论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-28页 |
| 1.1 西洋参的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.1.1 西洋参的发现与功效研究 | 第12页 |
| 1.1.2 西洋参的种植与组织培养 | 第12-14页 |
| 1.2 人参皂苷的研究进展 | 第14-17页 |
| 1.2.1 人参皂苷的分类及主要作用 | 第14-16页 |
| 1.2.2 人参皂苷的分布及含量简析 | 第16-17页 |
| 1.3 人参皂苷的生物合成研究 | 第17-22页 |
| 1.3.1 人参皂苷的生物合成途径 | 第17-20页 |
| 1.3.2 人参皂苷生物合成途径的关键酶 | 第20-22页 |
| 1.4 RACE 技术研究进展 | 第22-23页 |
| 1.5 酿酒酵母表达系统的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.6 超表达调控研究进展 | 第24页 |
| 1.7 本研究的目的意义、主要内容、创新点及技术路线 | 第24-28页 |
| 1.7.1 研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 1.7.2 主要研究内容 | 第25页 |
| 1.7.3 本研究的创新点 | 第25-26页 |
| 1.7.4 技术路线 | 第26-28页 |
| 第2章 西洋参中 DS 基因与 P6H 基因的克隆扩增与序列分析 | 第28-50页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 实验材料及仪器 | 第28-30页 |
| 2.2.1 实验材料及试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.2 主要溶液的配制 | 第29-30页 |
| 2.2.3 主要仪器和设备 | 第30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-40页 |
| 2.3.1 RACE 法扩增基因全长的实验原理 | 第30-31页 |
| 2.3.2 西洋参 Total RNA 的提取 | 第31-32页 |
| 2.3.3 DS 与 P6H 的核心保守序列片段的克隆 | 第32-34页 |
| 2.3.4 RACE 法扩增基因 DS 与 P6H 的全长 | 第34-40页 |
| 2.3.5 生物信息学方法分析全长序列 | 第40页 |
| 2.4 结果及分析 | 第40-48页 |
| 2.4.1 西洋参 Total RNA 的提取 | 第40-41页 |
| 2.4.2 简并引物扩增基因 DS 与 P6H 的核心保守序列片段的结果 | 第41-42页 |
| 2.4.3 西洋参 DS 与 P6H 的全长序列扩增 | 第42-43页 |
| 2.4.4 基因的氨基酸序列分析 | 第43-45页 |
| 2.4.5 亲缘关系分析 | 第45-48页 |
| 2.5 讨论 | 第48-49页 |
| 2.6 本章小结 | 第49-50页 |
| 第3章 基因 PqDS 与 CYP6H 在酿酒酵母中的异源表达鉴定 | 第50-72页 |
| 3.1 引言 | 第50-51页 |
| 3.2 实验材料及仪器 | 第51-53页 |
| 3.2.1 实验材料及试剂 | 第51页 |
| 3.2.2 主要溶液的配制 | 第51-53页 |
| 3.2.3 主要仪器和设备 | 第53页 |
| 3.3 实验方法 | 第53-60页 |
| 3.3.1 基因 PqDS 与 CYP6H 开放阅读框序列的扩增 | 第53-54页 |
| 3.3.2 目的基因两端酶切位点的添加 | 第54-55页 |
| 3.3.3 异源表达载体的构建 | 第55-57页 |
| 3.3.4 重组酿酒酵母菌的构建 | 第57-58页 |
| 3.3.5 重组酵母菌的纯化培养及鉴定 | 第58页 |
| 3.3.6 重组酵母菌诱导培养 | 第58-59页 |
| 3.3.7 酵母菌中代谢产物提取 | 第59页 |
