论文目录 | |
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-30页 |
| 1.1 副猪嗜血杆菌 | 第13-18页 |
| 1.1.1 病原学 | 第13-14页 |
| 1.1.2 毒力因子及致病机理 | 第14-17页 |
| 1.1.3 临床症状与病理变化 | 第17页 |
| 1.1.4 防制 | 第17-18页 |
| 1.2 蛋白质组学技术及应用 | 第18-22页 |
| 1.2.1 研究基础 | 第18-20页 |
| 1.2.2 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.2.3 蛋白质组学在兽医学研究中的应用 | 第21-22页 |
| 1.3 反向疫苗学 | 第22-23页 |
| 1.4 CDT毒素家族 | 第23-30页 |
| 1.4.1 CDT历史 | 第23-24页 |
| 1.4.2 CDT对哺乳细胞的毒性作用 | 第24-29页 |
| 1.4.3 CDT在细菌传染病中的作用 | 第29-30页 |
| 第2章 副猪嗜血杆菌全菌蛋白表达图谱的建立 | 第30-48页 |
| 2.1 前言 | 第30页 |
| 2.2 材料及方法 | 第30-34页 |
| 2.2.1 菌株及培养条件 | 第30页 |
| 2.2.2 主要仪器设备 | 第30页 |
| 2.2.3 主要化学试剂 | 第30-31页 |
| 2.2.4 胞浆蛋白的制备 | 第31页 |
| 2.2.5 外膜蛋白的制备 | 第31页 |
| 2.2.6 分泌蛋白的制备 | 第31页 |
| 2.2.7 双向电泳 | 第31-33页 |
| 2.2.8 染色 | 第33-34页 |
| 2.2.9 图像扫面及分析 | 第34页 |
| 2.2.10 酶解及MALDI-TOF-MS鉴定 | 第34页 |
| 2.2.11 生物信息学检索 | 第34页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第34-47页 |
| 2.3.1 HPS理论蛋白图谱 | 第34-35页 |
| 2.3.2 2-DE以及蛋白鉴定 | 第35-41页 |
| 2.3.3 比较鉴定蛋白的理论Mw和pI | 第41-42页 |
| 2.3.4 鉴定预测和试验蛋白 | 第42-45页 |
| 2.3.5 鉴定蛋白功能分类 | 第45页 |
| 2.3.6 鉴定OMPs | 第45-46页 |
| 2.3.7 鉴定参与铁离子代谢的蛋白 | 第46-47页 |
| 2.3.8 鉴定假设毒力因子 | 第47页 |
| 2.4 小结 | 第47-48页 |
| 第3章 副猪嗜血杆菌新型免疫原性蛋白的筛选和鉴定 | 第48-73页 |
| 3.1 副猪嗜血杆菌外膜蛋白免疫蛋白质组学研究 | 第48-63页 |
| 3.1.1 前言 | 第48页 |
| 3.1.2 材料与方法 | 第48-51页 |
| 3.1.3 结果 | 第51-62页 |
| 3.1.4 讨论 | 第62-63页 |
| 3.2 反向疫苗学鉴定HPS新型免疫原性外膜蛋白 | 第63-73页 |
| 3.2.1 前言 | 第63页 |
| 3.2.2 材料与方法 | 第63-65页 |
| 3.2.3 结果 | 第65-71页 |
| 3.2.4 讨论 | 第71-73页 |
| 第4章 副猪嗜血杆菌细胞膨胀毒素的鉴定与功能研究 | 第73-97页 |
| 4.1 前言 | 第73页 |
| 4.2 材料与方法 | 第73-77页 |
| 4.2.1 细胞培养及细胞周期分析 | 第73页 |
| 4.2.2 构建cdts重组质粒 | 第73-74页 |
| 4.2.3 表达纯化CdtA,CdtB和CdtC重组蛋白 | 第74页 |
| 4.2.4 CdtB DNase活性分析 | 第74-75页 |
| 4.2.5 GST pull-down和co-immunoprecipitation试验 | 第75页 |
| 4.2.6 细胞膜结合试验 | 第75-76页 |
| 4.2.7 CdtC中的CRAC位点分析 | 第76页 |
| 4.2.8 Western-blot分析CdtB在各血清型中的表达情况 | 第76页 |
| 4.2.9 Cdts免疫原性研究 | 第76-77页 |
| 4.3 结果 | 第77-94页 |
| 4.3.1 Cdts对细胞的毒性研究 | 第77-80页 |
| 4.3.2 CdtA,CdtB和CdtC亚单位在诱导细胞毒性过程中的作用 | 第80-81页 |
| 4.3.3 Cdts对不同细胞的敏感性研究 | 第81-84页 |
| 4.3.4 CdtB DNase活性研究 | 第84-85页 |
| 4.3.5 CdtA,CdtB和CdtC形成一个三重复合体发挥最大毒性 | 第85-86页 |
| 4.3.6 Cdts与细胞膜结合试验 | 第86-88页 |
| 4.3.7 胆固醇对Cdts引起细胞毒性的影响 | 第88-89页 |
| 4.3.8 Cdts是经过高尔基复合体进入核内发挥作用 | 第89页 |
| 4.3.9 CdtC含有一个非典型的CRAC位点 | 第89-91页 |
| 4.3.10 CdtB在各血清型中是保守表达的 | 第91-92页 |
| 4.3.11 Cdts的免疫原性研究 | 第92-94页 |
| 4.4 讨论 | 第94-97页 |
| 总结 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 附录 | 第115-116页 |
| 附件 | 第116-135页 |
