41页 |
| 2.1.5 生态学相关仪器设备 | 第41-42页 |
| 2.1.6 分子生物学主要仪器设备 | 第42-43页 |
| 2.1.7 分子生物学常用试剂 | 第43-44页 |
| 2.2 基本实验方法 | 第44-59页 |
| 2.2.1 烟粉虱隐种鉴定方法(RFLP-PCR) | 第44-48页 |
| 2.2.1.1 烟粉虱总DNA的提取 | 第44页 |
| 2.2.1.2 PCR反应体系(20μL/份) | 第44页 |
| 2.2.1.3 PCR反应条件 | 第44-45页 |
| 2.2.1.4 TaqI酶切PCR产物 | 第45页 |
| 2.2.1.5 PCR产物的纯化、克隆及单菌落测序 | 第45-48页 |
| 2.2.1.5.1 PCR产物的纯化 | 第45-46页 |
| 2.2.1.5.2 PCR纯化产物连接 | 第46页 |
| 2.2.1.5.3 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第46页 |
| 2.2.1.5.4 大肠杆菌感受态细胞转化 | 第46-47页 |
| 2.2.1.5.5 测序 | 第47页 |
| 2.2.1.5.6 碱裂解法小量提取大肠杆菌质粒 | 第47-48页 |
| 2.2.2 重叠延伸PCR技术 | 第48-49页 |
| 2.2.3 重组质粒导入根癌农杆菌及植物接种 | 第49-50页 |
| 2.2.3.1 根癌农杆菌感受态细胞制备 | 第49页 |
| 2.2.3.2 重组质粒电击转化根癌农杆菌 | 第49-50页 |
| 2.2.3.3 农杆菌介导的植物接种 | 第50页 |
| 2.2.4 感毒植物和携毒烟粉虱的鉴定 | 第50-51页 |
| 2.2.4.1 植物基因组和携毒烟粉虱总DNA的提取 | 第50页 |
| 2.2.4.2 PCR检测植物和烟粉虱体内的病毒DNA | 第50-51页 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)技术 | 第51-54页 |
| 2.2.5.1 烟粉虱总RNA提取 | 第51-53页 |
| 2.2.5.2 烟粉虱cDNA合成 | 第53页 |
| 2.2.5.3 qPCR体系 | 第53-54页 |
| 2.2.5.4 (RT)qPCR数据分析 | 第54页 |
| 2.2.6 Western杂交(Western Blot,WB) | 第54-56页 |
| 2.2.6.1 烟粉虱总蛋白的提取 | 第54-55页 |
| 2.2.6.2 蛋白浓度测定 | 第55页 |
| 2.2.6.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第55页 |
| 2.2.6.4 电转移 | 第55-56页 |
| 2.2.6.5 Western印迹分析 | 第56页 |
| 2.2.7 Light microscopy(LM) | 第56-57页 |
| 2.2.8 荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization,FISH) | 第57页 |
| 2.2.9 免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF) | 第57-59页 |
| 第三章 双生病毒在烟粉虱体内的分布 | 第59-67页 |
| 3.1 基本材料 | 第60-61页 |
| 3.1.1 供试昆虫、植物和病毒 | 第60页 |
| 3.1.2 主要试剂和抗体 | 第60-61页 |
| 3.2 实验方法 | 第61页 |
| 3.2.1 MEAM1获取TYLCV | 第61页 |
| 3.2.2 烟粉虱器官的解剖与收集 | 第61页 |
| 3.2.3 免疫荧光定位 | 第61页 |
| 3.3 结果与分析 | 第61-65页 |
| 3.3.1 烟粉虱唾液腺、中肠及卵巢形态特征 | 第61-63页 |
| 3.3.2 TYLCV在烟粉虱中肠的分布 | 第63页 |
| 3.3.3 TYLCV在烟粉虱卵巢的分布 | 第63-64页 |