| 3.3.8 异源表达产物的高效液相色谱法检测 | 第59-60页 |
| 3.4 结果及分析 | 第60-68页 |
| 3.4.1 基因 PqDS 与 CYP6H 开放阅读框两端酶切位点的添加 | 第60-61页 |
| 3.4.2 重组表达载体构建图示原理 | 第61-63页 |
| 3.4.3 重组表达载体的双酶切鉴定 | 第63页 |
| 3.4.4 酿酒酵母菌生长曲线测定 | 第63-64页 |
| 3.4.5 重组酵母菌筛选鉴定 | 第64-65页 |
| 3.4.6 重组酵母菌代谢产物检测 | 第65-68页 |
| 3.5 讨论 | 第68-69页 |
| 3.6 本章小结 | 第69-72页 |
| 第4章 基因 PqDS、PqD12H 与 CYP6H 的异源共表达研究 | 第72-92页 |
| 4.1 引言 | 第72-73页 |
| 4.2 实验材料及仪器 | 第73-74页 |
| 4.2.1 实验材料及试剂 | 第73页 |
| 4.2.2 主要溶液的配制 | 第73页 |
| 4.2.3 主要仪器和设备 | 第73-74页 |
| 4.3 实验方法 | 第74-78页 |
| 4.3.1 重组表达载体的构建及筛选鉴定 | 第74-76页 |
| 4.3.2 异源共表达酵母菌的构建 | 第76-77页 |
| 4.3.3 重组酵母菌的生长曲线测定 | 第77页 |
| 4.3.4 重组酵母菌的提取物检测 | 第77页 |
| 4.3.5 标准曲线的绘制 | 第77-78页 |
| 4.4 结果及分析 | 第78-89页 |
| 4.4.1 重组表达载体 pAUR123-PqD12H 的构建及筛选鉴定 | 第78-82页 |
| 4.4.2 异源共表达重组酵母菌的筛选鉴定 | 第82-84页 |
| 4.4.3 重组酵母菌代谢产物检测 | 第84-88页 |
| 4.4.4 重组酵母菌生长曲线绘制 | 第88-89页 |
| 4.5 讨论 | 第89-90页 |
| 4.6 本章小结 | 第90-92页 |
| 第5章 基因 PqDS 与 CYP6H 基于超表达技术的表达调控研究 | 第92-118页 |
| 5.1 引言 | 第92页 |
| 5.2 实验材料及仪器 | 第92-95页 |
| 5.2.1 实验材料及试剂 | 第92-93页 |
| 5.2.2 主要溶液的配制 | 第93-94页 |
| 5.2.3 主要仪器和设备 | 第94-95页 |
| 5.3 实验方法 | 第95-100页 |
| 5.3.1 基因 PqDS 与 CYP6H 开放阅读框序列的扩增及酶切位点的添加 | 第95页 |
| 5.3.2 超表达载体的构建 | 第95-97页 |
| 5.3.3 超表达载体的鉴定筛选 | 第97页 |
| 5.3.4 超表达工程菌的构建 | 第97-98页 |
| 5.3.5 超表达工程菌的纯化培养及鉴定 | 第98页 |
| 5.3.6 西洋参超表达发根系的诱导转化 | 第98-99页 |
| 5.3.7 发根系中人参皂苷含量的测定 | 第99-100页 |
| 5.4 结果及分析 | 第100-113页 |
| 5.4.1 开放阅读框序列两端酶切位点的添加 | 第100-102页 |
| 5.4.2 超表达载体构建图示原理 | 第102-103页 |
| 5.4.3 超表达载体的双酶切鉴定 | 第103-104页 |
| 5.4.4 超表达工程菌的筛选鉴定 | 第104-105页 |
| 5.4.5 西洋参发根系的建立 | 第105-106页 |
| 5.4.6 不同工程菌诱导形成发根系的形态分析 | 第106页 |
| 5.4.7 发根系中总皂苷含量的测定 | 第106-108页 |
| 5.4.8 发根系中单体皂苷含量的测定 | 第108-113页 |
| 5.5 讨论 | 第113-115页 |
| 5.6 本章小结 | 第115-118页 |
| 第6章 总结与展望 | 第118-120页 |
| 6.1 总结 | 第118-119页 |
| 6.2 展望 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-134页 |
| 在学期间的学术成果及参加的科研项目情况 | 第134-136页 |
| 致谢 | 第136页 |