| 3.3.4 TYLCV在烟粉虱唾液腺的分布 | 第64-65页 |
| 3.4 讨论 | 第65-67页 |
| 第四章 烟粉虱特异性传播TYLCV及TYLCCNV的生理和分子机制 | 第67-92页 |
| 4.1 基本材料 | 第68页 |
| 4.1.1 供试昆虫、植物和病毒 | 第68页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第68页 |
| 4.2 实验方法 | 第68-74页 |
| 4.2.1 双生病毒经MEAM1或MED烟粉虱传播能力的检测 | 第68-69页 |
| 4.2.2 烟粉虱获取和存留TYLCCNV能力的检测 | 第69页 |
| 4.2.3 PCR检测双生病毒在烟粉虱各个组织及唾液中的分布 | 第69页 |
| 4.2.4 FISH检测双生病毒在烟粉虱中肠及唾液腺的分布 | 第69-70页 |
| 4.2.5 TYLCV和TYLCCNV CP互换的重组病毒的载体构建 | 第70-74页 |
| 4.2.6 双生病毒在烟粉虱唾液腺内的动态变化 | 第74页 |
| 4.3 结果与分析 | 第74-89页 |
| 4.3.1 烟粉虱不同隐种传播TYLCV及TYLCCNV的能力 | 第74页 |
| 4.3.2 烟粉虱获取和存留TYLCCNV能力的比较 | 第74-76页 |
| 4.3.3 TYLCCNV在烟粉虱各个组织及唾液的分布 | 第76-79页 |
| 4.3.4 烟粉虱不同隐种传播重组病毒的能力 | 第79-80页 |
| 4.3.5 重组病毒在烟粉虱体内的存留 | 第80-83页 |
| 4.3.6 双生病毒在烟粉虱唾液腺的动态变化 | 第83-89页 |
| 4.4 讨论 | 第89-92页 |
| 第五章 烟粉虱垂直传播TYLCV的生理及分子机制的初步探索 | 第92-113页 |
| 5.1 基本材料 | 第92-93页 |
| 5.1.1 供试昆虫、植物和病毒 | 第92-93页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第93页 |
| 5.2 实验方法 | 第93-98页 |
| 5.2.1 IF检测TYLCV在烟粉虱卵巢的分布 | 第93页 |
| 5.2.2 qPCR检测TYLCV在烟粉虱不同发育阶段的虫体及卵巢中的相对量 | 第93页 |
| 5.2.3 检测不同发育阶烟粉虱经卵传播TYLCV的能力 | 第93-94页 |
| 5.2.4 携带TYLCV的烟粉虱子代成虫侵染植物能力检测 | 第94-95页 |
| 5.2.5 qPCR检测Vg在烟粉虱不同发育阶段的相对表达量 | 第95页 |
| 5.2.6 IF共定位TYLCV和Vg在烟粉虱卵巢的分布 | 第95页 |
| 5.2.7 TYLCV CP和Vg的体外互作 | 第95-97页 |
| 5.2.8 饲喂烟粉虱Vg抗体对其F1代卵的带毒率的影响 | 第97-98页 |
| 5.3 结果与分析 | 第98-110页 |
| 5.3.1 免疫荧光定位TYLCV在MEAM1烟粉虱卵巢的分布 | 第98-99页 |
| 5.3.2 TYLCV在烟粉虱不同发育阶段的虫体及卵巢中的相对含量 | 第99-100页 |
| 5.3.3 TYLCV经由不同发育阶段烟粉虱垂直传播的特性 | 第100-101页 |
| 5.3.4 携带TYLCV的烟粉虱子代成虫侵染植物能力检测 | 第101-102页 |
| 5.3.5 qPCR检测Vg在烟粉虱不同发育阶段的相对表达量 | 第102-103页 |
| 5.3.6 免疫荧光共定位TYLCV和Vg在烟粉虱卵巢的分布 | 第103-106页 |
| 5.3.7 免疫共沉淀检测TYLCV CP和Vg的体内互作 | 第106-108页 |
| 5.3.8 饲喂烟粉虱Vg抗体后对其垂直传播病毒能力的影响 | 第108-110页 |
| 5.4 讨论 | 第110-113页 |
| 第六章 总讨论 | 第113-120页 |
| 6.1 本研究的特色和创新之处 | 第116页 |
| 6.2 本研究存在的问题 | 第116-117页 |
| 6.3 值得继续研究的问题 | 第117-120页 |
| 参考文献 | 第120-130页 |
